B7-H1 (PD-L1) и его привязка к PD-1 обеспечивает основной опухоли индуцированные иммуносупрессивной сигнала в микроокружение опухоли. Иммуногистохимического техники окрашивания, чтобы охарактеризовать выражением и локализации B7-H1 поджелудочной железы аденокарцинома описано здесь.
B7-H1/PD-L1, член B7 семьи иммунной нормативно поверхности клеток белков, играет важную роль в негативной регуляции клеточного иммунного ответа через его взаимодействие с рецептором, запрограммированной смерти-1 (PD 1) 1,2. Избыточная B7-H1 опухолевыми клетками было отмечено в ряде опухолей человека, в том числе меланомы, глиобластомы и рака легкого, молочной железы, толстой кишки, яичников, почек и клетки, и было показано, нарушить противоопухолевых Т- клеточного иммунитета 3-8.
Недавно B7-H1 выражение ткани поджелудочной железы аденокарцинома была определена в качестве потенциального прогностическим маркером 9,10. Кроме того, блокада B7-H1 в мышиной модели рака поджелудочной железы был показан по производству противоопухолевого ответа 11. Эти данные свидетельствуют о важности B7-H1 в качестве потенциальной терапевтической мишени. Anti-B7-H1 антитела блокады, следовательно, проходят клинические испытания для мноКратные человека солидных опухолей, включая меланомы и рака легких, толстой кишки, почек, желудка и поджелудочной железы 12.
Для того, чтобы в конечном итоге быть в состоянии идентифицировать пациентов, которые выиграют от B7-H1 таргетинга терапии, важно исследовать связь между выражением и локализации B7-H1 и реакции пациента на лечение B7-H1 антитела блокады. Изучение экспрессии B7-H1 в человеческой аденокарциномы поджелудочной ткани через иммуногистохимии даст лучшее понимание того, как это сотрудничество ингибирующее сигнальная молекула участвует в подавлении противоопухолевого иммунитета в микроокружение опухоли. Анти-B7-H1 моноклональных антител (клон 5Н1) разработал Чэнь и его коллеги была показана для получения надежных результатов окрашивания в cryosections несколько типов человеческих опухолевых тканях 4,8, но окрашивание на парафин слайды были проблемы, пока Недавно 13-18. У нас есть разработчикасбежала B7-H1 окрашивания протокол парафин слайды ткани поджелудочной железы аденокарцинома. B7-H1 окрашивания протокол, описанный здесь, производит последовательную мембранных и цитоплазматических окрашивания B7-H1 с небольшим фоном.
Иммуногистохимического окрашивания B7-H1 на cryosections сообщалось в предыдущих исследованиях для различных видов рака 3,4. Однако, клинические образцы опухоли обычно доступны только в виде парафин блоков. 5H1 моноклональные антитела, совсем недавно успешно применяется для окрашивания ?…
The authors have nothing to disclose.
EB, КМБ, и HX в равной мере. Это исследование было поддержано SPORE NCI в желудочно-кишечного P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten фонд, Фонд Viragh, ASCO премия для молодых следователь, NIH 5T32 CA0090701-28 Обучение Грант, Sol Goldman рака поджелудочной железы центр и Национальный фонд поджелудочной железы.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |