لا خيار للاختيار و- فحوصات لاختبار مقاومة للحشرات thaliana ألف مضغ

Biology
 

Summary

ويمكن اختبار مقاومة النباتات للمضغ الحشرات العاشبة في عدة طرق. هنا ، ونحن لشرح كيفية انشاء اختيار وتجربة لا للخيار مع نموذج Arabidopsis thaliana مصنع لتحديد المقاومة ضد الأنواع rapae Pieris الآفات.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

يرقات فراشة الكرنب البيضاء الصغيرة هي آفة في البيئات الزراعية. هذا النوع من كاتربيلر يغذي النباتات في عائلة الملفوف ، والتي تشمل العديد من المحاصيل مثل الكرنب والقرنبيط ، وبراعم بروكسل تربية الخ من الحشرات يحدث على النباتات الملفوف في الاحتباس الحراري. وهناك حاجة إلى اثنين على الأقل من أقفاص لتربية rapae Pieris. واحد لليرقات وأخرى لاحتواء الكبار ، والفراشات. من أجل التحقيق في دور الهرمونات النباتية والمواد الكيميائية السامة في مصنع لمقاومة هذه الآفة الحشرية ونظهر تجربتين. الأول ، تحديد دور حمض jasmonic (JA -- وهو هرمون نباتي وأشار في كثير من الأحيان مقاومة للحشرات) في مقاومة الحشرات rapae Pieris المضغ. ويمكن مقارنة نمو اليرقة على النباتات البرية من نوع ومتحولة ضعف في إنتاج JA. وتعتبر هذه التجربة "لا خيار" ، وذلك لأن يرقات يضطرون إلى العيش على مصنع واحد والذي يجمع أو نقص في JA. ثانيا ، علينا أن نظهر أن تحقق تجربة دور glucosinolates ، والتي تستخدم على النحو oviposition (وضع البيض) الاشارات. هنا ، فإننا نستخدم Arabidopsis WT ومتحولة ضعف في الإنتاج glucosinolate في تجربة "الاختيار" الذي يسمح للإناث الفراشات في اختيار لتضع بيضها على النباتات إما التركيب الوراثي. هذا الفيديو يوضح الإعداد تجريبية لكلا المقايسات فضلا عن نتائج تمثيلية.

Protocol

لا خيار التجربة :

  1. أرفق بعناية النباتات Arabidopsis الفائدة في كوب من البلاستيك. في هذه الحالة : العقيد - 0 (WT) ، ومتحولة ضعف في إنتاج JA. تأكد من الحد من الأضرار التي لحقت الأوراق. لذلك يمكنني استخدام الجزء الخلفي من هذا الرسام.
  2. استخدام الفرشاة الجميلة لاتخاذ اليرقات الطازجة من مستعمرة على الملفوف.
  3. بعناية وضع اليرقة على النباتات Arabidopsis.
  4. اليرقة الوزن في يوم 4 و 7 و 10. TIP : تنمو النباتات الخاصة بك تحت ظروف النهار القصير (8 ساعة ضوء) لزيادة النمو الخضري (1 يرقة يمكن الوفاء دورة الحياة الكاملة في 1 النبات).

اختيار التجربة :

  1. ويتم اختيار اثنين من النباتات ، واحدة من كل الوراثي. الأفضل هو أن تنمو النباتات في وعاء نفسه ، للحد من عوامل أخرى ، مثل آثار صينية ، الخ.
  2. وضع النباتات في قفص فراشة.
  3. حدد الأنثى الخصبة. أمسكت عادة الأنثى التي يتم وضع البيض بنشاط في مستعمرة تربية.
  4. الافراج عن الإناث في قفص مع اختيار اثنين من النباتات لمدة 24 ساعة.

نصيحة 1 : القضاء له تأثير التعلم ، لا إعادة استخدام الإناث للاختبارات اختيار لاحقة.

نصيحة 2 : يمكن للمرء أن يقارن فقط النباتات التي تحتوي على النمط الظاهري نمو مماثلة. بدلا من ذلك ، هل يمكن تحميل كل ورقة من النمط الجيني على رأس دورق مخروطي وقارن بين قدرتها على جذب الإناث.

يرجى زيارة المراجعات السنوية للبيولوجيا النبات للحصول على مزيد من المعلومات حول هذه الحصانة ومصنع لبروتوكول الحشرات بالأعشاب.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics