שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Ross, P. A., Axford, J. K., Richardson, K. M., Endersby-Harshman, N. M., Hoffmann, A. A. Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia. J. Vis. Exp. (126), e56124, doi:10.3791/56124 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Aedes aegypti יתושים נגועים השפעול Wolbachia מנוצל ב תוכניות כדי לשלוט על התפשטות arboviruses כגון קדחת דנגה, chikungunya Zika. Wolbachia-יתושים נגועים יכול להשתחרר לתוך השדה גם להפחית את אוכלוסיית גדלים באמצעות matings לא תואמת או להפוך אוכלוסיות עם יתושים המהווים עקשן וירוס שידור. אסטרטגיות אלו להצליח, היתושים שוחרר לתוך השדה מהמעבדה חייב להיות תחרותי עם יתושים מקורית. עם זאת, שמירה על יתושים במעבדה יכול לגרום נישואי קרובים, סחף גנטי, עיבוד מעבדה אשר יכול להפחית את הכושר שלהם בתחום עשויים לבלבל את התוצאות של ניסויים. כדי לבדוק את התאמתו של זיהומים שונים Wolbachia לפריסה בשטח, זה הכרחי לשמור על יתושים בסביבה מעבדתית מבוקרת על פני דורות רבים. אנו מתארים פרוטוקול פשוטים לשמירה על יתושים Ae. aegypti במעבדה, אשר מתאים הן Wolbachia-יתושים נגועים ופראי-סוג. השיטות למזער מעבדה הסתגלות וליישם outcrossing כדי להגביר את הרלוונטיות של ניסויים כדי שדה יתושים. בנוסף, מושבות נשמרים בתנאים אופטימליים כדי למקסם את הכושר שלהם עבור מהדורות בשטח פתוח.

Introduction

Aedes aegypti יתושים אחראים להעברת חלק arboviruses החשוב ביותר בעולם, לרבות קדחת דנגה, Zika ו- chikungunya1. וירוסים אלה הופכים איום גובר על הבריאות העולמי ההתפלגות הנפוצה של Ae. aegypti באזורים הטרופיים ממשיך להרחיב את2,3,4. נקבה Ae. aegypti מעדיפים ניזונים דם אנושי5 , ולכן נוטים בקרבה לבני אדם, במיוחד באזורים עירוניים איפה אוכלוסיות הצפופים ביותר. באמצעות הקשר הזה קרוב עם בני אדם הם הסתגלו גם להתרבות בבתי גידול מלאכותיים, כולל צמיגים, סירים, מרזבים מים טנקים6,7. Aegypti Ae. גם ברצון להתאים לסביבות מעבדה שבה הם יכול להישמר ללא כל דרישות מיוחדות לאחר איסוף ישירות מהשדה, בניגוד כמה מינים אחרים סוג אאדס 8, 9,10. שלהם קלות התחזוקה ראה אותם למד נרחב במעבדה במגוון רחב של תחומים, בסופו של דבר במטרה לשלוט היתושים מחלות יכולה לשדר.

באופן מסורתי, arboviral שליטה מתבסס בעיקר על שימוש חומרי הדברה כדי להפחית אוכלוסיות יתוש. עם זאת, יש עניין גובר על גישות בהם יתושים ששונה גדלו במעבדה, ואז שוחרר לאוכלוסיות טבעי. היתושים שפורסמו עשוי להיות שונה גנטית11,12,13, ביולוגית14,15, דרך הקרנה16, טיפול כימי17,18, או עם בשילוב טכניקות19 לדכא אוכלוסיות של יתושים או להחליף אותם עם יתושים כי הם דברים מעוותים שידור arboviral20.

Wolbachia הם חיידקים כיום בשימוש כסוכן הדברה ביולוגית של arboviruses. זנים שונים של Wolbachia שהוכנסו לאחרונה Ae. aegypti השפעול באמצעות עובריים microinjection21,22,23,24. זנים אלו להפחית את היכולת של arboviruses להפיץ, לשכפל, היתוש, הולכת ופוחתת שלהם שידור פוטנציאליים23,25,26,27,28 . זיהומים Wolbachia מועברים מאמא לצאצאים, אולם זנים מסוימים לגרום עקרות כאשר נגוע זכרים להזדווג עם נקבות נגוע22. Wolbachia-זכרים הנגוע ולכן יכול להיות משוחרר בכמויות גדולות כדי לדכא אוכלוסיות יתושים טבעי, הפגין לאחרונה15,מינים אחרים אאדס 29. עם זאת, מאז Wolbachia לעכב גם שידור arboviral ב Ae. aegypti, יתושים יכולים גם להשתחרר כדי להחליף את אוכלוסיות מקומיות וקטורים עניים. Ae. aegypti השפעול נגוע Wolbachia עכשיו שוחררו בתוך השדה במספר מדינות באמצעות זה הצגנו14,30,31.

Wolbachia-גישות מבוססות עבור פקד arboviral להסתמך על הבנה צליל של האינטראקציות בין Wolbachia, היתוש ואיכות הסביבה. Wolbachia להתרחש באופן טבעי במגוון רחב של חרקים, זנים מוחדרים יתושים מגוונים ב שלהם אפקטים32. כמו סוגים חדשים של זיהום Wolbachia הם מוחדרים Ae. aegypti24, זה הכרחי לאפיין כל אסנן והשפעותיהם על כושר יתושים, רבייה, הפרעה arboviral תחת מגוון תנאים. ניסויים קפדניות במעבדה ולכן נדרש להעריך את פוטנציאל Wolbachia זנים להצליח בתחום.

שדה פתוח מהדורות של Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia יכול לעיתים קרובות דורשים אלפי עד עשרות אלפי יתושים לפי אזור שחרור להיות גדלו כל שבוע14,30,31. ניתן לשפר את ההצלחה של מהדורות הראשונית על ידי שחרור יתושים בגודל גדול להגדיל את פוריות33 ,34,הצלחה35ההזדווגות שלהם. היתושים צריך גם להתאים את התנאים שהם יחוו בשטח, אולם לטווח ארוך מעבדה לגידול עלולה לגרום לשינויים בהתנהגות, פיזיולוגיה אשר יכול להשפיע על שדה ביצועים36,37, 38.

אנו מתארים פרוטוקול פשוט לגידול Ae. aegypti במעבדה בעזרת ציוד בסיסי. פרוטוקול זה מתאים הן פראי-סוג של Wolbachia-נגוע היתושים, שהאחרון שבהם תוכל לדרוש תשומת לב מיוחדת כמו כמה זנים Wolbachia יש השפעות משמעותי על יתושים חיים-היסטוריה תכונות39, 40. התנאים rearing למנוע צפיפות יתר ותחרות לאוכל לייצר יתושים בגודל אחיד, אשר הוא קריטי עבור וקטור כשירות וניסויים כושר, והוא מבטיח היתושים יהיו בריאים לשחרור שדה41 . אנחנו גם לוקחים אמצעי הזהירות האפשריים כדי למזער את עיבוד מעבדה ואת נישואי קרובים על-ידי הפחתת לחצים בררניים, להבטיח כי הדור הבא נדגמים מתוך מאגר גדול, אקראי. עם זאת, סביבות מעבדה הן שונה במובהק מתנאי שדה, תחזוקה לטווח הארוך בתנאים רגועים יכול להפחית את הכושר של יתושים עם שחרורם לתוך שדה37,42,43 . לכן נחצה נקבות משורות מעבדה זכרים שנאספו שדה מעת לעת, וכתוצאה מכך המושבות אשר דומים גנטי להשוואות ניסיוני, שהם להתאים יעד אוכלוסייה של שדה39. השיטות אינן דורשות שום ציוד מיוחד, וניתן לשנותם האחורי עשרות אלפים של אנשים בכל שבוע עבור שדה לעיתונות. הפרוטוקול קובע סדר עדיפויות של גם בחדר הכושר של יתושים בתוך ועל -פני דורות, שיקול חשוב עבור חרקים המיועדים הממסד באוכלוסיות טבעיות. הפרוטוקול מתאים ברוב מעבדות הדורשים תחזוקה של Ae. aegypti, במיוחד להשוואות ניסיוני איפה חשובים איכות עקבית של יתושים, relatability לשדה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

דם האכלה של יתושים בנושאים האנושית אושרה על ידי אוניברסיטת מלבורן ועדת האתיקה האנושית (אישור #: 0723847). כולם מתנדבים בתנאי הודיע הסכמה בכתב.

1. זחל לגידול

הערה: יתושים נערכים 26 ± 0.5 ° C ו- 50-70% לחות יחסית, עם photoperiod h (בהירה: כהה) 12:12 עבור פרוטוקול תחזוקה זה המושבה. תנאים אלה דומים הממוצע לתנאי האקלים באוסטרליה, קיירנס, בטווח תרמי מיטבי עבור Ae. aegypti הישרדות, פיתוח44,45,46. טמפרטורות גבוהות יכול לגרום לאובדן של זיהומים Wolbachia מן המושבות נגד יתושים, נמנעה47. אנו מקפידים על יחידים לפחות 500 לכל האוכלוסייה כדי למזער את נישואי קרובים; שמירה על מושבות של גודל קטן יותר יכולות להיות השלכות כושר [רוס. et al. לא פורסם]. תחת תנאים אלו בהנחה תזונה נאותה, הזמן הדור הממוצע הוא 28 ימים (ראה טבלה 1).

  1. להטביע את הביצים על המצע במגשים (איור 1 א') המכיל 3 לליטר מים (מים אוסמוזה הפוכה או מי ברז בגילאי, שנוצר על ידי השארת ברז במגשים עבור 24 שעות לפני השימוש), ~ 300 מ"ג מזון דגים (אחד כתוש לוח, ראה טבלה של חומרים) ו- a כמה גרגרי שמרים יבשים פעילים לזירוז הבקיעה48.
  2. יום אחד לאחר הבקיעה, להשתמש פיפטה מזכוכית כדי להעביר כ 500 הזחלים המגשים המכילים 4 ליטרים של מים (איור 1B), נחשב באמצעות מונה השלט. להוסיף שתי טבליות מזון דגים כתוש בכל מגש. אם יש צורך, להשתמש מיכלים בגדלים שונים לגידול הזחלים (איור 1 א'), אך לשמור על צפיפות זחל מתחת הזחלים 0.5/mL כדי למנוע צפיפות יתר.
  3. בדוק את המגשים מדי יום כדי לוודא הזחלים אין די מזון; להוסיף כ שתי טבליות מזון המגשים בכל יומיים. לספק מזון ad libitum אך להבטיח 0.5 מ"ג ליום/זחל הינו זמין במהלך תקופה זו כדי להבטיח פיתוח באופן סינכרוני ועל גוף בגודל מתאים, אחרת עלול להיות מבולבל את התוצאות של הניסויים (ראה תוצאות נציג).
  4. לטפל כדי למנוע את overfeeding של הזחלים, במיוחד בתוך מכולות גידול קטן יותר עם פחות מים פני השטח והנפח. אם המים נראה מעונן או אם יש תמותה זחל משמעותית, להחליף אותו עם מים מתוקים; התמותה צריך להיות זניחה אם הזחלים ניזונים בצורה אופטימלית.

2. הבוגרים

הערה: הזחלים יתחיל pupate של חמישה ימים לאחר הבקיעה אם שתאכל היטב, הרוב צריך pupate על ידי שבעה ימים לאחר הבקיעה. מבוגרים יתחיל המתעוררים כ יומיים לאחר להתגלמות אם מתוחזק בצורה אופטימלית בטמפרטורה 26 ° C (ראה תוצאות נציג). התפתחות הזחל אינו מושפע בדרך כלל על ידי זיהומים Wolbachia כאשר מזון מסופק39,23,49.

  1. שבעה ימים לאחר הבקיעה שופכים את כל התוכן של המגש דרך רשת קנס (נקבוביות בגודל 0.4 מ מ). לשמור את הזחל מים מסוננים לשימוש מאוחר יותר ovicups (ראו סעיף "דם האכלה, הטלה"). להפוך את רשת השינוי וטובל לתוך מיכל פלסטיק עם 200 מ של מים כדי להעביר את הגלמים. לספק מזון נוסף אם יישארו כל הזחלים.
  2. הכינו את הכלובים הבוגרים (איור 1C) על ידי מתן שתי כוסות 10% סוכרוז הפתרון (איור 1F) שתי כוסות צמר גפן לחה כדי למנוע לייבוש (איור 1E).
  3. אם הגלמים אין צורך למיין לפי מין, למקם את המכולות מכסה של הגלמים לתוך הכלוב ולא להשאיר את המכסה במקצת כדי לאפשר המבוגרים להסתמן לתוך הכלוב. לחלופין, הצב של משפך מהופך מעל המיכל כדי למזער את טובעת. ודא שכולנו מבוגרים הופיעו לפני הסרת הגורם המכיל מן הכלוב כדי למנוע בחירה נגד המפתחים איטי.

3. הגולמי סקסיייי עבור Outcrossing

  1. אם הגלמים צריך להיות ממוין לפי מין (למשל, עבור outcrossing), pipette הגלמים מ מגשים זחל ולהפריד בין המינים (איור 2) לתוך מיכלי פלסטיק (איור 1 א') עם 200 מ של מים בכל 24 שעות עד המספר הרצוי מכל מין הגיעה. במקום המכסים על המכולות ולהשאיר אותן סגורות.
  2. מבוגרים יתעוררו לתוך המכולות; לאשר את מינם לפני שחרור לתוך הכלובים (איור 2C). הסר מבוגרים למינים באופן שגוי עם העצמות בתוך 24 שעות של הופעתה לפני שהם מגיעים לבגרות מינית. ברגע המינים אושרו, שחרור המבוגרים לתוך הכלובים כל 24 שעות.
  3. להשיג Wolbachia-נגועים מושבות רקע גנטי דומה לאוכלוסייה הטבעית, outcross על-ידי הוספת Wolbachia-נגוע הנקבות מן המושבות מעבדה לכלובים של הזכרים נגוע נגזר מן הביצים שנאספו על ידי ovitraps ב שדה39, שמירה על הצפיפות שנקבעה של יחידים 500 לכל האוכלוסייה.
    1. חזור על outcrossing לפחות שלושה דורות רצופים לייצר מושבות דומה גנטית האוכלוסייה שדה39לפחות 87.5%. קריטית: להבטיח כי המינים נכונים בשלב זה (ראה שלב 3.1).
  4. נקבה aegypti Ae. הם בדרך כלל דברים מעוותים הזרעה נוספת בטווח של הזדווגות50שעות. כאשר outcrossing מושבות, מאפשרים את נקבות וזכרים בוגרים בכלובים נפרדים במשך יומיים, ואז האחות הנקבות לתוך הכלוב זכר לספק הזדמנות שווה כל הזכרים.

4. דם האכלה, ההטלה

  1. המתן לפחות שלושה ימים לאחר שהנקבה האחרונה התפתחה לפני דם האכלה כדי לאפשר מספיק זמן להבשיל. דם להאכיל הנקבות תוך שבועיים של הופעתה כדי למנוע תמותת יתר, במיוחד עבור יתושים עם זיהומים Wolbachia המשפיעים לרעה על אריכות ימים22,24,49. הסר את כוסות סוכר ביום שלפני האכלה כדי לשפר את שיעורי האכלה.
    1. בקש מתנדבים כדי להוסיף את האמה שלהם לתוך הכלוב כדי לאפשר את היתושים הנשי להאכיל. רוב הנקבות צריך להאכיל כסיגנל בתוך 5 דקות, אבל כדי לצמצם את הבחירה נגד מזיני איטי, להשאיר האמה בכלוב במשך 15 דקות, או עד כל הנשים מתפקעים בעליל; כפפת לייטקס על היד מפני עקיצות הוא אופציונלי אך מומלץ.
    2. יומיים לאחר דם האכלה, מניחים שתי כוסות פלסטיק המכיל הזחל מים לגידול והעמידו עם רצועת נייר זכוכית (איור 1 ג'י) (או נייר סינון (איור 1 H)) לתוך הכלוב לנקבות להטיל ביצים. חלקית להטביע את רצועת נייר זכוכית במים כדי לשמור על לחות. הסר את מקורות אחרים של מים כדי למנוע הנקבות הנחת את ביציהן בחוץ בגביע ההטלה.
      הערה: ניתן להשתמש במי ברז בגביע, אבל חינוך הזחל מים מעודדת ההטלה51,52 , הנקבות להטיל את ביציהם יותר באופן סינכרוני.

5. ביצה אוסף, מיזוג

  1. הנקבות להטיל ביצים על מה בדיוק מעל קו המים; לאסוף ולהחליף את הרצועות של נייר זכוכית מדי יום עד אין יותר הביצים מוטלות. הערה שהטלה הזה עשוי להמשך עד שבוע.
  2. סביר להניח שאני חלקית יבש רצועות על ידי בעדינות סופג אותן על מגבת נייר ל 30 s, מטפל לא להוציא את הביצים. לאחר מכן, לעטוף את הרצועות בסדין של מגבת נייר יבש ומניחים אותו לתוך שקית ניילון sealable (איור 1I).
  3. בדוק את המצב של הביצים במיקרוסקופ ויבתר (איור 3). אם רצועות נייר זכוכית הם רטובים מדי, ייתכן בוקעות לפני להיות שקוע בתוך המים (איור 3B), אבל אם מיובש בקשיחות, ביצים עשויה לקרוס (איור 3C).
  4. הביצים ניתן לתכנון בכל עת מעבר אוסף שלאחר שלושה ימים; יבקעו כל הביצים מהמושבה לכל, שנאספו לרוחב כל הימים, באותה אריזה של מים על מנת להבטיח כי הדור הבא נדגמים מתוך מאגר גדול, אקראית של אנשים.
  5. לאחסון לטווח ארוך, לשמור את הביצים בתוך מיכל חתום על לחות גבוהה (> 80 אחוז) בסביבות 20 מעלות צלזיוס. בתנאים אלה, ניתן לאחסן ביצים ללא Wolbachia במשך מספר חודשים תוך שמירה על הפתח גבוהה המחירים53,54.
  6. כמו כמה זיהומים Wolbachia לצמצם במידה ניכרת את הכדאיות של ביצים עם גיל49,55, לדגור על הביצים מפני Wolbachia-נגוע קווים בתוך שבוע אחד של אוסף כדי למנוע תמותה מופרז עבור הרלוונטי זנים. דם להאכיל הנקבות שוב אחרי שבוע אם ביצים יותר יש צורך.
היום שלב
0 הפתח ביצים
1 ספירת הזחלים במגשים
7 להעביר את הזחלים, גלמי המושבה בכלובים
17 דם להאכיל בוגרות
21 בגין איסוף ביצים
25 סיום איסוף ביצים
28 הפתח ביצים

טבלה 1: סקירה של לוח הזמנים תחזוקה של המושבה Ae. aegypti בגיל 26 מעלות צלזיוס העיתוי של הדם-ההזנה הנשי, את הבקיעה ביצים הוא גמיש, אבל המשכים ארוכים בשלבים אלה יש להימנע, במיוחד עבור יתושים נגועים Wolbachia, על מנת לצמצם את התמותה. בעקבות לוח זמנים זה ממזער את הבחירה נגד יתושים המהווים מהירה או איטית לפתח או בוגר בכל שלבי החיים, ובלבד הזחלים ניזונים בצורה אופטימלית.

Figure 1
איור 1: ציוד המשמש לגידול Ae. aegypti במעבדה. מיכלי פלסטיק (א), המשמש עבור ביצים או לגידול הזחלים עם אמצעי אחסון של 500, 750 ו- 5,000 mL (משמאל לימין). מגשים (B) המשמש לגידול הזחלים על צפיפות מבוקרת, בדרך כלל 500 הזחלים ב- 4 ליטרים של מים. (ג) 19.7 L ו- (D) 3 L כלובים המשמש עבור דיור למבוגרים. צפיפות של מבוגרים 25 או פחות לליטר צריך להישמר לספק מספיק שטח פנוי. (E) 35 מ ל כוס עם צמר גפן לח סיפק כמקור מים למבוגרים. (F) 35 מ ל גביע עם סוכרוז פתרון מסופקים באמצעות כבל או הפתיל שיניים כמקור של סוכר. (HG) כוסות מלאות מים לגידול זחל, הרצוף המצע ההטלה של נייר זכוכית או נייר סינון (G ו- H, בהתאמה). (אני) Zip-lock תיק לאחסון של רצועות נייר זכוכית או נייר סינון כתמים שחורים על נייר זכוכית הם יתושים ביצים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: לרוחב (א) ו הגבי (ב) נופים של הגלמים למבוגרים Ae. aegypti (ג) הממחיש את דו-צורתיות. זכרים ממוקמות בצד ימין וגם נקבות מצד ימין של כל לוח. כאשר מוזן באופן מיטבי, גלמי זכרים ונקבות נבדלים על ידי גודל; הנקבות גדולות מן הזכרים (A) ויש cephalothorax בולבוסי יחסית לעומת גברים אשר יש צדדים להחמיא (B). גברים מבוגרים הם בקלות להבחין בין הנקבות בתנאים rearing כל, בעיקר על ידי שלהם אנטנה plumose, קאלאמרי ארוך. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3. בן יום ארבע ביצים Ae. aegypti בתנאים שונים. (א) Intact משפיעה על רצועות נייר זכוכית לשמור על לחות גבוהה (> 80 אחוז) אך ללא לחות לעין. המחירים הפתח צריך להיות מעל 90% עבור פראי-סוג Ae. aegypti אם יתוחזק כראוי. ביצים (B) שבוקעים לפני להיות שקוע במים (הבקיעה מפותחת) נבדלים על ידי קאפ מנותקת ביצה זחל גלוי. אפשרות זו מציינת כי רצועת נייר זכוכית נשמר לח מדי. ביצים (C) עוברות ייבוש תלגמי עלול לקרוס, הם נראים בבירור על ידי מראה קעורה שלהם. אם סביר להניח שאני הופכת נוקשה זה גם מציין כי הביצים עשוי להיות יבש מדי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

איור 4 ממחישה את ההשפעות של תזונה שיוצרת על הפיתוח של Ae. aegypti הזחלים. מתי מכולות מסופקים עם 0.25 מ ג של מזון לכל זחל ליום או פחות, מגביר את קצב ההתפתחות עבור זכרים ונקבות, סינכרונית פחות מאשר במיכלים מסופק עם 0.5 מ ג של מזון. אם במזון הולם זה אינו מסופק בכל משך זמן של התפתחות הזחל, זה יכול להשפיע לרעה על לוח הזמנים תחזוקה. סלואו-פיתוח אנשים נמצאים בסיכון של נבחרים נגד דם האכלה עשוי להתעכב, יש סיכון גבוה יותר של תמותה למבוגרים לפני רבייה מתרחשת.

איור 5 מראה את אורך כנף (הערכה של גודל הגוף) של מבוגרים Ae. aegypti גדלו תחת מגוון משטרים תזונה. אגף אורכים של זכרים ונקבות להקטין באופן משמעותי ולהיות יותר משתנה כאשר התזונה היא שיוצרת. גוף אחיד כל הגדלים חשוב להשוואות ניסיוני כפי גודל הגוף קשורה באופן חיובי עם פוריות, יתושים גדולים צפויים להפגין כושר גדול תחת השדה תנאי33,34,35 .

ההשפעות של זיהומים Wolbachia על התכונות לעיל מתוארים מחקרים אחרים אבל בדרך כלל יש מעט39,23,49אין השפעה.

Figure 4
איור 4: אחוז מצטבר של Ae.aegypti (א) נקבות וזכרים (ב) פיתוח לבגרות תחת משטרים מזון שונים בטמפרטורה 26 ° c 100 הזחלים שמשקל מיכלי מים 500 מ ל (זחל צפיפות של הזחלים 0.2 לכל mL), מסופק עם רמות שונות של מזון (ראה טבלה של חומרים) הבקיע עבור זמן פיתוח שלהם. נכללו רק הזחלים ששרדו עד לבגרות. קווי שגיאה הן שגיאות סטנדרטי, עם n = 4 משכפל לכל טיפול. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5: אורך הזרוע של Ae.aegypti (א) נקבות וזכרים (ב) פיתוח תחת משטרים מזון שונים בטמפרטורה 26 ° c הזחלים 100 היו מופשטים ומנותחים מיכלי 500 מ"ל מים (צפיפות זחל של הזחלים 0.2 לכל mL) וסיפק עם רמות שונות של מזון. תת-קבוצה של מבוגרים נמדדה ואז לכל אורך הזרוע שלהם על-ידי שימוש בשיטות שתוארו56. קווי שגיאה הן סטיות תקן. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

בעקבות פרוטוקול המובאת כאן לשם קיום Wolbachia-נגועים aegypti Ae. עליך לוודא כי יתושים בריא איכות עקבית מיוצרים לניסויים, פתח שדה לעיתונות. בניגוד פרוטוקולים אחרים זה סדר עדיפויות בייצור המוני כמויות היתושים (ראה התייחסות57), השיטות הם התמקדו למקסם את הכושר שלהם, הן בתוך דורות על-ידי יישום התנאים לגידול רגועה, ועל -פני דורות על-ידי מזעור הסתגלות נישואי קרובים, בחירה, מעבדה. פרוטוקול זה גם מיועד במיוחד עבור Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia , אבל צריך להיות מתאימים לכל סוג של Ae. aegypti. עם זאת, היא לא מתאימה לגידול כמויות המונית (לפי סדר מיליונים בשבוע), אשר יכול להיות צורך משחרר חרקים סטרילי או לא תואם את מחייבים מספרים גבוהים להשיג את האוכלוסייה-דיכוי-57,-58.

יש כמה שלבים קריטיים שיש אחריו בקפידה. חשוב להאכיל את הזחלים באופן מיטבי ולמנוע צפיפות יתר משך זמן הפיתוח שלהם. פעולה זו תבטיח כי היתושים לפתח באופן סינכרוני, הן בגודל אחיד. טיפול מיוחד גם לנקוט בעת מיזוג הביצים; הזחלים ניתן בקלות רבה בוקעים מוקדם מדי או ביצים יכול וכשתתחילי אם סובסטרטים ההטלה הם יותר מדי רטוב או יבש, בהתאמה. -כל השלבים בפרוטוקול, אנו ממליצים לאפשר מספיק זמן עבור אנשים רבים במושבה ככל האפשר כדי להשלים כל שלב. הבחירה נגד אנשים באיטיות לפתח, בוגר, דם הזנה, oviposit או בוקעות צפויה להוביל לאובדן וריאציה גנטית.

נציין מספר שיקולים נוספים לתחזוקת של Wolbachia-נגוע יתושים המתוארות לא בפרוטוקול לעיל. זה אפשרי עבור Wolbachia הידבקויות יאבדו מן המושבות מעבדה, לכן מומלץ כי מושבות באופן שגרתי לפקח על מצב הזיהום שלהם Wolbachia . אנו משתמשים פולימראז כמותית-תגובת שרשרת (qPCR)-49,-59 לבדוק לפחות 30 אנשים בודדים בכל Wolbachia-נגוע קו בכל דור. אם יחידים שליליות בשביל הזיהום Wolbachia המתאים, מושבות יכול להיטהר על ידי בידוד נקבות רבות ככל האפשר מן המושבה המושפעת ולאחר מכן שימוש רומא מן האמהות נגועים בלבד, כדי למצוא את הדור הבא. הגורם של האובדן של כמה זנים Wolbachia של המעבדה מושבות ידוע בעיקר, אך יכול להיות מוסבר על-ידי הכשל של בקרת טמפרטורה, כמו טמפרטורות גבוהות יכול לגרום לאובדן זיהומים Wolbachia 47, 60.

מושבות וניסויים עשוי גם להיות מזוהמים עם אנשים בודדים קווים שונים אם הטיפול אינו תפוס כאשר לגידול. זיהום יכול לנבוע pipetting רשלנית של הזחלים, ערבוב אצוות של ביצים, המטעות כלובים או שגוי סקסיייי הגלמים ב חוצה. טיפול מיוחד ולכן יש לנקוט בעת טיפול מושבות עם סוגים שונים של זיהום Wolbachia . לנקות ביסודיות כל כוסות ההטלה, לגידול מגשים על הכלובים לפני שימוש חוזר אותם, לנקות מדי סוכר לפני טיפול בכל מגש חדש של הזחלים ולנקות את הרשת בכל פעם כאשר העברת זחלים, גלמי מכילים. יתר על כן, לבדוק את האצבעות על ביצים בעת טיפול בנייר זכוכית רצועות ושימוש מגבות נייר טריים בעת ייבוש כל רצועה, להבטיח כי מבוגרים הם המין הנכון לפני שחרורם לתוך הכלובים להתמודד עם כל הנמלטים במהירות. אמצעי זהירות אלה יש להימנע רוב זיהום, אך מושבות צריך עדיין להיות שגרתי לפקח באמצעות מבחני אבחון59.

נקבה Ae. aegypti דורשים ארוחה דם כדי להטיל ביצים, ולאחר מעבדות ברחבי העולם מספקים אותם במגוון של דרכים, ממברנה האכלה מערכות57, ריסון בעלי חיים61 , ובמידה פחותה יותר, דם מלאכותי62 . עם זאת, יתושים עם זיהומים Wolbachia ניסיוני לעיתים קרובות לבצע גרוע על דם של אנושיות, ייתכן שיישומים פוריות מופחתת הפתח המחירים, ואת שידור לא שלם של Wolbachia הצאצאים שלהם63, 64 , 65. שמירה הפתיחות שלו לקבל נקבות ריח האדם חשוב גם היתושים להשתחרר לתוך השדה, להאכיל אותם דרך ממברנות או חיות אחרות עלול לפגוע ביכולת זו37. לכן אנחנו בוחרים להשתמש האמה של מתנדבים אנושיים עבור פרוטוקול תחזוקה זה המושבה, למרות שיטות אחרות נדרש בנסיבות מסוימות. דם צריך להנתן באמצעים אחרים כאשר עובד ישירות עם arboviruses, כדאי לשים לב כאשר המושבות מקורן אוכלוסיות שדה עם המון נגיפי גבוה כפי transovarial שידור של arboviruses עלולות להתרחש66. מתנדבים אנושיים צריך גם לא דם הזנה אם הם ביקרו לאחרונה מדינות אנדמיים arboviral כי ייתכן סיכון של שידור.

תחזוקה שלנו פרוטוקול שואפת לצמצם מעבדה הסתגלות, לחצים בררניים, אבל יש מקום לשיפור. . Leftwich et al. 42 לספק המלצות נוספות עבור שמירה על הכושר של יתושים עבור מהדורות בשדה פתוח, כולל שימוש טבעי ורחב יותר דיאטות זחל, הפחתת הצפיפות של מבוגרים בתוך כלובים, מתן סביבה מורכבת. שיקולים אלו עשוי לשפר את הכושר של Ae. aegypti כדי רמה גבוהה יותר, אם כי כיום אין כל עדות של כושר שינויים עקב הסתגלות מעבדה תחת פרוטוקול תחזוקה המתוארים כאן [רוס. et al. לא פורסם]. כמה אמצעים נוספים לא יכול להיות ריאלי עבור מעבדות עם שטח מוגבל ומשאבים, אבל בכל זאת שווה חקירה. שמירה על גודל אוכלוסייה גדולה, הימנעות לחצים בררניים מרכזי דרך פרוטוקולים גידול ויישום תקופתיות outcrossing אל שדה היתושים צריך לעזור להבטיח כושר גבוה של Ae. aegypti עבור מהדורות בשטח פתוח. העקרונות מעורב הגישה יכול להחיל על גידול מינים אחרים וקטור מחלת לשחרור לשנות או לדכא אוכלוסיות טבעי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

Acknowledgements

אנו להכיר הנג לין לחלומות כריס פטון, פטרינה ג'ונסון, קלייר Doig על תרומתם לפיתוח שיטות התחזוקה שלנו המושבה, שלושה אנונימיים בודקים עבור שלהם הצעות אשר עזר לשפר את כתב היד. המחקר שלנו נתמך על-ידי תוכנית גרנט מלגת אל תסמכו עלי הבריאות הלאומי, מועצת המחקר הרפואי ותרגום מענק של טרסט. סעיף זה נמען של הכשרה מחקר הממשלה האוסטרלית תוכנית מלגה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Wild type Aedes aegypti Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details
w Mel-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain
w AlbB-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain
w MelPop-infected Aedes aegypti Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain
Instant dried yeast Lowan Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used
5 L plastic tub Quadrant Q110950 Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used
Fish Food (Tetramin Tropical Tablets) Tetra 16152 Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE
Plastic containers Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable
Glass pipette Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez
Clicker counter RS Pro 710-5212 Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y
Rearing trays Gratnells Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com
Nylon mesh Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white
Cages BugDorm DP1000 Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html
35 mL plastic cup Huhtamaki AA272225 Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
35 mL plastic cup lid Huhtamaki GB030005 Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
Cotton wool Cutisoft 71841-13 Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used
White Sugar Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores
Rope M Recht Accessories C323C/W Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/
Plastic cup (large) Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable
Sandpaper Norton Master Painters CE015962 Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html
Filter paper Whatman 1001-150 Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used
Latex gloves SemperGuard Z560979 Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mayer, S. V., Tesh, R. B., Vasilakis, N. The emergence of arthropod-borne viral diseases: A global prospective on dengue, chikungunya and zika fevers. Acta Trop. 166, 155-163 (2017).
  2. Campbell, L. P., et al. Climate change influences on global distributions of dengue and chikungunya virus vectors. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370, (1665), (2015).
  3. Kraemer, M. U., et al. The global distribution of the arbovirus vectors Aedes aegypti and Ae. albopictus. eLife. 4, (2015).
  4. Carvalho, B. M., Rangel, E. F., Vale, M. M. Evaluation of the impacts of climate change on disease vectors through ecological niche modelling. Bull Entomol Res. 1-12 (2016).
  5. Scott, T. W., et al. Longitudinal studies of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in Thailand and Puerto Rico: population dynamics. J Med Ent. 37, (1), 77-88 (2000).
  6. Cheong, W. Preferred Aedes aegypti larval habitats in urban areas. Bull World Health Organ. 36, (4), 586-589 (1967).
  7. Barker-Hudson, P., Jones, R., Kay, B. H. Categorization of domestic breeding habitats of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) in Northern Queensland, Australia. J Med Ent. 25, (3), 178-182 (1988).
  8. Watson, T. M., Marshall, K., Kay, B. H. Colonization and laboratory biology of Aedes notoscriptus from Brisbane, Australia. J Am Mosq Control Assoc. 16, (2), 138-142 (2000).
  9. Williges, E., et al. Laboratory colonization of Aedes japonicus japonicus. J Am Mosq Control Assoc. 24, (4), 591-593 (2008).
  10. Munstermann, L. E. The Molecular Biology of Insect Disease Vectors. Springer. 13-20 (1997).
  11. McDonald, P., Hausermann, W., Lorimer, N. Sterility introduced by release of genetically altered males to a domestic population of Aedes aegypti at the Kenya coast. Am J Trop Med Hyg. 26, (3), 553-561 (1977).
  12. Rai, K., Grover, K., Suguna, S. Genetic manipulation of Aedes aegypti: incorporation and maintenance of a genetic marker and a chromosomal translocation in natural populations. Bull World Health Organ. 48, (1), 49-56 (1973).
  13. Harris, A. F., et al. Field performance of engineered male mosquitoes. Nature Biotechnol. 29, (11), 1034-1037 (2011).
  14. Hoffmann, A. A., et al. Successful establishment of Wolbachia in Aedes populations to suppress dengue transmission. Nature. 476, (7361), 454-457 (2011).
  15. O'Connor, L., et al. Open release of male mosquitoes infected with a Wolbachia biopesticide: field performance and infection containment. PLoS Negl Trop Dis. 6, (11), e1797 (2012).
  16. Morlan, H. B. Field tests with sexually sterile males for control of Aedes aegypti. Mosquito news. 22, (3), 295-300 (1962).
  17. Grover, K. K., et al. Field experiments on the competitiveness of males carrying genetic control systems for Aedes aegypti. Entomol Exp Appl. 20, (1), 8-18 (1976).
  18. Seawright, J., Kaiser, P., Dame, D. Mating competitiveness of chemosterilized hybrid males of Aedes aegypti (L.) in field tests. Mosq News. 37, (4), 615-619 (1977).
  19. Zhang, D., Lees, R. S., Xi, Z., Gilles, J. R., Bourtzis, K. Combining the sterile insect technique with Wolbachia-based approaches: II- a safer approach to Aedes albopictus population suppression programmes, designed to minimize the consequences of inadvertent female release. PloS One. 10, (8), e0135194 (2015).
  20. McGraw, E. A., O'Neill, S. L. Beyond insecticides: new thinking on an ancient problem. Nature Rev Microbiol. 11, (3), 181-193 (2013).
  21. Xi, Z., Khoo, C. C., Dobson, S. L. Wolbachia establishment and invasion in an Aedes aegypti laboratory population. Science. 310, (5746), 326-328 (2005).
  22. McMeniman, C. J., et al. Stable introduction of a life-shortening Wolbachia infection into the mosquito Aedes aegypti. Science. 323, (5910), 141-144 (2009).
  23. Walker, T., et al. The wMel Wolbachia strain blocks dengue and invades caged Aedes aegypti populations. Nature. 476, (7361), 450-453 (2011).
  24. Joubert, D. A., et al. Establishment of a Wolbachia superinfection in Aedes aegypti mosquitoes as a ppotential approach for future resistance management. PLoS Pathog. 12, (2), e1005434 (2016).
  25. Ferguson, N. M., et al. Modeling the impact on virus transmission of Wolbachia-mediated blocking of dengue virus infection of Aedes aegypti. Sci Transl Med. 7, (279), 279ra237 (2015).
  26. Aliota, M. T., Peinado, S. A., Velez, I. D., Osorio, J. E. The wMel strain of Wolbachia Reduces Transmission of Zika virus by Aedes aegypti. Sci Rep. 6, 28792 (2016).
  27. van den Hurk, A. F., et al. Impact of Wolbachia on infection with chikungunya and yellow fever viruses in the mosquito vector Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 6, (11), e1892 (2012).
  28. Moreira, L. A., et al. A Wolbachia symbiont in Aedes aegypti limits infection with dengue, Chikungunya, and Plasmodium. Cell. 139, (7), 1268-1278 (2009).
  29. Mains, J. W., Brelsfoard, C. L., Rose, R. I., Dobson, S. L. Female Adult Aedes albopictus Suppression by Wolbachia-Infected Male Mosquitoes. Sci Rep. 6, 33846 (2016).
  30. Nguyen, T. H., et al. Field evaluation of the establishment potential of wmelpop Wolbachia in Australia and Vietnam for dengue control. Parasit Vectors. 8, 563 (2015).
  31. Garcia Gde, A., Dos Santos, L. M., Villela, D. A., Maciel-de-Freitas, R. Using Wolbachia releases to estimate Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) population size and survival. PloS One. 11, (8), e0160196 (2016).
  32. Hoffmann, A. A., Ross, P. A., Rašić, G. Wolbachia strains for disease control: ecological and evolutionary considerations. Evol Appl. 8, (8), 751-768 (2015).
  33. Briegel, H. Metabolic relationship between female body size, reserves, and fecundity of Aedes aegypti. J Insect Physiol. 36, (3), 165-172 (1990).
  34. Ponlawat, A., Harrington, L. C. Factors associated with male mating success of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti. Am J Trop Med Hyg. 80, (3), 395-400 (2009).
  35. Segoli, M., Hoffmann, A. A., Lloyd, J., Omodei, G. J., Ritchie, S. A. The effect of virus-blocking Wolbachia on male competitiveness of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 8, (12), e3294 (2014).
  36. Imam, H., Zarnigar,, Sofi, G., Seikh, A. The basic rules and methods of mosquito rearing (Aedes aegypti). Trop Parasitol. 4, (1), 53-55 (2014).
  37. Spitzen, J., Takken, W. Malaria mosquito rearing-maintaining quality and quantity of laboratory-reared insects. Proc Neth Entomol Soc Meet. 16, 95-100 (2005).
  38. Lorenz, L., Beaty, B. J., Aitken, T. H. G., Wallis, G. P., Tabachnick, W. J. The effect of colonization upon Aedes aegypti susceptibility to oral infection with Yellow Fever virus. Am J Trop Med Hyg. 33, (4), 690-694 (1984).
  39. Yeap, H. L., et al. Dynamics of the "popcorn" Wolbachia infection in outbred Aedes aegypti informs prospects for mosquito vector control. Genetics. 187, (2), 583-595 (2011).
  40. Turley, A. P., Moreira, L. A., O'Neill, S. L., McGraw, E. A. Wolbachia infection reduces blood-feeding success in the dengue fever mosquito, Aedes aegypti. PLoS Negl Trop Dis. 3, (9), e516 (2009).
  41. Yeap, H. L., Endersby, N. M., Johnson, P. H., Ritchie, S. A., Hoffmann, A. A. Body size and wing shape measurements as quality indicators of Aedes aegypti mosquitoes destined for field release. Am J Trop Med Hyg. 89, (1), 78-92 (2013).
  42. Leftwich, P. T., Bolton, M., Chapman, T. Evolutionary biology and genetic techniques for insect control. Evol Appl. 9, (16), 212-230 (2016).
  43. Calkins, C., Parker, A. Sterile Insect Technique. Springer. 269-296 (2005).
  44. Tun-Lin, W., Burkot, T., Kay, B. Effects of temperature and larval diet on development rates and survival of the dengue vector Aedes aegypti in north Queensland, Australia. Med Vet Entomol. 14, (1), 31-37 (2000).
  45. Richardson, K., Hoffmann, A. A., Johnson, P., Ritchie, S., Kearney, M. R. Thermal sensitivity of Aedes aegypti from Australia: empirical data and prediction of effects on distribution. J Med Ent. 48, (4), 914-923 (2011).
  46. Richardson, K. M., Hoffmann, A. A., Johnson, P., Ritchie, S. R., Kearney, M. R. A replicated comparison of breeding-container suitability for the dengue vector Aedes aegypti in tropical and temperate Australia. Austral Ecol. 38, (2), 219-229 (2013).
  47. Ross, P. A., et al. Wolbachia infections in Aedes aegypti differ markedly in their response to cyclical heat stress. PLoS Pathog. 13, (1), e1006006 (2017).
  48. Gjullin, C., Hegarty, C., Bollen, W. The necessity of a low oxygen concentration for the hatching of Aedes mosquito eggs. J Cell Physiol. 17, (2), 193-202 (1941).
  49. Axford, J. K., Ross, P. A., Yeap, H. L., Callahan, A. G., Hoffmann, A. A. Fitness of wAlbB Wolbachia infection in Aedes aegypti: parameter estimates in an outcrossed background and potential for population invasion. Am J Trop Med Hyg. 94, (3), 507-516 (2016).
  50. Degner, E. C., Harrington, L. C. Polyandry depends on postmating time interval in the dengue vector Aedes aegypti. Am J Trop Med Hyg. 94, (4), 780-785 (2016).
  51. Bentley, M. D., Day, J. F. Chemical ecology and behavioral aspects of mosquito oviposition. Ann Rev Entomol. 34, (1), 401-421 (1989).
  52. Wong, J., Stoddard, S. T., Astete, H., Morrison, A. C., Scott, T. W. Oviposition site selection by the dengue vector Aedes aegypti and its implications for dengue control. PLoS Negl Trop Dis. 5, (4), e1015 (2011).
  53. Meola, R. The influence of temperature and humidity on embryonic longevity in Aedes aegypti. Ann Entomol Soc Am. 57, (4), 468-472 (1964).
  54. Faull, K. J., Williams, C. R. Intraspecific variation in desiccation survival time of Aedes aegypti (L.) mosquito eggs of Australian origin. J Vector Ecol. 40, (2), 292-300 (2015).
  55. McMeniman, C. J., O'Neill, S. L. A virulent Wolbachia infection decreases the viability of the dengue vector Aedes aegypti during periods of embryonic quiescence. PLoS Negl Trop Dis. 4, (7), e748 (2010).
  56. Ross, P. A., Endersby, N. M., Hoffmann, A. A. Costs of three Wolbachia infections on the survival of Aedes aegypti larvae under starvation conditions. PLoS Negl Trop Dis. 10, (1), e0004320 (2016).
  57. Carvalho, D. O., et al. Mass production of genetically modified Aedes aegypti for field releases in Brazil. J Vis Exp. (83), e3579 (2014).
  58. Benedict, M. The first releases of transgenic mosquitoes: an argument for the sterile insect technique. Trends Parasitol. 19, (8), 349-355 (2003).
  59. Lee, S. F., White, V. L., Weeks, A. R., Hoffmann, A. A., Endersby, N. M. High-throughput PCR assays to monitor Wolbachia infection in the dengue mosquito (Aedes aegypti) and Drosophila simulans. Appl Environ Microbiol. 78, (13), 4740-4743 (2012).
  60. Corbin, C., Heyworth, E. R., Ferrari, J., Hurst, G. D. Heritable symbionts in a world of varying temperature. Heredity. 118, (1), 10-20 (2017).
  61. Day, J. F., Edman, J. D. Mosquito engorgement on normally defensive hosts depends on host activity patterns. J Med Ent. 21, (6), 732-740 (1984).
  62. Gonzales, K. K., Hansen, I. A. Artificial diets for mosquitoes. Int J Environ Res Public Health. 13, (12), (2016).
  63. McMeniman, C. J., Hughes, G. L., O'Neill, S. L. A Wolbachia symbiont in Aedes aegypti disrupts mosquito egg development to a greater extent when mosquitoes feed on nonhuman versus human blood. J Med Ent. 48, (1), 76-84 (2011).
  64. Caragata, E. P., Rances, E., O'Neill, S. L., McGraw, E. A. Competition for amino acids between Wolbachia and the mosquito host, Aedes aegypti. Microb Ecol. 67, (1), 205-218 (2014).
  65. Suh, E., Fu, Y., Mercer, D. R., Dobson, S. L. Interaction of Wolbachia and bloodmeal type in artificially infected Aedes albopictus (Diptera: Culicidae). J Med Entomol. (2016).
  66. Thangamani, S., Huang, J., Hart, C. E., Guzman, H., Tesh, R. B. Vertical transmission of Zika virus in Aedes aegypti mosquitoes. Am J Trop Med Hyg. 95, (5), 1169-1173 (2016).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics