B7-H1(PD-L1)和PD-1的结合提供了重要的肿瘤引起的免疫抑制肿瘤的微环境中的信号。免疫组织化学技术的特点B7-H1在胰腺癌组织中的表达和定位的描述。
B7-H1/PD-L1,免疫调节的细胞表面蛋白的B7家族的成员,在负调控的细胞介导的免疫反应中起着重要的作用通过其与其受体的相互作用,程序性死亡-1(PD -1)1,2。已注意到在一个数量的人类癌症,包括黑色素瘤,胶质母细胞瘤,肺癌,乳腺癌,结肠癌,卵巢癌,肾细胞癌B7-H1由肿瘤细胞中的过表达,并已被证明是损害抗肿瘤T细胞免疫3-8。
近日,B7-H1表达的胰腺癌组织已被确定为一个潜在的预后标志物9,10。此外,封锁的B7-H1在胰腺癌的小鼠模型中已被证明产生的抗肿瘤反应11。这些数据表明,B7-H1的重要性,作为一个潜在的治疗靶。因此,抗-B7-H1阻断抗体在临床试验中被测试MULtiple人类固体肿瘤,包括恶性黑色素瘤及癌症的肺,大肠,肾,胃和胰腺12。
为了最终能够确定患者将受益于B7-H1靶向疗法,重要的是调查的表达和定位的B7-H1和B7-H1阻断抗体治疗病人的反应之间的相关性。检查通过免疫组化的人类胰腺癌组织中B7-H1的表达,将能够更好地了解如何共同抑制信号分子有助于抑制肿瘤的微环境中的抗肿瘤免疫。抗B7-H1的单克隆抗体(克隆5H1)由Chen和他的同事开发已被证明在冷冻切片的多种类型的人类肿瘤组织4,8产生可靠的染色结果,但染色石蜡包埋的幻灯片已经是一个挑战,直到最近13-18。我们必须开发私奔的B7-H1染色协议,石蜡包埋胰腺癌组织中的幻灯片。这里描述的B7-H1染色协议产生一致的膜和胞质染色B7-H1的一些背景知识。
B7-H1对冷冻切片的免疫组织化学染色,已报道在以前的研究中,用于各种癌症的3,4。然而,临床肿瘤样本通常只适用于石蜡包埋块的形式。 5H1单克隆抗体已被成功地应用到染色的石蜡包埋的肿瘤组织,包括肾细胞癌,宫颈癌,膀胱癌,黑色素瘤13-18。 B7-H1染色石蜡包埋9,19或低温恒温器20内的与其他单克隆抗体的胰腺癌组织上也有报道。这里,我们已经示出成功染?…
The authors have nothing to disclose.
EB,九巴,和HX的贡献相同。这项研究是由国家癌症研究所SPORE在胃肠道癌症P50 CA062924,NIH K23 CA148964,勒斯特加滕基金会,Viragh基金会,美国临床肿瘤学会青年研究者奖,美国国立卫生研究院5T32 CA0090701-28培训津贴,溶胶高盛胰腺癌中心,国立胰腺基金会的支持。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |