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Medicine

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue

Published: January 3, 2013 doi: 10.3791/4059
Automatic Translation
1,2, 1,2, 1,2,3, 1, 1,2,4, 3,5, 6, 1,2,5,7,8, 1,2,5,8, 1,2,4,5,7
1The Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center, The Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Oncology, The Johns Hopkins University School of Medicine, 3Department of Dermatology, The Johns Hopkins University School of Medicine, 4Department of Surgery, Johns Hopkins University School of Medicine, 5The Sol Goldman Pancreatic Cancer Center, The Johns Hopkins University School of Medicine, 6Yale Cancer Center, Yale School of Medicine, 7The Skip Viragh Center for Pancreatic Cancer, The Johns Hopkins University School of Medicine, 8Department of Pathology, The Johns Hopkins University School of Medicine

Summary

B7-H1 (PD-L1) und seine Bindung an PD-1 einen großen tumorinduzierte immunsuppressiven Signal in Mikroumgebung des Tumors. Eine immunhistochemische Färbetechnik, die Expression und Lokalisation von B7-H1 in Pankreaskarzinom zu charakterisieren ist hier beschrieben.

Abstract

B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie von immunregulatorische Zelloberflächenproteinen, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation von zellvermittelten Immunantworten durch seine Wechselwirkung mit seinem Rezeptor, programmierten Zelltod-1 (PD -1) 1,2. Überexpression von B7-H1 durch Tumorzellen wurde in einer Reihe von menschlichen Krebsarten, einschließlich Melanom, Glioblastom und Karzinomen der Lunge, Brust, Dickdarm, Eierstock und Nierenzellen bemerkt worden, und wurde gezeigt, dass anti-Tumor-T beeinträchtigen Zell-Immunität 3-8.

Vor kurzem hat B7-H1 Expression von Pankreaskarzinom Geweben als potentieller prognostischer Marker 9,10 identifiziert worden. Zusätzlich hat Blockade von B7-H1 in einem Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs gezeigt worden, um eine Anti-Tumor-Antwort 11 zu erzeugen. Diese Daten legen nahe, wie wichtig B7-H1 als ein potenzielles therapeutisches Ziel. Anti-B7-H1-Blockade Antikörper sind daher in klinischen Studien für die mul geprüfttiple humanen soliden Tumoren wie Melanomen und Karzinomen der Lunge, Dickdarm, Niere, Magen und Bauchspeicheldrüse 12.

Um schließlich in der Lage sein, um die Patienten, die von B7-H1 Targeting-Therapien profitieren zu identifizieren, ist es wichtig, den Zusammenhang zwischen Expression und Lokalisation von B7-H1 und Ansprechen des Patienten auf die Behandlung mit B7-H1-Blockade Antikörper zu untersuchen. Untersuchen der Expression von B7-H1 in menschlichen Pankreaskarzinom Gewebe durch Immunhistochemie wird ein besseres Verständnis, wie diese mit-inhibitorische Signalmolekül trägt zur Unterdrückung der Antitumor-Immunität in Mikroumgebung des Tumors. Die Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) von Chen und Mitarbeitern entwickelt wurde gezeigt, zuverlässig Färbeergebnisse in Kryoschnitten mehrerer Arten von menschlichen neoplastischen Geweben 4,8 zu produzieren, aber auf Anfärben Paraffin eingebetteten Folien war eine Herausforderung, bis kürzlich 13-18. Wir haben developed die B7-H1 Färbeprotokoll für Paraffin eingebettete Folien Pankreaskarzinom Gewebe. Die B7-H1 Färbeprotokoll hier beschriebenen konsistente membranöse und zytoplasmatische Färbung von B7-H1 mit wenig Hintergrund.

Protocol

B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie von immunregulatorische Zelloberflächenproteinen, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation von zellvermittelten Immunantworten durch seine Wechselwirkung mit seinem Rezeptor, programmierten Zelltod-1 (PD -1) 1,2. Überexpression von B7-H1 durch Tumorzellen wurde in einer Reihe von menschlichen Krebsarten, einschließlich Melanom, Glioblastom und Karzinomen der Lunge, Brust, Dickdarm, Eierstock und Nierenzellen bemerkt worden, und wurde gezeigt, dass anti-Tumor-T beeinträchtigen Zell-Immunität 3-8.

Vor kurzem hat B7-H1 Expression von Pankreaskarzinom Geweben als potentieller prognostischer Marker 9,10 identifiziert worden. Zusätzlich hat Blockade von B7-H1 in einem Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs gezeigt worden, um eine Anti-Tumor-Antwort 11 zu erzeugen. Diese Daten legen nahe, wie wichtig B7-H1 als ein potenzielles therapeutisches Ziel. Anti-B7-H1-Blockade Antikörper sind daher in klinischen Studien für mehrere Menschen getestetsolider Tumoren wie Melanomen und Karzinomen der Lunge, Dickdarm, Niere, Magen und Bauchspeicheldrüse 12.

Um schließlich in der Lage sein, um die Patienten, die von B7-H1 Targeting-Therapien profitieren zu identifizieren, ist es wichtig, den Zusammenhang zwischen Expression und Lokalisation von B7-H1 und Ansprechen des Patienten auf die Behandlung mit B7-H1-Blockade Antikörper zu untersuchen. Untersuchen der Expression von B7-H1 in menschlichen Pankreaskarzinom Gewebe durch Immunhistochemie wird ein besseres Verständnis, wie diese mit-inhibitorische Signalmolekül trägt zur Unterdrückung der Antitumor-Immunität in Mikroumgebung des Tumors. Die Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) von Chen und Mitarbeitern entwickelt wurde gezeigt, zuverlässig Färbeergebnisse in Kryoschnitten mehrerer Arten von menschlichen neoplastischen Geweben 4,8 zu produzieren, aber auf Anfärben Paraffin eingebetteten Folien war eine Herausforderung, bis kürzlich 13-18. Wir haben die B7-H1 staini entwickeltng Protokoll für Paraffin eingebettete Folien Pankreaskarzinom Gewebe. Die B7-H1 Färbeprotokoll hier beschriebenen konsistente membranöse und zytoplasmatische Färbung von B7-H1 mit wenig Hintergrund.

Ein. De-parafinization

  1. Bake gleitet bei 55 ° C für 20 min.
  2. In einer chemischen Haube, Folien tauchen in Xylol für 10 min.
  3. Objektträger in frischem Xylol für 10 min.
  4. Objektträger in 100% Ethanol für 5 min.
  5. Objektträger in frisch 100% Ethanol für 5 min.
  6. Objektträger in 95% Ethanol für 5 min.
  7. Objektträger in 80% Ethanol für 5 min.
  8. Objektträger in entionisiertem Wasser für 5 min.

2. Antigen Retrieval

  1. Objektträger in Tris-EDTA-Puffer (pH 9,0) und Wärme in einem Dampfkochtopf bis 125 ° C für 30 sec, dann 90 ° C für 10 sek.
  2. Lassen Dias cool für 60 min.
  3. Objektträger in TBST für 5 min; repebei zweimal.

3. Färbung

  1. Wischen Sie Lösungen rund um das Gewebe auf den Folien. Markieren Sie einen Kreis um das Gewebe mit einer hydrophoben Stift.
  2. Objektträger in einer feuchten Kammer und vermeiden das Trocknen des Gewebes auf der Folie über den gesamten Färbeprozesses. Einen Tropfen (etwa 200 ul oder mehr, um das Gewebe vollständig zu bedecken Bereich) von Peroxidase Block innerhalb des hydrophoben Kreis auf der Rutsche und inkubieren in Peroxidase Block für 5 min.
  3. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min.
  4. Geben Sie einen Tropfen BLOCK ACE Blocking-Puffer auf jeder Folie und Inkubation für 15 min.
  5. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min.
  6. Geben Sie einen Tropfen Avidin-Lösung auf jeder Folie und Inkubation für 15 min.
  7. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min.
  8. Geben Sie einen Tropfen Biotin-Lösung auf jeder Folie und Inkubation für 15 min.
  9. Spülen slides mit TBST, dann in TBST für 5 min.
  10. Die Objektträger mit 1:1000 Verdünnung von Maus-Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) oder einer Maus IgG1 κ Isotypenkontrolle in 200 ul TBST bei 4 ° C über Nacht für 22 h + / - 1 h. Die endgültige Antikörperkonzentration in TBST ist 2,57 ug / ml.
  11. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen.
  12. Die Objektträger mit einem Biotin konjugiertes Ratte-anti-Maus-IgG1-Antikörper in einer sekundären 1:500 Konzentration (in 200 ul 2% Ziegenserum-Lösung) für 30 min.
  13. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen.
  14. Geben Sie einen Tropfen Streptavidin-Biotin-Komplex auf jeder Folie und Inkubation für 15 min (muss mindestens 30 min vor Gebrauch vorbereitet werden).
  15. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen.
  16. Geben Sie einen Tropfen Amplifikationsreagenz (verdünnt 2:1 mit TBST) auf jeder Folie und Inkubation für 4 min.
  17. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen.
  18. Geben Sie einen Tropfen Streptavidin-HRP auf jeder Folie und Inkubation für 15 min.
  19. Die Objektträger mit TBST, dann in TBST für 5 min. Zweimal wiederholen.
  20. Setzen Sie einen Tropfen 3,3-Diaminobenzidin (DAB)-Substrat und Chromogen auf jeder Folie entwickeln und die Farbe für 2 min.
  21. Unmittelbar nach der Farbentwicklung, waschen Folien mit ddH 2 O für 1-2 min.
  22. Die Objektträger mit einem Tropfen Hämatoxylin für 90 sec.
  23. Waschen mit ddH 2 O für 1-2 min.
  24. Waschen mit Seifenwasser Leitungswasser für 1-2 min.
  25. Waschen mit ddH 2 O für 1-2 min.

4. Dehydration und Montage

  1. Eintauchen der Objektträger in 80% Ethanol für 3 min.
  2. Tauchen Sie die Folien in 95% Ethanol für 3 min.
  3. Eintauchen der Objektträger in 100% Ethanol für 5 min. Wiederholen.
  4. Eintauchen der Objektträger in Xylol für 5 min. Wiederholen.
  5. Einen TropfenCytoseal 60 auf den Schlitten und Ort das Deckglas.

Tabelle 1 listet die Reagenzien in den oben beschriebenen Verfahren verwendet.

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Representative Results

Eine erfolgreiche immunhistochemische Färbung von B7-H1 demonstrieren die heterogene Expression von B7-H1 (braun Signale DAB Farbentwicklung) in Pankreaskarzinom. Einige Pankreaskarzinom-Zellen haben überwiegend membranöse Expression von B7-H1 (Abbildung 1A), während andere entweder vorwiegend zytoplasmatische Expression von B7-H1 oder wenig Expression von B7-H1 (Abbildungen 2 und 3). Normale Pankreasgangepithel drückt etwas B7-H1 (Abbildung 4). Anfärbung mit einem Maus-IgG1 κ Isotypkontrollantikörper anstelle des anti-B7-H1 Antikörper zeigt wenig Hintergrundfärbung (1B).

Abbildung 1
Abbildung 1. A. Die immunhistochemische Färbung mit dem Anti-B7-H1, zeigt Klon 5H1 Antikörper membranöse Expression auf einigen Pankreas-Adenokarzinomzellen. B. Immunohistochemische Färbung mit dem Isotyp-Kontrolle IgG1 zeigt wenig DAB Farbentwicklung auf dem gleichen Pankreaskarzinom Gewebe.

Abbildung 2
Abbildung 2. B7-H1 Expression im Zytoplasma von Pankreas-Adenokarzinomzellen.

Abbildung 3
Abbildung 3. Einige Pankreaskarzinom-Zellen exprimieren wenig B7-H1.

Abbildung 4
Abbildung 4. B7-H1 Expression auf normalem duktalen Epithel.

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Discussion

Immunhistochemische Färbung von B7-H1 auf Kryoschnitten In früheren Studien wurde für eine Vielzahl von Krebsarten 3,4 gemeldet. Jedoch klinischen Tumorproben üblicherweise nur in Form von in Paraffin eingebetteten Blöcke verfügbar. Die monoklonalen Antikörper 5H1 hat neuerdings erfolgreich an die Färbung von Paraffin eingebettet Tumorgeweben einschließlich Nierenzellkarzinom, Gebärmutterhalskrebs, Blasenkrebs und Melanom 13-18 angewandt. B7-H1 Färbung auf Paraffin eingebettete, 9,19 oder 20 Kryostaten Abschnitte Pankreaskarzinomen Geweben mit anderen monoklonalen Antikörpern wurde auch berichtet. Hier haben wir erfolgreiche Färbung von in Paraffin eingebetteten Pankreaskarzinom Gewebe mit dem 5H1 monoklonale Antikörper gegen B7-H1 gezeigt. Die Expression von B7-H1 in Pankreaskarzinomen heterogen ist, ähnlich wie in vielen anderen Arten von Tumoren wie Melanomen 4,21. Beide membranöse und zytoplasmatische Expression von B7-H1 are beobachtet mit einem Adenokarzinom-Zellen (Abbildungen 1 und 2). Membranöse Expression von B7-H1 steht mit seiner biologischen Funktion. Die Rolle der zytoplasmatischen B7-H1 in neoplastischen Geweben bleibt, erkundet zu werden. Normale epitheliale oder Pankreasgang Azinuszellen nicht exprimieren B7-H1 (Abbildung 4).

Alle Schritte in diesem Protokoll erfolgen bei Raumtemperatur, mit Ausnahme der Inkubation über Nacht bei 4 ° C. Antigen Wiedergewinnungsbedingungen in diesem B7-H1 Färbeverfahren verwendet wurden nicht in den vorgenannten Druckschriften 9,19 gemeldet. Der Amplifikationsschritt wurde ebenfalls nicht durch diese Studien verwendet. Wir fanden, dass die kritischen Schritte in diesem Protokoll die Antigen-Retrieval, die Inkubation über Nacht mit dem primären Antikörper, die Verstärkung und die DAB Farbentwicklung enthalten. Die Verdünnung der primären Antikörper müssen möglicherweise leicht für jeden unterschiedlichen Charge von 5H1 titriert werden. Verstärkung wurde genau bei 4 min gehalten miteine verdünnte Amplifikationsreagens. Diese Modifikationen verleihen ausreichende Verstärkung der positiven Signale ohne Erhöhung Hintergrund. Die Entwicklungszeit beträgt typischerweise 2 min, aber wir routinemäßig überwacht die Entwicklung unter dem Mikroskop, um eine optimale Färbung mit minimalem Hintergrund zu gewährleisten. Mit jeder Runde der Färbung, schließen wir eine Folie aus einem vorherigen Ansatz und eine Rutsche Tonsillengewebe als positive Kontrollen. Parakortikalen Färbung von B7-H1 in Tonsille wurde bisher 4 beschrieben. Wenn der Hintergrund hoch ist oder wenn es mehr als 5 Minuten dauert, um typische Signale in diesen Kontroll-Objektträger zu entwickeln, empfehlen wir ersetzen die Reagenzien für die kritischen Schritte und Überprüfung aller Färbeschritte.

Die Verwendung dieser Technik erlaubt Färbung für qualitative und halbquantitative Analysen von B7-H1 Expression und Lokalisierung auf neoplastischen Pankreas-Adenokarzinomzellen. Mit Änderung der Verdünnung des primären Antikörpers, der Länge und der Verdünnung des amplificatiam Schritt, und dem Zeitpunkt der Farbentwicklung, kann dieses Protokoll auf andere Gewebearten angewendet werden. Wir haben dieses Protokoll geändert und verwendet es für Brustkrebs und Sarkom Gewebe. Da B7-H1 und dessen Bindung an PD-1 einen großen tumorinduzierte immunsuppressiven Signal des Tumors Mikroumgebung wird diese Färbetechnik erleichtern das Verständnis der Rolle des Tumors Mikroumgebung in Tumor Initiation, Progression und Anti-Tumor-Immunantwort.

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Disclosures

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Acknowledgments

EB, KMB und HX tragen gleichermaßen. Diese Studie wurde von der NCI SPORE in Gastrointestinal Cancers P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Training Grant, Sol Goldman Pancreatic Cancer Center und National Pancreas Foundation unterstützt.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
CSA System Dako K1500 Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen
Avidin/Biotin Blocking Kit Vector SP-2001
Block ACE Serotec BUF029
Biotin anti-mouse IgG1 BD 553441
Mouse IgG1 K Isotype Control eBioscience 14-4714-85
TBS(Tris-buffered saline), 10X Cellgro 46-012-CM 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs;
Diluted to 1X with ddH2O for washes;
Tween 20 Sigma-Aldrich P1379 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST
Target Retrieval, 20x Celerus Wave 014-3000-000 Diluted to 1x with ddH2O
190 Proof Ethyl Alcohol Pharmco-Aaper 111000190
200 Proof Ethyl Alcohol Pharmo-Aaper 111000200
Xylene VWR 95057-827
Hematoxylin Richard-Allan Scientific 72804
Cytoseal 60 Richard-Allan Scientific 8310-4
Coverslips Corning 2940-245
Humidity chamber Sigma H6644
Table 1. Reagents and equipment.

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References

  1. Flies, D. B., Chen, L. The new B7s: playing a pivotal role in tumor immunity. J. Immunother. 30, 251-260 (2007).
  2. Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat. Med. 5, 1365-1369 (1999).
  3. Curiel, T. J., Wei, S., Dong, H., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P., Krzysiek, R., Knutson, K. L., et al. Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity. Nat. Med. 9, 562-567 (2003).
  4. Dong, H., Strome, S. E., Salomao, D. R., Tamura, H., Hirano, F., Flies, D. B., Roche, P. C., Lu, J., Zhu, G. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat. Med. 8, 793-800 (2002).
  5. Dong, H., Chen, L. B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity. J. Mol. Med. (Berl). 81, 281-287 (2003).
  6. Strome, S. E., Dong, H., Tamura, H., Voss, S. G., Flies, D. B., Tamada, K., Salomao, D., Cheville, J., Hirano, F., Lin, W., Kasperbauer, J. L., Ballman, K. V., Chen, L. B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma. Cancer Res. 63, 6501-6505 (2003).
  7. Hirano, F., Kaneko, K., Tamura, H., Dong, H., Wang, S., Ichikawa, M., Rietz, C., Flies, D. B., Lau, J. S., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity. Cancer Res. 65, 1089-1096 (2005).
  8. Thompson, R. H., Gillett, M. D., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Webster, W. S., Krejci, K. G., Lobo, J. R., Sengupta, S., Chen, L., Zincke, H., Blute, M. L., Strome, S. E., Leibovich, B. C., Kwon, E. D. Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17174-17179 (2004).
  9. Geng, L., Huang, D., Liu, J., Qian, Y., Deng, J., Li, D., Hu, Z., Zhang, J., Jiang, G., Zheng, S. B7-H1 up-regulated expression in human pancreatic carcinoma tissue associates with tumor progression. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 134, 1021-1027 (2008).
  10. Loos, M., Giese, N. A., Kleeff, J., Giese, T., Gaida, M. M., Bergmann, F., Laschinger, M., WB, M., Friess, H. Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer. Cancer Lett. 268, 98-109 (2008).
  11. Okudaira, K., Hokari, R., Tsuzuki, Y., Okada, Y., Komoto, S., Watanabe, C., Kurihara, C., Kawaguchi, A., Nagao, S., Azuma, M., Yagita, H., Miura, S. Blockade of B7-H1 or B7-DC induces an anti-tumor effect in a mouse pancreatic cancer model. Int. J. Oncol. 35, 741-749 (2009).
  12. Wang, S., Chen, L. Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7-H1/PD-1 cosignal pathways. Curr. Top Microbiol. Immunol. 344, 245-267 (2011).
  13. Thompson, R. H., Webster, W. S., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Leibovich, B. C., Kuntz, S. M., Sengupta, S., Kwon, E. D., Blute, M. L. B7-H1 glycoprotein blockade: a novel strategy to enhance immunotherapy in patients with renal cell carcinoma. Urology. 66, 10-14 (2005).
  14. Thompson, R. H., Kuntz, S. M., Leibovich, B. C., Dong, H., Lohse, C. M., Webster, W. S., Sengupta, S., Frank, I., Parker, A. S., Zincke, H., Blute, M. L., Sebo, T. J., Cheville, J. C., Kwon, E. D. Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up. Cancer Res. 66, 3381-3385 (2006).
  15. Thompson, R. H., Dong, H., Kwon, E. D. Implications of B7-H1 expression in clear cell carcinoma of the kidney for prognostication and therapy. Clin. Cancer Res. 13, 709s-715s (2007).
  16. Karim, R., Jordanova, E. S., Piersma, S. J., Kenter, G. G., Chen, L., Boer, J. M., Melief, C. J., vander Burg, S. H. Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma. Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009).
  17. Inman, B. A., Sebo, T. J., Frigola, X., Dong, H., Bergstralh, E. J., Frank, I., Fradet, Y., Lacombe, L., Kwon, E. D. PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression. Cancer. 109, 1499-1505 (2007).
  18. Brahmer, J. R., Drake, C. G., Wollner, I., Powderly, J. D., Picus, J., Sharfman, W. H., Stankevich, E., Pons, A., Salay, T. M., McMiller, T. L., Gilson, M. M., Wang, C., Selby, M., Taube, J. M., Anders, R., Chen, L., Korman, A. J., Pardoll, D. M., Lowy, I., Topalian, S. L. Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates. J. Clin. Oncol. 28, 3167-3175 (2010).
  19. Wang, L., Ma, Q., Chen, X., Guo, K., Li, J., Zhang, M. Clinical significance of B7-H1 and B7-1 expressions in pancreatic carcinoma. World J. Surg. 34, 1059-1065 (2010).
  20. Nomi, T., Sho, M., Akahori, T., Hamada, K., Kubo, A., Kanehiro, H., Nakamura, S., Enomoto, K., Yagita, H., Azuma, M., Nakajima, Y. Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clin. Cancer Res. 13, 2151-2157 (2007).
  21. Taube, J. M., Anders, R. A., Young, G. D., Xu, H., Sharma, R., McMiller, T. L., Chen, S., Klein, A. P., Pardoll, D. M., Topalian, S. L., Chen, L. Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape. Sci. Transl. Med. 4, 127ra37 (2012).

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