Injection intrathoracique : administration composée au cœur du poisson-zèbre adulte

1. Préparation du poisson pour l’injection intrathoracique

1. Attrapez un poisson-zèbre adulte (Danio rerio) avec un filet et transférez-le dans la solution anesthésique.
2. Après 1 à 2 minutes, lorsque le poisson cesse de nager et que le mouvement de l’opercule est réduit, touchez le poisson avec une cuillère en plastique pour vous assurer qu’il ne réagit à aucun contact.
3. Transférez rapidement et soigneusement le poisson avec la cuillère dans la rainure de l’éponge humide, avec le côté ventral vers le haut. La tête du poisson doit être dirigée à l’opposé de la main dominante de l’opérateur.

2. Micro-injection dans le péricarde

1. Sous le stéréomicroscope, observez attentivement le mouvement du cœur battant sous la peau du poisson. Déterminer visuellement le point d’injection au-dessus du cœur battant et au milieu du triangle défini par les plaques cartilagineuses ventrales (Figure 1D). Insérez l’extrémité du capillaire à un angle de 30 à 45° par rapport à l’axe du corps (Figure 1E). Pénètre doucement la peau avec l’extrémité du microcapillaire dans le péricarde (Figure 1C). Un point d’entrée optimal est plus proche de l’abdomen que de la tête.
   note: N’insérez pas le capillaire trop profondément dans le corps et le cœur, car cela causerait des lésions à l’organe. En cas de ponction cardiaque, l’aiguille se remplit généralement de sang. Si cela se produit, retirez le capillaire et excluez le poisson de l’expérience.
2. Une fois l’aiguille à l’intérieur du péricarde, terminez l’injection en appuyant sur la pédale du dispositif de micro-injecteur.
   note: Attention à ne pas injecter d’air dans la cavité thoracique.
3. Après l’injection, retirez doucement le capillaire du thorax et transférez immédiatement le poisson dans un réservoir avec de l’eau système pour la récupération.
4. Surveillez les poissons jusqu’à ce qu’ils se remettent complètement de l’anesthésie.
5. Prélevez le cœur au moment souhaité et préparez-le pour une analyse plus approfondie.
   note: Dans le cas où le poisson ne reprend pas le mouvement de l’opercule dans les 30 s, réanimez le poisson en pressant de l’eau dans les branchies avec une pipette en plastique.

Figure 1 : Injection intrathoracique (IT) chez le poisson-zèbre adulte. (A) Photographie d’un capillaire de microinjection tiré avec un filament (6 po, 1,0 mm de diamètre) et valeurs du programme d’extraction d’aiguille utilisé. (B) Photographie d’un capillaire de microinjection tiré avec un filament (6 po, 1,0 mm de diamètre) rempli de 2,5 μL de solution contenant 10 % de rouge de phénol. La pointe tirée de l’aiguille mesure au maximum 7 mm de long. (C) Représentation schématique de la procédure d’injection informatique. (D) Photographies de la procédure d’injection informatique. Cette figure a été modifiée de Bise et al. Les numéros des panneaux C et D correspondent aux mêmes étapes de la procédure : (1) le poisson est placé face ventrale vers le haut sur une éponge humidifiée. Le site de ponction (point rouge dans le triangle) est situé au centre de la poitrine, près des branchies. (2) Pénétration de l’aiguille dans le péricarde. Le point rouge indique le site de ponction. (3) L’injection est surveillée en observant la propagation de la solution rouge dans la cavité péricardique. (E) Plan d’injection informatique. L’angle entre le capillaire d’injection et l’axe du corps doit être compris entre 30° et 45° pour éviter la ponction cardiaque. (F) Photographies du thorax du poisson 1 heure après l’injection de l’IT des volumes indiqués. Des flèches blanches pointent vers le tissu rougeâtre, ce qui pourrait indiquer une hémorragie interne