Выбор и No-Выбор анализы для тестирования сопротивления thaliana А. к Жевательная Насекомые

Biology
 

Summary

Устойчивость растений к насекомым жевательной травоядных может быть проверена в нескольких направлениях. Здесь мы показали, как настройка выбора и нет выбора, экспериментировать с Arabidopsis thaliana модельное растение для определения сопротивления против вредителей Pieris rapae.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Личинки маленькие белые бабочки капусты вредителями сельскохозяйственных установок. Этот вид гусеница питается от растений семейства капустных, которые включают в себя многие культуры, такие как капуста, брокколи, брюссельская капуста и т.д. Разведение насекомых происходит на капусту растений в теплице. По крайней мере, две клетки, необходимые для выращивания Pieris rapae. Один для личинок и другие содержат взрослых бабочек. Для того чтобы исследовать роль растительных гормонов и токсичных химических веществ завода в сопротивление этой насекомых вредителей, мы демонстрируем два эксперимента. Во-первых, определение роли жасмоновой кислота (JA - растительный гормон, часто указанные в устойчивости к насекомым) по устойчивости к насекомым жевательной Pieris rapae. Caterpillar роста можно сравнить с дикого типа и мутантных растений нарушения в производстве JA. Этот эксперимент считается "Нет выбора", так как личинки вынуждены существовать на одном заводе которая синтезирует или испытывает дефицит в JA. Во-вторых, мы показываем, эксперимент, который исследует роль глюкозинолатов, которые используются в качестве откладки яиц (яйцекладки) сигналы. Здесь мы используем WT и мутантов Arabidopsis нарушениями в glucosinolate производства в "Выбор" эксперимент, в котором женщина бабочек имеют право выбирать, чтобы отложить яйца на растения либо генотипа. Это видео демонстрирует экспериментальную установку для обоих анализов, а также представитель результаты.

Protocol

Нет выбора Эксперимент:

  1. Аккуратно приложите Arabidopsis завод заинтересованность в пластиковый стаканчик. В этом случае: Col-0 (WT) и мутант нарушения в производстве JA. Убедитесь, что вы ограничиваете повреждения листьев. Для этого я использую в конце этой кисти.
  2. Использование тонкой кистью взять только что вылупившихся личинок из колонии на капусту.
  3. Аккуратно положите личинку на Arabidopsis растений.
  4. Вес личинки на 4 сутки, 7, 10. СОВЕТ: Развивайте свой растений в условиях короткого дня (8 часов света) для повышения вегетативного роста (1 личинка может выполнять свои полного жизненного цикла на 1 растение).

Выбор Эксперимент:

  1. Два завода будут выбраны, по одному каждого генотипа. Лучше всего выращивать растения в том же банке, ограничить другие факторы, такие как поднос эффекты и т.д.
  2. Место растений в бабочку клетке.
  3. Выберите плодородной женщины. Я обычно поймать женщин, активно откладывают яйца в воспитании колонии.
  4. Выпуск женского пола в клетке с выбором из двух растений в течение 24 часов.

Совет 1: Для устранения влияют обучения, не повторное использование женщин для последующих тестов выбор.

СОВЕТ 2: Можно только сравнивать растения, которые имеют аналогичные фенотип роста. Кроме того, можно монтировать лист от каждого генотипа на вершине колбу и сравнить их привлекательность для женщин.

Пожалуйста, посетите ежегодные обзоры биологии растений для получения дополнительной информации об этом протокол и иммунитета растений к насекомым herbivory.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics