Çiğneme Böcekler A. thaliana Direnç Test seçimi ve No-Choice Tahliller

Biology
 

Summary

Çiğneme böcek otçul bitki direnci çeşitli şekillerde test edilebilir. Burada, bir seçim ve haşere türü Pieris rapae karşı direncini belirlemek için model bitki Arabidopsis thaliana ile hiç tercih deney set-up nasıl göstermek.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Küçük beyaz lahana kelebek Larva tarım ayarlarında bir haşere. Bu tırtıl türler, lahana gibi birçok ürün lahana aile bitkiler, yemler, böceklerin brokoli, Brüksel lahanası vb Yetiştirme sera lahana bitkiler yer alır. Pieris rapae yetiştirme için en az iki kafesleri ihtiyaç vardır. Bir larva ve yetişkin, kelebekler içeren diğer. Bitki hormonları ve bu böcek haşere direnç zehirli bitki kimyasalları rolünü araştırmak amacıyla, iki deneyler göstermektedir. İlk olarak, çiğneme böcek Pieris rapae direnç Jasmonik asit (JA genellikle böceklerin direnç belirtilen bir bitki hormonu) rolünün belirlenmesi. Caterpillar büyüme JA üretiminde engelli yabani tip ve mutant bitkiler mukayese edilebilir. Larvaları sentezler veya eksik JA tek bir bitki varlığını zorunda çünkü bu deney, "No Choice" olarak kabul edilir. İkincisi, biz yöntemlerinin koloni (yumurtlama) sinyalleri olarak kullanılır glukosinolat, rolünü araştıran bir deney göstermektedir. Burada, dişi kelebekler yumurtalarını bırakmak için her iki genotip bitkiler üzerinde izin verilen bir "Seçim" deney glukosinolat üretim engelli WT ve mutant Arabidopsis kullanın. Bu video için deney düzeneği hem testlerin yanı sıra temsilcisi sonuçları göstermektedir.

Protocol

No Choice Deney:

  1. Dikkatle, bir plastik bardak ilgi Arabidopsis bitki içine alın. Bu durumda: Col-0 (WT) ve JA üretimi bozulmuş bir mutant. Yapraklara zarar sınırı emin olun. Bunun için ben, bu fırça arka kullanın.
  2. Lahana koloni taze yumurtadan larva almak için ince bir fırça kullanın.
  3. Arabidopsis bitkiler üzerinde larva dikkatlice yerleştirin.
  4. 4 gün, 7, 10 Kilo larva. İPUCU: vejetatif büyümeyi artırmak için (1 larva 1 bitki tam yaşam döngüsü yerine) kısa günün koşulları (8 saat ışık) altında bitkiler büyümek.

Seçimi Deney:

  1. İki bitkiler, her biri bir genotip seçilir. Tepsi etkileri gibi diğer faktörler, vb sınırlamak için, aynı potada bitkiler büyümek için
  2. Bir kelebek kafes bitkiler yerleştirin.
  3. Doğurgan kadın seçin. Ben genellikle, aktif yetiştirme koloni yumurtlayarak bir kadın yakalamak.
  4. 24 saat için iki bitki seçimi ile kafes kadın bırakın.

İpucu 1: sonraki seçmeli testler için bir öğrenme etkiler ortadan kaldırmak için, kadın yeniden yoktur.

İPUCU 2: Bir tek benzer bir büyüme fenotipi bitkileri karşılaştırın. Alternatif olarak, her genotip Erlenmeyer şişesinin üstünde bir yaprak montaj ve kendi çekiciliğini bir kadın karşılaştırın.

Bitki Biyoloji Yıllık Yorumları ziyaret ediniz böcek herbivory bu protokol ve bitki bağışıklık hakkında daha fazla bilgi için.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics