Encyclopedia of Experiments: Biology
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- ड्रोसोफिलिया मक्खियों में, एक उभरते दृश्य उत्तेजना एक शिकारी के दृष्टिकोण को संकेत देता है जो न्यूरोनल सर्किट को सक्रिय करता है जो एक भागने की प्रतिक्रिया को ट्रिगर करता है। इस तरह की प्रतिक्रिया को नियंत्रित करने वाले न्यूरोनल सर्किट में हेरफेर करने के लिए, उस सर्किट के भीतर विशेष न्यूरॉन्स में चैनलरोडोप्सिन-2 की तरह ट्रांसजेनिक प्रकाश-संवेदनशील ऑप्सिन व्यक्त करें।
चैनलरोडोप्सिन एक फोटो-सेंसिटिव ईट चैनल है जो चमकीली नीली रोशनी के संपर्क में आने पर खुलता है। सोडियम आयनों का बाद में प्रवाह एक क्रिया क्षमता को बढ़ाता है जो न्यूरॉन को सर्किट के साथ आग लगाने और रिले जानकारी का कारण बनता है। प्रकाश उत्तेजना के अलावा, चैनलरोडोप्सिन को खोलने के लिए कोफैक्टर ऑल-ट्रांस-रेटिना की आवश्यकता होती है।
इसलिए, फ्लाई फूड में ऑल-ट्रांस-रेटिना प्रदान करें, क्योंकि यह आमतौर पर बहुत कम मात्रा में मौजूद होता है। इसके अतिरिक्त, एक दृश्य उत्तेजना की प्रतिक्रिया में शामिल तंत्रिका सर्किट में न्यूरॉन्स की भूमिका की जांच करते समय, अन्य हल्की प्रतिक्रियाओं को रोकने के लिए नेत्रहीन मक्खियों का उपयोग करें।
अंत में, उभरते उत्तेजना के कारण होने वाले एक ही व्यवहार को ट्रिगर करने के लिए नीले रंग की एलईडी लाइट का उपयोग करें। उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम ऑप्टिक लोब न्यूरॉन्स में चैनलरोडोप्सिन व्यक्त करने वाली मक्खियों की भोजन तैयार करने और प्रकाश-प्रेरित व्यवहार प्रतिक्रिया देखेंगे।
- एक माइक्रोवेव में मानक कॉर्नमील फ्लाई फूड को पिघलाकर शुरू करें, और इसे छूने के लिए गर्म होने तक ठंडा होने दें। एक बार ठंडा होने के बाद, प्रत्येक शीशी में पहले से तैयार 20-मिलीमोलर ऑल-ट्रांस-रेटिना के 50 माइक्रोलीटर मिलाएं। फिर, शीशियों को ठंडा होने दें और आवश्यकता पड़ने तक प्रकाश से सुरक्षित रहें।
सबसे पहले, बर्फ पर मक्खियों को संक्षेप में एनेस्थेट करें। फिर, लगभग 2.25 मिलीमीटर का पोर व्यास बनाने के लिए टिप कट के साथ P1000 पिपेट युक्तियों में व्यक्तिगत मक्खियों को रखें, और प्रत्येक छोर को टेप के साथ सील करें। एक बार मक्खी जाग गई है और पिपेट टिप की खोज कर रही है, टेप हटा दें, और जल्दी से टिप को ऊर्ध्वाधर धारक में नाली में रखें।
मक्खियां आमतौर पर 30 से 60 सेकंड के बीच की नोक का पता लगाती हैं. जैसे ही फ्लाई टिप के ऊपर होती है, फ्लाई प्लेटफॉर्म पर उभरने से ठीक पहले कैमरा रिकॉर्डिंग शुरू कर देती हैं। फ्लाई प्लेटफॉर्म पर उभरने के बाद, एक से दो सेकंड इंतजार करें, और फिर नीली एलईडी चालू करें। जब तक फ्लाई उड़ान शुरू नहीं होती तब तक मैन्युअल रूप से समय को मापने के लिए टाइमर का उपयोग करें।
