Abstract
वातानुकूलित डर के विलुप्त होने के लिए बड़े पैमाने पर पुरुष कृन्तकों में अध्ययन किया गया है। हाल ही में, कुछ व्यवहार कार्यों और प्रतिक्रिया व्यवहार के लिए तंत्रिका तंत्र महिलाओं और पुरुषों में अलग हैं यह दर्शाता है कि पढ़ाई की संख्या बढ़ गया है। शोध अध्ययन में महिलाओं का प्रयोग क्योंकि उनके मद चक्र के दौरान जननांगों हार्मोन के बदलाव की एक चुनौती का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल मादा चूहों में भय विलुप्त होने स्मृति समेकन में एस्ट्रोजन की भूमिका की जांच में उपयोगी होते हैं कि अच्छी तरह से स्थापित प्रक्रियाओं का वर्णन है। मद चक्र और exogenous एस्ट्रोजन प्रशासन पूर्व विलुप्त होने के प्रशिक्षण के पहले चरण में 24 घंटा बाद में विलुप्त होने याद प्रभावित कर सकते हैं। यहाँ वर्णित estrous चरण पहचान के लिए योनि swabbing तकनीक परीक्षा और स्वाभाविक रूप से जननांगों हार्मोन साइकिल चालन के हेरफेर एड्स। आगे एस्ट्रोजन में भय विलुप्त होने स्मृति न्यूनाधिक कर सकते हैं तंत्र है जिसके द्वारा चित्रित करना हो सकता है इस बुनियादी कृंतक मॉडल का उपयोगमहिलाओं।
Introduction
निहित सेक्स मतभेद मनुष्यों और कृन्तकों दोनों में विभिन्न संज्ञानात्मक व्यवहार और सीखने लद भर में मनाया जाता है। उदाहरण के लिए, यह पुरुषों बेहतर स्थानिक क्षमता 1-3 है, जबकि महिलाओं को आम तौर पर मजबूत मौखिक और विस्तार उन्मुख क्षमता है कि सूचित किया गया है। इन सेक्स मतभेद जननांगों हार्मोन के प्रभाव के कारण भाग में हो सकता है। उच्च एस्ट्राडियोल स्तरों महिलाओं बेहतर कर रहे हैं, जिसमें कार्यों पर प्रदर्शन में सुधार है, लेकिन पुरुषों में आम तौर पर अच्छी तरह से 4-6 है कि कार्यों पर प्रदर्शन खराब हो। इस सबूत सम्मोहक है, पूरी तरह से मानव अध्ययन में प्रयोगात्मक वातावरण को नियंत्रित करने के लिए सीमित क्षमता व्यवहार पर इन प्रभावों को हार्मोन के लिए विशेष रूप से जिम्मेदार ठहराया जा सकता है अगर यह मुश्किल निर्धारित करने के लिए बनाता है। जानवरों के अध्ययन, इसके विपरीत, पूरी तरह से नियंत्रित परिस्थितियों के लिए अनुमति देते हैं।
डर विलुप्त होने के बुनियादी तंत्रिका तंत्र पहचान की गई है और अच्छी तरह से पुरुषों में अध्ययन कर रहे हैं, यह स्पष्ट नहीं है किइन प्रणालियों महिलाओं या कैसे वे मद चक्र भर में बदलने में वही कर रहे हैं। डर कंडीशनिंग और विलुप्त होने के लिए व्यापक रूप से चिंता विकारों से संबंधित अध्ययन का संचालन करने के लिए कृन्तकों और मनुष्यों में व्यवहार मानदंड किया जाता है। महिलाओं के लिए एक चिंता विकारों के लिए उच्च जोखिम के साथ ही उच्च लक्षण अवधि और तीव्रता 13/07 है कि यह देखते हुए, यह इन अध्ययनों में महिलाओं को शामिल करने के लिए महत्वपूर्ण है। इस शोध में महिलाओं की underrepresentation सेक्स हार्मोन का व्यवहार प्रभाव के लिए estrous चरण की निगरानी और लेखा की चुनौतियों के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। अक्सर unreported जाने के लिए या अपनी पढ़ाई के लिए तरीकों में वर्णित नहीं कर रहे हैं कि इस संबंध मुठभेड़ मुद्दों में महिलाओं की जांच करते हैं कि प्रयोगशालाओं।
कृन्तकों में सबूत उभरते डर विलुप्त होने में सेक्स मतभेद जननांगों हार्मोन 14-18 द्वारा संग्राहक कर रहे हैं कि पता चलता है। डर कंडीशनिंग में, जानवरों के लिए एक विशेष प्रोत्साहन डर करने के लिए प्रशिक्षित कर रहे हैं। के unreinforced प्रस्तुतियों की संख्या के बादउत्तेजना, जानवरों क्यू, विलुप्त होने नामक प्रक्रिया डरने की नहीं सीखते हैं। कितनी अच्छी तरह से पशु सीखता है और विलुप्त होने के प्रशिक्षण के बाद कुछ समय दिया एक विलुप्त होने याद परीक्षण के दौरान देखा जा सकता है इस कार्य को सीखने की स्मृति समेकित करता है। विलुप्त होने याद दौरान कम डर अभिव्यक्ति अच्छा विलुप्त होने स्मृति समेकन को दर्शाता है। हमारी प्रयोगशाला से हाल के निष्कर्षों एस्ट्रोजन डर विलुप्त होने स्मृति के समेकन मिलाना और विलुप्त होने याद सुधार कर सकते हैं सुझाव है कि। विशेष रूप से, proestrus में बुझा रहे हैं कि मादा चूहों, मद चक्र के चरण के दौरान जो एस्ट्रोजन का स्तर चरम पर, विलुप्त होने स्मृति की प्रदर्शनी बढ़ाया प्रतिधारण परिसंचारी। इसके विपरीत, पहले या तुरंत विलुप्त होने प्रशिक्षण 15,16 के बाद बहिर्जात एस्ट्राडियोल प्रशासन के साथ सुधार किया जा सकता है जो कम एस्ट्रोजन metestrus चरण प्रदर्शन अपेक्षाकृत गरीब विलुप्त होने याद में बुझा रहे हैं कि महिलाओं,। विलुप्त होने स्मृति समेकन के तंत्रिका तंत्र (inclमहिलाओं में जननांगों हार्मोन की भूमिका) uding स्पष्ट नहीं हैं।
