光学顕微鏡で学ぶシナプス前サイレントシナプス
Summary
グルタミン酸作動性シナプスはサイレントモードにアクティブモードを切り替えることができます。我々は齧歯類の神経細胞の分散培養でそのシナプス前の活動状況を示すと、アクティブなシナプスを可視化するためにFM1 - 43色素の修正可能なフォームを使用し、すべてのグルタミン酸シナプスを可視化するvGluT – 1抗体による免疫染色可視化される。
Abstract
シナプス可塑性の基礎となる学び、覚え、また神経毒性になることから特に有害な侮辱を防止する適応性を表す可能性があるために神経系の能力。それは神経伝達物質のグルタミン酸を含む小胞を放出するシナプス前終末の能力のデジタルスイッチングのオンとオフのように表されるので、我々は一部に興味深いものですシナプス可塑性の形態を研究している。ここでは、齧歯類の海馬から調製した解離細胞培養におけるシナプス前終末の活動状況を可視化するためのプロトコルを示す。方法は、一般的にシナプス小胞を標識するために使用されるスチリル色素FM1 - 43の修正可能な形で染色を使用してアクティブなシナプスの検出に依存しています。この染色プロファイルは小胞性グルタミン酸輸送体1（vGluT – 1）に関係なく、活性化状態のすべてのグルタミン酸シナプスを標識するために設計された汚れに対する抗体と同じ端子の免疫染色と比較されます。私たちは、脱分極刺激はシナプス前サイレンシングを誘導することがわかります。ベースライン条件の下で静かであるシナプスの人口は、長期にわたる電気サイレンシングによってまたはcAMPシグナル伝達経路の活性化によって活性化することができます。
Protocol
文化の準備 0から3の動物1生後からラットまたはマウスの海馬細胞の解離細胞の培養します。私たちの神経細胞はに番号0の厚さのカバーガラスに広がるコラーゲン層への付着を回す基本的なアストロサイト単分子層、に従っている。平方センチメートル当たり約500個の細胞の密度で神経細胞プレート。 文化がシナプス発達と成熟を可能にするために10-14日のために成長?…
Discussion
意義
- 一般的にシナプスは、測定可能な確率で送信機を解放することによって動作すると考えられている。自分や他人が仕事では、小胞、神経伝達物質のトランスポーターやその他の重要なシナプスのマーカー2、6-8のフル装備にもかかわらず、いくつかのシナプスは神経伝達物質を放出する難治性であることがはっきりする。我々は、ニューロンの基底のネットワーク活動が非…
Acknowledgements
この作品は、ワシントン大学にNIHの助成金DA018109とMH78823、およびNIH神経科学ブループリントコアグラントP30NS057105によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
References
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PresynapticSilent SynapsesLight MicroscopySynaptic PlasticityNervous SystemLearnRememberAdaptabilityNeurotoxicPresynaptic PlasticityDigital SwitchingRelease VesiclesGlutamate NeurotransmitterVisualizing Activity StatusDissociated Cell CulturesRodent HippocampusStaining ProfileStyryl Dye FM1-43Synaptic VesiclesImmunostainingVesicular Glutamate Transporter 1 (vGluT-1)Depolarizing StimuliPresynaptic SilencingElectrical SilencingCAMP Signaling Pathways
Cite This Article
Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Benz, A. M., Mennerick, S. Presynaptically Silent Synapses Studied with Light Microscopy. J. Vis. Exp. (35), e1676, doi:10.3791/1676 (2010).