प्रयोगशाला पशुओं में, हार्मोन की भूमिका ऐसे बधिया और ovariectomy के रूप में आक्रामक शल्य हटाने की प्रक्रिया का उपयोग कर जांच की जा सकती है। सर्जरी से वसूली के बाद, जननांगों हार्मोन अक्सर exogenously एक व्यवहार कार्य 19 के प्रदर्शन के दौरान छेड़छाड़ कर रहे हैं। यह दृष्टिकोण सेक्स हार्मोन के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान की और इसे 20-23 (समय और खुराक के संदर्भ में) जननांगों हार्मोन की अच्छी तरह से नियंत्रित जोड़तोड़ के लिए अनुमति देता है, क्योंकि उपयोगी है। यह दृष्टिकोण, हालांकि, मद चक्र भर में पाए जाते हैं और न ही वे जिससे मानव अध्ययन करने के लिए translational को संभावित सीमित, "सामान्य" जानवरों का प्रतिनिधित्व करते हैं कि प्राकृतिक रूप से उत्पन्न उतार चढ़ाव के प्रभाव का आकलन नहीं करता है। यह अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है कि विशिष्ट मद चक्र के चरणों, और चक्र के भीतर एस्ट्रोजन रिसेप्टर अभिव्यक्ति परिवर्तन पर महिला सेक्स हार्मोन का स्तर शिखर और गिरावट,और ovariectomy 24 के बाद। इस प्रकार, अक्षत gonads के साथ महिलाओं पर अध्ययन का संचालन और मज़बूती से उच्च और निम्न एस्ट्रोजन राज्यों उनके जीवन काल के दौरान महिलाओं पर हो सकता है कि प्रभाव का अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक डिजाइन परिष्कृत करने के लिए एक की जरूरत है।
इस प्रोटोकॉल के डर से विलुप्त होने में शामिल neurobiological सिस्टम पर एस्ट्रोजेन के प्रभाव पर केंद्रित है। 1) ध्यान से, मद चक्र की निगरानी 2) प्रणालीगत प्रशासन के लिए एस्ट्राडियोल के प्रभावी खुराक तैयार करते हैं, और 3) डर कंडीशनिंग, विलुप्त होने के शामिल है कि एक व्यवहार प्रतिमान का पालन करें, और स्वाभाविक रूप से साइकिल मादा चूहों में याद करते हैं: यह कैसे करने के लिए वर्णन करता है। इस प्रोटोकॉल बेहतर विलुप्त होने व्यवहार डर वातानुकूलित में मनाया जाता है कि सेक्स के अंतर को समझने की पढ़ाई के लिए सहायता करने के लिए अन्य औषधीय जोड़तोड़ और सेलुलर और आणविक उपकरणों के साथ संशोधित किया जा सकता है। नीचे वर्णित प्रक्रियाओं हमारी प्रयोगशाला के भीतर उपयोग किया उन ध्यान दें कि, और इन प्रक्रियाओं के बदलाव की एक संख्या वहां मौजूद मैंएन साहित्य।
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Protocol
नोट: इस प्रोटोकॉल में सभी प्रक्रियाओं मैसाचुसेट्स जनरल अस्पताल के लिए संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के रूप में कार्य करता है जो रिसर्च पशु की देखभाल पर उपसमिति ने मंजूरी दे दी, और स्वास्थ्य के दिशा निर्देशों के राष्ट्रीय संस्थानों के अनुपालन में किया गया है।
1. पशु आवास और हैंडलिंग प्रक्रिया
- आगमन पर, घर वयस्क Sprague Dawley मादा चूहों की उम्र के बारे में 8-10 सप्ताह woodchip बिस्तर के साथ 3-4 इंच प्लास्टिक के डिब्बे के समूह में (200-225 ग्राम वजन)। एक चाउ करने के लिए यथेच्छ पहुँच के भोजन और पानी और एक 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र पर उन्हें बनाए। एक सप्ताह की एक न्यूनतम के लिए आवास की स्थिति और जानवरों की सुविधा के लिए acclimate करने के लिए चूहों को छोड़ दें।
नोट: इस पांडुलिपि में सभी प्रक्रियाओं प्रकाश चक्र के दौरान आयोजित की जाती हैं। - इस दशानुकूलन अवधि के बाद, 5 मिनट में 2-3 दिनों के लिए प्रत्येक के लिए सभी जानवरों को संभाल। ठीक से, (धड़ से और न पूंछ द्वारा समर्थित) एक समय में चूहों एक पिकसुरक्षित रूप से उन्हें पकड़ है, और इस समय के दौरान उन्हें पालतू। उछल, या समय की लंबी अवधि के लिए उत्सुक पर बल दिया, और अधिक दिखाई देते हैं कि जानवरों को संभाल लेना। इस प्रोटोकॉल में निम्न चरणों को प्रभावित कर सकता है, जो तनाव से निपटने के लिए कम से कम करने के लिए यह मत करो।
नोट: दिनों की संख्या और समय विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच भिन्न हो सकते हैं पशुओं को संभालने की राशि; हालांकि, ये वही प्रयोगशाला के भीतर प्रयोगों के बीच अनुरूप होना चाहिए।
2. मद चक्र मॉनिटरिंग: योनि स्वाब smearing और धुंधला प्रक्रिया
- 0.9% नमकीन घोल (सोडियम क्लोराइड आसुत पानी में भंग) बनाते हैं। इस समाधान में एक कपास इत्तला दे दी applicator गीला। अपर्याप्त नमूना संग्रह या कोशिकाओं के नुकसान के लिए नेतृत्व कर सकता है जो oversaturation, से बचने के लिए एक कागज तौलिया का उपयोग टिप दाग। ऊपर की ओर दूर योनि खोलने से पूंछ पकड़, धीरे योनि नहर में कपास टिप डालने और ढीली योनि कोशिकाओं पर कब्जा करने के लिए दीवारों के आसपास रोल।
- पशु खाट पर पेशाब करते हैंमूत्र संदूषण चरण की पहचान के लिए यह मुश्किल कर देगा के रूप टन टिप, एक नया एक के साथ की जगह। तनाव के लिए जोखिम मद चक्र को बाधित करेगा क्योंकि इस प्रक्रिया के दौरान पशु के लिए संकट पैदा करने के लिए नहीं के रूप में बेहद सावधान रहें। Swabbing करते हैं, pseudopregnancy पैदा कर सकते हैं, जो गर्भाशय ग्रीवा, करने के लिए अतिरिक्त उत्तेजना को कम करने के रूप में भी गहरी नहीं है कि एक तेज प्रविष्टि और वापसी के लक्ष्य को हासिल करना है।
नोट: Pseudopregnancy यानी आम तौर पर के बारे में 12 दिनों के लिए रहता है कि एक अचक्रीय मद चक्र, diestrus 25 से लगातार दिन के रूप में पहचाना जा सकता है। - ध्यान से applicator के टिप को हटाने और एक पूर्व लेबल खुर्दबीन स्लाइड पर यह रोल। चरण पहचान एक बार मुश्किल शुष्क बना सकते हैं स्लाइड पर बहुत अधिक तरल पदार्थ के रूप में भी मुश्किल नीचे दबाने से बचें।
नोट: इस व्यक्तिगत वरीयताओं के अनुसार किया जा सकता है, हालांकि एक स्लाइड, प्रत्येक जानवर के लिए कई दिनों से हो सकते हैं। - स्लाइड पर नमूना स्थानान्तरण सुनिश्चित करें। तोड़ के लिए नमूने एकत्रएक स्लाइड पर अल दिनों लगातार बेहतर ट्रैक करने में सक्षम हो सकता है और दैनिक estrous चरणों परिवर्तनों की पहचान करने के लिए।
नोट: नमूने एकत्र लोगों को सभी जानवरों के लिए ही रहते हैं, तो यह भी आदर्श है यदि संभव हो तो। - स्लाइड सूखी है एक बार, चरण पहचान के लिए धुंधला प्रोटोकॉल शुरू करते हैं। धुंधला किट (सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करना, लगानेवाला (हल्के नीले रंग) में स्लाइड्स 10 बार विसर्जित, (गुलाबी) दाग समाधान में 10 बार, और counterstain समाधान में 5 गुना (बैंगनी)। कुल्ला धीरे चल रहे पानी के नीचे स्लाइड। खुर्दबीन के नीचे देखने से पहले पूरी तरह से शुष्क हवा स्लाइड करते हैं।
नोट: आम तौर पर 4-5 दिन भर मद चक्र (इस क्रम में) के होते हैं: मद (ई), metestrus (एम), diestrus (डी), और proestrus (पी) 26। मद नीले, श्रृंगित कोशिकाओं, ल्यूकोसाइट्स द्वारा metestrus और श्रृंगित और केन्द्रक की कोशिकाओं का एक संयोजन के द्वारा होती है, diestrus वे बहुत विरल हैं सिवाय प्रकार की कोशिकाओं की उपस्थिति में metestrus के समान है, और proestrus बैंगनी से सना हुआ समुच्चय द्वाराके केन्द्रक की कोशिकाओं (चित्रा 1)। योनि धब्बा कोशिका विज्ञान के लिए समान रूप से प्रभावी रहे हैं कि ऊपर वर्णित उन के अलावा विभिन्न धुंधला प्रक्रियाओं, कर रहे हैं। - सही रूप से पहले प्रयोग के चरणों पर नजर रखने के क्रम में कम से कम दो पूरा चक्र (~ 8-10 दिन) के लिए नमूने ले लीजिए। नमूने ले रहे हैं दिन के समय के साथ लगातार हो। भर में और प्रयोग के अंत तक दैनिक योनि धब्बा नमूने एकत्र।
3. पूर्व जोखिम
- प्रयोग की दीक्षा से पहले, कक्षों जानवरों किसी भी व्यवहार परीक्षण से पहले संदर्भ (कंडीशनिंग कक्षों) के लिए acclimate करने की अनुमति कंडीशनिंग के लिए जानवरों के पूर्व बेनकाब।
- किसी भी प्रयोग करने से पहले तीन दिनों के लिए प्रति दिन 20-30 मिनट के लिए पर घर रोशनी के साथ (ध्वनि attenuating बक्से में स्थित) कंडीशनिंग कक्ष में महिलाओं के प्री-बेनकाब। वे पूर्व उजागर अध्ययन के लिए उनके चैम्बर के रूप में करने के लिए कर रहे हैं बॉक्स निरुपित। अच्छी तरह से साफ टीवे व्यवहार और मद चक्र को प्रभावित कर सकते हैं के बाद सत्र और जानवरों के बीच वह बक्से (दीवारों और ट्रे) odors को दूर करने के लिए।
4. दिन 1: आदी होना / डर कंडीशनिंग
- जानवरों को उनके estrous चक्र का मद चरण में होने की सत्यापित किया गया है एक बार, 3 दिन प्रयोग का आदी होना / कंडीशनिंग चरण शुरू करते हैं।
- पूर्व टोन प्रयोग के प्रत्येक दिन पर पहला स्वर वातानुकूलित प्रोत्साहन करने से पहले (सीएस) प्रस्तुतियों ठंड की आधारभूत उपाय करते हैं। सीएस शुरुआत से पहले पहले सीएस अकेले परीक्षण की शुरुआत में उत्तेजना-अनुपस्थित समय अंतराल के दौरान (100 से गुणा परीक्षण की अवधि, द्वारा स्थिर बिताया सेकंड विभाजित करके गणना) प्रतिशत ठंड के स्कोर प्राप्त करने से यह मत करो।
नोट: इन उपायों का आकलन और आदी होना, वातानुकूलन, विलुप्त होने, और याद के दौरान उन लोगों के साथ आधारभूत ठंड स्तर की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। - Metestrus चरण के दौरान विलुप्त होने के प्रशिक्षण का संचालन करने के लिए,मद के अपने आखिरी दिन में चूहों हालत। स्वाब और पहचान estrous चरण (चरण 2) प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल (कंडीशनिंग / विलुप्त होने / रिकॉल) शुरू करने से पहले प्रत्येक दिन है। मद चरण एक दिन से अधिक समय तक पिछले कर सकते हैं के रूप में पशु प्रशिक्षण शुरू करने के लिए तैयार कर रहे हैं, जब उपयोग चक्र इतिहास निर्धारित करने के लिए चरणों की लंबाई भविष्यवाणी करने के लिए।
- पूर्व टोन प्रयोग के प्रत्येक दिन पर पहला स्वर वातानुकूलित प्रोत्साहन करने से पहले (सीएस) प्रस्तुतियों ठंड की आधारभूत उपाय करते हैं। सीएस शुरुआत से पहले पहले सीएस अकेले परीक्षण की शुरुआत में उत्तेजना-अनुपस्थित समय अंतराल के दौरान (100 से गुणा परीक्षण की अवधि, द्वारा स्थिर बिताया सेकंड विभाजित करके गणना) प्रतिशत ठंड के स्कोर प्राप्त करने से यह मत करो।
- कंडीशनिंग कक्षों में, एक बिजली उत्तेजना जनरेटर के लिए पैदल सदमे ग्रिड मंजिल कनेक्ट। असुविधाजनक प्रोत्साहन (अमेरिका) के रूप में 0.5-0.6 माँ की एक उत्तेजना स्तर का प्रयोग करें। 4 किलोहर्ट्ज़, वातानुकूलित प्रोत्साहन (सीएस) के रूप में 80 डीबी टोन का प्रयोग करें।
नोट: इन मानकों प्रयोगशालाओं भर में भिन्न हो सकते हैं और इष्टतम कंडीशनिंग के लिए संशोधित किया जा सकता है।- (लौकिक के खिलाफ) ठंड विश्लेषण कार्यक्रम दृश्य cues की आवश्यकता है, टोन के साथ एक एलईडी प्रकाश सह सक्रिय करें। वीडियो सीमा के भीतर, स्फूर्त चैम्बर के बाहर पर प्रकाश स्थिति। प्रत्येक परीक्षण के शुरू में, एलईडी प्रकाश को सक्रिय करने और यह वीं के अंत तक प्रबुद्ध रखनाई परीक्षण।
नोट: यह प्रकाश जानवर ने दिखाई नहीं है और केवल दीक्षा और रिकॉर्ड वीडियो फ़ाइलों के भीतर परीक्षण के अंत के लिए एक मार्कर के रूप में कार्य करता है (ठंड के व्यवहार को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है)।
- (लौकिक के खिलाफ) ठंड विश्लेषण कार्यक्रम दृश्य cues की आवश्यकता है, टोन के साथ एक एलईडी प्रकाश सह सक्रिय करें। वीडियो सीमा के भीतर, स्फूर्त चैम्बर के बाहर पर प्रकाश स्थिति। प्रत्येक परीक्षण के शुरू में, एलईडी प्रकाश को सक्रिय करने और यह वीं के अंत तक प्रबुद्ध रखनाई परीक्षण।
- आदी होना के 5 सीएस अकेले परीक्षण के लिए कंडीशनिंग कक्षों में पशुओं रखें। इसके तत्काल बाद आदी होना सत्र के बाद, भय कंडीशनिंग के सात बनती सीएस-अमेरिका परीक्षणों प्रदर्शन करते हैं। सीएस स्वर 30 सेकंड के लिए रहता है और 0.5 सेकंड अमेरिका झटके के साथ coterminates सुनिश्चित करें। तीन मिनट के औसत एक चर intertrial अंतराल के साथ सभी सत्रों (आदी होना, वातानुकूलन, विलुप्त होने, और याद) में चलाने के लिए परीक्षण।
- कंडीशनिंग सत्र के अंत में, अगले दिन जब तक जानवरों की सुविधा उनके घर पिंजरों के लिए और करने के लिए जानवरों वापसी।
5. दिन 2: एस्ट्राडियोल तैयारी
- स्वाब और इस प्रोटोकॉल के दिन 1 कराना पड़ा कि सभी जानवरों के लिए estrous चरण की पहचान। एस्ट्राडियोल को तैयार है (यह भी E2, 17beta-एस्ट्राडियोल, या के रूप में जाना जाता हैतिल का तेल या वाहन के रूप में 0.9% खारा का उपयोग करते हुए एक 15 माइक्रोग्राम प्रति किग्रा / खुराक चमड़े के नीचे इंजेक्शन के लिए बीटा-एस्ट्राडियोल)।
- , इंजेक्शन के लिए तैयार करते हैं वे इस प्रोटोकॉल के दिन 1 पर वातानुकूलित थे जब मापा और दर्ज किए गए जो सभी जानवरों के शरीर भार का उपयोग करने के लिए एस्ट्राडियोल की राशि की गणना करने के लिए।
- चूहा प्रति एस्ट्राडियोल (यानी 0.2 मिलीलीटर) की प्रशासित मात्रा मानकीकृत करने के लिए गणना करना। एस्ट्राडियोल इसकी वजह से पानी जटिलता को भंग करने के लिए मुश्किल है और छोटी खुराक के लिए विलायक की एक बड़ी मात्रा की आवश्यकता है, जब तक भंग गर्मी पर तिल के तेल में एस्ट्राडियोल मिश्रण से एक शेयर समाधान तैयार करते हैं। समाधान तो contaminants को दूर करने के लिए 0.22 माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से पारित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, पशु प्रति एक 0.2 मिलीलीटर इंजेक्शन की मात्रा में 15 माइक्रोग्राम प्रति किग्रा / खुराक प्राप्त करने के क्रम में तिल के तेल की कुल जरूरत मात्रा करने के लिए एक 3000 माइक्रोग्राम प्रति एस्ट्राडियोल / 1 मिलीलीटर तिल का तेल स्टॉक समाधान की एक गणना मात्रा में जोड़ें।
नोट: वैकल्पिक, एस्ट्रोजन था के अन्य रूपों का उपयोग टी पानी में घुलनशील और भंग करने के लिए आसान कर रहे हैं।
6. दिन 2: एस्ट्राडियोल प्रशासन / विलुप्त होने प्रशिक्षण
- एस्ट्राडियोल subcutaneously प्रशासन। एक सज्जन चुटकी में गर्दन से कंधे की हड्डी के बीच ढीली त्वचा लिफ्ट और त्वचा सिलवटों द्वारा बनाई है कि त्रिकोण में सिरिंज सुई डालें।
- एस्ट्राडियोल के चमड़े के नीचे इंजेक्शन के बाद 30 मिनट, फिर कंडीशनिंग कक्षों में जानवरों जगह और विलुप्त होने प्रशिक्षण शुरू करते हैं। इस विलुप्त होने के सत्र में, 3 मिनट औसतन एक चर intertrial अंतराल पर प्रस्तुत एक 30 सेकंड, 4 किलोहर्ट्ज़, 80 डीबी स्वर से मिलकर प्रत्येक परीक्षण के साथ, 20 सीएस अकेले परीक्षणों प्रदर्शन करते हैं।
नोट: एस्ट्राडियोल पूर्व विलुप्त होने के प्रशिक्षण के लिए या तुरंत विलुप्त होने के बाद प्रशासित किया जाता है जब याद करते हैं पर एस्ट्राडियोल का प्रभाव होता है। प्रभाव 4 घंटे के बाद विलुप्त होने नहीं मनाया जाता है, तो यह प्रशिक्षण सत्र 15 की शुरुआत या अंत करने के लिए समय में करीब इंजेक्षन करने के लिए सिफारिश की है।
- विलुप्त होने के प्रशिक्षण के बाद 24 घंटा, 1 दिन और इस प्रोटोकॉल के दो पूरा जानवरों है कि झाड़ू।
- (दिन 1 और 2 के रूप में ही) अपने सौंपा कंडीशनिंग कक्षों में पशुओं रखें। कदम 6.2 में वर्णित के रूप में विलुप्त होने के प्रशिक्षण के लिए प्रशासित 20 परीक्षणों के समान intertrial अंतराल के साथ केवल 3.80 डीबी सीएस अकेले परीक्षणों के होते हैं, जो 3 सीएस अकेले परीक्षण (विलुप्त होने याद की तीन परीक्षणों), पेश करके विलुप्त होने याद सत्र शुरू करो।
- याद सत्र की समाप्ति पर, उनके घर पिंजरों के लिए जानवरों वापसी।
8. डेटा विश्लेषण
- वीडियो के माध्यम से व्यवहार डेटा मोल और कंप्यूटर सॉफ्टवेयर का उपयोग कर उन्हें विश्लेषण।
नोट: समय का प्रतिशत स्वर दौरान ठंड बिताया रूप बर्फ़ीली स्कोर को भी स्वयं प्रत्येक परीक्षण के सीएस प्रस्तुति के दौरान ठंड मुकाबलों समय से नशीली दवाओं के उपचार के लिए अंधा होता है कि एक प्रयोगकर्ता द्वारा गिना जा सकता है, व्यक्त की है। ठंड है30 सेकंड सीएस-अमेरिका ट्रायल के दौरान सांस लेने के अपवाद के साथ आंदोलन का पूर्ण अभाव से परिभाषित किया। 100 से गुणा 30 सेकंड (परीक्षण की अवधि) से (स्थिर) ठंड बिताया सेकंड विभाजित करके प्रतिशत ठंड की गणना।
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Representative Results
इस डर से विलुप्त होने याद प्रोटोकॉल में, प्रतिशत ठंड डर का एक संकेतक के रूप में मापा गया था। अच्छी तरह से बुझा और विलुप्त होने के प्रशिक्षण की स्मृति को बनाए रखा है कि पशु विलुप्त होने याद दौरान व्यवहार परीक्षण के अंतिम दिन पर कम भय का प्रदर्शन किया। नर और मादा चूहों काफी सेफ, विलुप्त होने के दौरान वातानुकूलित डर अभिव्यक्ति में मतभेद है, और चरणों (चित्रा 2) याद नहीं है। जानवरों के उच्च और निम्न एस्ट्रोजन estrous चरण समूहों के रूप में अलग से विश्लेषण कर रहे हैं फिर भी, जब एक सेक्स का अंतर स्पष्ट हो जाता है। मद चक्र के कम एस्ट्रोजन metestrus चरण के दौरान विलुप्त होने के प्रशिक्षण से गुजरना है कि मादा चूहों 3 दिन के रूप में अच्छी तरह से proestrus में प्रशिक्षित लोगों के रूप में (चित्रा 3) पर विलुप्त होने स्मृति याद नहीं है। ये metestrus महिलाओं को भी पुरुषों की तुलना में विलुप्त होने स्मरण (गरीब विलुप्त होने स्मृति) के दौरान काफी अधिक डर वसूली दिखा रहे हैं। हालांकि, metestrus महिलाओं subcutaneously injec जब कर रहे हैंटेड विलुप्त होने सीखने के लिए पहले estradiol की एक 15 माइक्रोग्राम प्रति किग्रा / खुराक के साथ, भय विलुप्त होने स्मृति के समेकन के विलुप्त होने का स्मरण (चित्रा 4) के दौरान कम ठंड के द्वारा प्रदर्शन के रूप में बढ़ाया जा करने के लिए प्रकट होता है। इसलिए, इन आंकड़ों जननांगों हार्मोन डर विलुप्त होने याद मिलाना और भी वातानुकूलित डर विलुप्त होने के व्यवहार में सेक्स मतभेद मध्यस्थता कर सकते हैं कि संकेत मिलता है।
चित्रा 1: मद चक्र चरणों में सेल प्रकार के प्रतिनिधि छवियों (बढ़ाई 20X) Proestrus दौर, बैंगनी से सना हुआ केन्द्रक उपकला कोशिकाओं की जनता के द्वारा होती है।। मद नीले रंग से सना हुआ, स्क्वैमस श्रृंगित कोशिकाओं के समुच्चय से पहचाना जा सकता है। Metestrus और diestrus प्रकार की कोशिकाओं (ल्यूकोसाइट्स, एकल और श्रृंगित कोशिकाओं) का एक संयोजन व्यक्त लेकिन कम कोशिकाओं दिखा। एस्ट्रोजन का स्तर estrous चरणों भर में उतार-चढ़ाव, Proestrus दौरान बढ़ता जा। (मेट = metestrus;।। Diest = diestrus;। Proest = proestrus)। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:। प्रयोग के तीन चरणों भर में पुरुषों और महिलाओं के बीच तुलना आदी होना (। Hab) में मनाया कोई महत्वपूर्ण सेक्स मतभेद हैं, कंडीशनिंग (। Cond), विलुप्त होने, या प्रयोग 15 के चरणों को याद करते हैं।
चित्रा 3: proestrus के बीच व्यवहार मतभेद (उच्च एस्ट्रोजन) और metestrus (कम एस्ट्रोजन) महिलाओं उच्च एस्ट्रोजन proestrus चरण ओ में महिलाओं।कम एस्ट्रोजन metestrus में उन लोगों की तुलना मद चक्र प्रदर्शनी कम डर एफ। इन आंकड़ों को स्वाभाविक रूप से साइकिल महिलाओं में एस्ट्रोजन का स्तर बाद में 15 रिकॉल 24 घंटा modulating, भय विलुप्त होने स्मृति के समेकन प्रभावित कर सकते हैं सुझाव है कि।
चित्रा 4: metestrus महिलाओं में एस्ट्रोजेन उपचार। विलुप्त होने के प्रशिक्षण (तीर) से पहले एस्ट्राडियोल 30 मिनट का प्रशासन वाहन 16 की तुलना में विलुप्त होने याद की सुविधा।
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Discussion
डर विलुप्त होने के विभिन्न जोड़तोड़ के तहत की पहचान और मूल्यांकन वातानुकूलित डर विलुप्त होने मध्यस्थता तंत्रिका तंत्र के साथ नर चूहों में बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है। अपेक्षाकृत कुछ अध्ययनों से मादा चूहों या भय विलुप्त होने में जननांगों हार्मोन की भूमिका की जांच की है। विशेष रूप से डर विलुप्त होने पर एस्ट्रोजेन के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए, स्वाभाविक रूप से साइकिल मादा चूहों तीन दिवसीय व्यवहार प्रतिमान के अधीन हैं। इस प्रक्रिया के आदी होना / कंडीशनिंग, विलुप्त होने, और विलुप्त होने याद चरणों के होते हैं। इस प्रोटोकॉल का प्रयोग, यह मादा चूहों को उच्च एस्ट्रोजन proestrus 15 में बुझा रहे हैं कि महिलाओं की तुलना में कम एस्ट्रोजन metestrus चरण प्रदर्शनी उच्च ठंड (या बिगड़ा विलुप्त होने रिकॉल) के दौरान विलुप्त होने के साथ प्रशिक्षित किया है कि प्रदर्शन किया गया है। Metestrus चरण के दौरान विलुप्त होने के प्रशिक्षण के लिए पहले एस्ट्राडियोल का प्रशासन विलुप्त होने स्मृति 16 के समेकन modulates। इस freezin में कमी द्वारा प्रदर्शन किया हैविलुप्त होने याद दौरान छ। साथ में, इन परिणामों डिम्बग्रंथि हार्मोन के प्रभाव और व्यवहार पर मद चक्र पर ध्यान के साथ महिला अध्ययन के संचालन के महत्व पर प्रकाश डाला। नियंत्रण प्रयोगों यहाँ वर्णित नहीं किया गया है, यह कोई विलुप्त होने समूहों यानी, आगे विलुप्त होने स्मृति समेकन में शामिल प्रक्रियाओं पर एस्ट्रोजेन के प्रभाव का मूल्यांकन करने, उचित नियंत्रण शामिल करने के लिए आवश्यक हो जाएगा।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य दो गुना है: 1) बरकरार पशुओं में मद चक्र के विशिष्ट चरणों के दौरान वातानुकूलित डर विलुप्त होने पर एस्ट्रोजेन के प्रभाव की जांच करने के लिए, और 2) सामान्य रूप से कम एस्ट्रोजन राज्य कर सकते है कि कैसे तीव्र एस्ट्राडियोल प्रतिस्थापन महिला दौरान जांच करने के लिए अपने व्यवहार मिलाना। यहाँ वर्णित योनि swabbing प्रक्रिया के माध्यम से, मद चक्र के चार चरणों की पहचान की जा सकती है: मद, metestrus, diestrus, और proestrus। यह हमें जब डिम्बग्रंथि हार्मोन सु व्यवहार का आकलन करने के लिए अनुमति देता हैएस्ट्रोजन के रूप में चर्चा कम और उच्च सांद्रता में स्वाभाविक रूप से कर रहे हैं। उदाहरण के लिए, एस्ट्रोजन का स्तर मद (20-40 स्नातकोत्तर / एमएल), metestrus (15-20 स्नातकोत्तर / एमएल) के दौरान कम कर रहे हैं, और diestrus (25-40 स्नातकोत्तर / एमएल) के चरणों, लेकिन proestrus के दौरान उच्च (~ 75 पीजी / मद चक्र 27,28 के मिलीलीटर) चरण। इन चरणों केवल हार्मोनल परिवेश में मतभेद है लेकिन यह भी अवधि में नहीं। चर हालांकि, proestrus आम तौर पर 12 घंटा से 14 के लिए पिछले करने के लिए मनाया गया है; 25 के लिए 27 घंटे के लिए मद; 6 के लिए 8 घण्टे के लिए metestrus; और 55-57 घंटे के लिए diestrus। प्रत्येक चरण की अवधि diestrus या मद या तो 2 दिन भी शामिल है कि 5 दिन चक्र के लिए अग्रणी, एक दिन (पशु के आधार पर) की तुलना में लंबे समय तक या कम हो सकता है। उल्लेख किया है, proestrus और metestrus कम चरणों (क्रमशः 12-14 और 6-8 घंटा,) कर रहे हैं और याद किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में, यह विलुप्त होने प्रशिक्षण याद करने की क्षमता में अंतर-चरण मतभेद की जांच करने के लिए पशु के लिए स्वाभाविक रूप से साइकिल हार्मोन का उपयोग करते समय सावधानी मद चक्र की निगरानी के लिए इसलिए महत्वपूर्ण हैपहले दिन से। मादा चूहों में मद चक्र, बहुत मानव मासिक धर्म चक्र की तरह है, यह भी इस तरह के आदि उम्र, तनाव, दिन के समय, आवास की स्थिति, तापमान, के रूप में कई बाह्य कारकों, के प्रति संवेदनशील है, और प्रयोगों की योजना बनाते समय विचार किया जाना चाहिए। एक पशु अचक्रीय (विस्तारित मद / diestrus) हो या पहले या अध्ययन के दौरान एक अनियमित चक्र (कम से कम 4 दिनों या उससे अधिक समय से कम 5 दिन) प्रदर्शित हो सकता है। इस मामले में, इन जानवरों के मद चक्र के विशिष्ट चरणों के दौरान परीक्षण करने के लिए सख्त किया जा रहा है, प्रयोगात्मक विश्लेषण से बाहर रखा जाएगा। नोट करना महत्वपूर्ण नमूनों यह थोड़ा मुश्किल स्पष्ट रूप से प्रत्येक चरण की विशेषताएँ कि विशिष्ट प्रकार की कोशिकाओं की पहचान करने के लिए कर रही है, बलगम के साथ मिश्रित कर रहे हैं, जिसके दौरान संक्रमण चरण हैं। यह भी झाड़ू लिया जाता है कि दिन के समय की वजह से हो सकता है। कई हैंडलिंग दिनों swabbing के बिना पारित करने की अनुमति दैनिक swabbing का एक परिणाम के रूप में धब्बा संग्रह के दौरान बलगम की तरह मुक्ति का एक अत्यधिक राशि, अगर वहाँइस समस्या को हल कर सकते हैं।
यहाँ वर्णित estrous चरण पहचान विधि के अलावा, अन्य पद्धति उपकरण सीरम डिम्बग्रंथि हार्मोन सांद्रता परिसंचारी के उपायों को प्राप्त करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, एस्ट्रोजन एकाग्रता एक एंजाइम से जुड़ी immunosorbant परख (एलिसा) का उपयोग करते हुए रक्त के नमूनों में मात्रा निर्धारित किया जा सकता है। इस प्रक्रिया में, नमूने एक एंजाइम से जुड़ा हुआ है जो एक विशिष्ट विरोधी एस्ट्रोजन एंटीबॉडी के लिए बाध्य सीरम / प्लाज्मा भीतर एस्ट्रोजेन। एंजाइम की सब्सट्रेट इस तरह के एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जा सकता है कि एक रंग बदलने के रूप में एक दृश्य संकेत में यह परिणाम है कि एक प्रतिक्रिया पैदा करता है। यह उपकरण absorbance के गणना करता है और नमूना में एस्ट्रोजन स्तर की एक मात्रा का ठहराव प्रदान करता है। इस विधि के प्रयोग के दौरान विशिष्ट समय में अधिक महत्वपूर्ण बात स्वाभाविक रूप से आकलन करने मद चक्र भर में एस्ट्राडियोल स्तर अस्थिर है, और में उपयोगी हो सकता है। यह भी आदर्श बदल सकते हैं एस्ट्रोजेन के कैसे बहिर्जात प्रशासन का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैअल शारीरिक सांद्रता। स्मीयरों कारण नमूनों में बलगम को पढ़ने के लिए मुश्किल हो जाता है जब खून से एस्ट्रोजन सांद्रता का मापन संक्रमण चरणों के दौरान चरण पहचान के साथ कठिनाइयों को रोकने, या कर सकते हैं। दुर्भाग्य से, इस विधि काफी महंगा हो सकता है और ऑफर योनि धब्बा संग्रह की तुलना में परिणामों में देरी की।
प्रक्रियाओं, पर्याप्त रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए जैसे।, पूंछ नस, कक्षीय साइनस, पूंछ कटाव, और saphenous नस 29 के माध्यम से, पशु को अनावश्यक तनाव का कारण बन सकता है। यह गलत या विषम माप के लिए अग्रणी प्रयोग में महत्वपूर्ण समय पर हार्मोन के स्तर को प्रभावित कर सकता है। एस्ट्राडियोल के स्तर को मापने के लिए ट्रंक रक्त का उपयोग टर्मिनल है और इसलिए चरणों के भीतर हार्मोनल उतार चढ़ाव के बारे में बहुत सीमित जानकारी प्रदान करता है। योनि सेल कोशिका विज्ञान आकलन के लिए एक बेहतर विकल्प की पेशकश करने के लिए प्रकट होता है। इस विधि केवल estrous चरणों भर डिम्बग्रंथि हार्मोन प्रोफाइल के एक मोटा अनुमान प्रदान कर सकता है, यह कर सकते हैंतनाव को कम करने और बाद में कम विघटनकारी व्यवहार प्रयोग करने के लिए है।
ऐसे estriol, एस्ट्राडियोल, और estrone के रूप में स्वाभाविक रूप से मानव और गैर मानव जानवरों में घूम रहे हैं कि estrogenic स्टेरॉयड के विभिन्न रूपों, कर रहे हैं। इस प्रोटोकॉल में, एस्ट्राडियोल तीव्रता से चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से किया जाता है। यह स्वाभाविक रूप से गैर गर्भवती महिलाओं के 30 में एस्ट्रोजन होने वाली के सबसे शक्तिशाली रूप है क्योंकि (E2, 17beta-एस्ट्राडियोल या बीटा-एस्ट्राडियोल का पर्याय बन गया) एस्ट्राडियोल, इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता है। Estradiol की तीव्र इंजेक्शन के विपरीत, अन्य प्रयोगशालाओं पुरानी एस्ट्रोजन प्रशासन के तरीकों कार्यरत है। उदाहरण के लिए, धीमी गति से जारी छर्रों या Silastic कैप्सूल के चमड़े के नीचे प्रत्यारोपण एस्ट्रोजन या वाहन समाधान 19 के स्थिर, निरंतर वितरण के लिए अनुमति देते हैं। यह प्रक्रिया आम तौर पर पशु की प्राकृतिक प्रजनन स्थिति को समाप्त जो ovariectomies, के साथ संयोजन के रूप में प्रयोग किया जाता है।
manipuयहाँ पर चर्चा रिश्तों प्रयोगशाला निष्कर्षों के नैदानिक आवेदन की सुविधा के लिए प्राकृतिक हार्मोन राज्यों पर ध्यान केंद्रित। बाद अभिघातजन्य तनाव विकार (PTSD) के साथ व्यक्तियों को आमतौर पर उनकी दर्दनाक अनुभव से संबंधित एक प्रोत्साहन के डर बुझाने के लिए और इस विलुप्त होने याद करने की क्षमता में प्रभावित कर रहे हैं। इस हालत अक्सर घटना से पारित कर दिया गया है लंबे समय के बाद बनी रहती है। लंबे समय तक निवेश चिकित्सा ऐसे में यहाँ वर्णित एक के रूप में कृंतक मॉडल में अध्ययन विलुप्त होने के आधार पर प्रक्रियाओं पर निर्भर करता है कि PTSD के लिए एक सामान्य उपचार विकल्प है। दिलचस्प बात यह है कि महिलाओं को पुरुषों तनाव और चिंता से संबंधित मानसिक बीमारियों के 31 विकसित करने के रूप में लगभग दो बार के रूप में होने की संभावना है। प्रसार में इस सेक्स फर्क डर विलुप्त होने की प्रक्रिया में लिंग भेद से जुड़ा हुआ है और इन प्रयोगशाला निष्कर्षों के संभावित चिकित्सीय महत्व underlies जा सकता है। महिलाओं में पीटीएसडी के उच्च प्रसार के बावजूद, अपेक्षाकृत कुछ कृन्तकों में विलुप्त होने के अध्ययन महिलाओं में आयोजित किया गया है डर लगता है। महिला के अध्ययन ध्यान केंद्रितव्यवहार में सेक्स मतभेद की जांच जब जननांगों हार्मोन की भूमिका पर आईएनजी अनदेखी नहीं की जानी चाहिए। स्वाभाविक रूप से मद चक्र भर में हार्मोन के स्तर में उतार-चढ़ाव का व्यवहार प्रभाव निस्र्पक पुरुषों और महिलाओं के बीच व्यवहार में बुनियादी मतभेद में बहुमूल्य अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। इस प्रोटोकॉल में इस तरह के भय विलुप्त होने के रूप में संज्ञानात्मक व्यवहार और प्रक्रियाओं को सीमित करने के लिए भविष्य डिम्बग्रंथि हार्मोन का अध्ययन और पर उनके प्रभाव है, लेकिन नहीं की सुविधा के लिए एक बुनियादी मॉडल प्रदान करता है। इस प्रोटोकॉल एक विशिष्ट जननांगों हार्मोन पर केंद्रित है, एस्ट्रोजन, हालांकि, इस तरह प्रोजेस्टेरोन और टेस्टोस्टेरोन के रूप में अन्य हार्मोन के प्रभाव का भी मूल्यांकन किया जा सकता है। अन्य, औषधीय सेलुलर, और आणविक तकनीक के साथ संयोजन के रूप में यहाँ प्रस्तुत व्यवहार प्रतिमान का उपयोग (यानी, स्थानीय दवा लेनी, immunohistochemistry, पश्चिमी धब्बा), भविष्य के अनुसंधान के व्यवहार थेरेपी में वृद्धि हो सकती है कि मस्तिष्क के भीतर एस्ट्रोजन कार्रवाई की विशिष्ट साइटों / लक्ष्यों की पहचान कर सकते हैं।
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Disclosures
इस पांडुलिपि के लेखकों का खुलासा करने के लिए कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों या हित के अन्य संघर्ष किया है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fear conditioning chamber | Coulbourn Instruments | ||
| Graphic State | Coulbourn Instruments | ||
| Sound-attenuating box | Med Associates, Inc. | NIR-022MD | |
| Estradiol | Sigma-Aldrich | E1024 | In sesame oil for subcutaneous injection |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547-250ML | |
| Freezescan | Cleversys, Inc. | ||
| Dip quick stain | Jorgensen Laboratories, Inc. | J0322A1, J0322A2, J0322A3 | |
| Cotton-tipped applicators | Fisher Scientific | 23-400-114 | 6-inch, sterile |
| 0.9% saline | LabChem, Inc. | LC23460-2 | Sodium chloride w/v |
| Selectfrost microscope slides | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Virex II 256 | Diversey, Inc. | 5019317 | Dilute 1:256 with water |
| Luer-Lok Tip 1ml Syringes | Becton Dickinson | 309628 | |
| Hypodermic disposable needles | Exelint International, Co. | 26402 | 26-gauge |
References
- Baron-Cohen, S., Knickmeyer, R. C., Belmonte, M. K. Sex differences in the brain: implications for explaining autism. Science. 310 (5749), 819-823 (2005).
- Voyer, D., Voyer, S., Bryden, M. P. Magnitude of sex differences in spatial abilities: a meta-analysis and consideration of critical variables. Psychological Bulletin. 117 (2), 250-270 (1995).
- Pinker, S., Spelke, E. A Conversation with Steven Pinker and Elizabeth Spelke. The Science of Gender and Science. , Harvard University: Mind/Brain/Behavior Initiative. (2005).
- Hampson, E. Estrogen-related variations in human spatial and articulatory-motor skills. Psychoneuroendocrinology. 15, 97-111 (1990).
- Hampson, E., Kimura, D. Reciprocal effects of hormonal fluctuations on human motor and perceptual-spatial skills. Behavioral Neuroscience. 102, 456-459 (1988).
- Hampson, E. Variations in sex-related cognitive abilities across the menstrual cycle. Brain and Cognition. 14 (1), 26-43 (1990).
- Kilpatrick, D. G., Resnick, H. S., Milanak, M. E., Miller, M. W., Keyes, K. M., Friedman, M. J. National estimates of exposure to traumatic events and PTSD prevalence using DSM-IV and DSM-5 criteria. Journal of Traumatic Stress. 26 (5), 537-547 (2013).
- Breslau, N. Gender differences in trauma and posttraumatic stress disorder. Journal of Gender-Specific Medicine. 5 (1), 34-40 (2002).
- Frans, O., Rimmo, P. A., Aberg, L., Fredrikson, M. Trauma exposure and post-traumatic stress disorder in the general population. Acta Psychiatrica Scandinavica. 111 (4), 291-299 (2005).
- Breslau, N., Kessler, R. C., Chilcoat, H. D., Schultz, L. R., Davis, G. C., Andreski, P. Trauma and posttraumatic stress disorder in the community: the 1996 Detroit Area Survey of Trauma. Archives of General Psychiatry. 55 (7), 626-632 (1996).
- Seedat, S., Stein, D. J., Carey, P. D. Post-traumatic stress disorder in women: epidemiological and treatment issues. CNS Drugs. 19 (5), 411-427 (2005).
- Holbrook, T. L., Hoyt, D. B., Stein, M. B., Sieber, W. J. Gender differences in long-term posttraumatic stress disorder outcomes after major trauma: women are at higher risk of adverse outcomes than men. Journal of Trauma. 53 (5), 882-888 (2002).
- Labad, J., Menchon, J. M., Alonso, P., Segalas, C., Jimenez, S., Jaurrieta, N., et al. Gender differences in obsessive-compulsive symptom dimensions. Depression and Anxiety. 25 (10), 832-838 (2008).
- Gupta, R. R., Sen, S., Diepenhorst, L. L., Rudick, C. N., Maren, S. Estrogen modulates sexually dimorphic contextual fear conditioning and hippocampal long-term potentiation (LTP) in rats. Brain Research. 888, 356-365 (2001).
- Milad, M. R., Igoe, S. A., Lebron-Milad, K., Novales, J. E. Estrous cycle phase and gonadal hormones influence conditioned fear extinction. Neuroscience. 164 (3), 887-895 (2009).
- Zeidan, M., et al. Estradiol modulates medial prefrontal cortex and amygdala activity during fear extinction in women and female rats. Biological Psychiatry. 70 (10), 920-927 (2011).
- Lebron-Milad, K., Milad, M. R. Sex differences, gonadal hormones and the fear extinction network: implications for anxiety disorders. Biology of Mood & Anxiety Disorders. 2 (3), (2012).
- Rey, C. D., Lipps, J., Shansky, R. M. Dopamine d1 receptor activation rescues extinction impairments in low-estrogen female rats and induces cortical layer-specific activation changes in prefrontal-amygdala circuits. Neuropsychopharmacology. 39 (5), 1282-1289 (2013).
- Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17β-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. , e4013 (2012).
- Markham, J. A., Pych, J. C., Juraska, J. M. Ovarian hormone replacement to aged ovariectomized female rats benefits acquisition of the morris water maze. Hormones & Behavior. 42 (3), 284-293 (2002).
- Markowska, A. L., Savonenko, A. V. Effectiveness of estrogen replacement in restoration of cognitive function after long-term estrogen withdrawal in aging rats. Journal of Neuroscience. 22 (24), 10985-10995 (2002).
- Bredemann, T. M., McMahon, L. L. 17β Estradiol Increases Resilience and Improves Hippocampal Synaptic Function in Helpless Ovariectomized Rats. Psychoneuroendocrinology. 42, 77-88 (2014).
- Grueso, R., et al. Early, but not late onset estrogen replacement therapy prevents oxidative stress and metabolic alterations caused by ovariectomy. Antioxidants and Redox Signaling. 20 (2), 236-246 (2014).
- Shughrue, P. J., Bushnell, C. D., Dorsa, D. M. Estrogen receptor messenger ribonucleic acid in female rat brain during the estrous cycle: a comparison with ovariectomized females and intact males. Endocrinology. 131 (1), 381-388 (1992).
- Frye, C. A., Erskine, M. S. Influence of time of mating and paced copulation on induction of pseudopregnancy in cyclic female rats. Journal of Reproduction and Fertility. 90 (2), 375-385 (1990).
- Becker, J. B., et al. Strategies and methods for research on sex differences in brain and behavior. Endocrinology. 146, 1650-1673 (2005).
- Westwood, F. R. The female rat reproductive cycle: a practical histological guide to staging. Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).
- Hurn, P. D., Macrae, I. M. Estrogen as a Neuroprotectant in Stroke. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 20, 631-652 (2000).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Gillies, G. E., McArthur, S. Estrogen actions in the brain and the basis for differential action in men and women: a case for sex-specific medicines. Pharmacological Reviews. 62 (2), 155-198 (2010).
- Tolin, D. F., Foa, E. B. Sex differences in trauma and posttraumatic stress disorder: a quantitative review of 25 years of research. Psychological Bulletin. 132, 959-992 (2006).
