صامت Presynaptically الوصلات العصبية درس مع المجهر الضوئي
Summary
يمكن أن نقاط الاشتباك العصبي Glutamatergic التبديل من الوضع النشط لوضع صامت. علينا أن نظهر أن حالة النشاط قبل المشبكي في الثقافة فصلها من الخلايا العصبية القوارض وتصور باستخدام نموذج قابل للتثبيت الصبغة FM1 – 43 لتصور نقاط الاشتباك العصبي نشطة وimmunostaining مع vGluT 1 – الضد لتصور كل نقاط الاشتباك العصبي الغلوتامات.
Abstract
يكمن وراء اللدونة متشابك المرجح قدرة الجهاز العصبي على التعلم والتذكر ، وربما تمثل أيضا القدرة على التكيف التي يمنع ذلك من أن تصبح ضارة الشتائم أعصاب. لقد تم دراسة شكل من المرونة قبل المشبكي أن المثير للاهتمام ويرجع ذلك جزئيا يعبر عنه باعتباره التحول الرقمي على والخروج من قدرة المحطة قبل المشبكي ليالي لاطلاق سراح الحويصلات التي تحتوي على الغلوتامات العصبي. نحن هنا يبرهن على وجود بروتوكول لتصور حالة النشاط محطات قبل المشبكي في مزارع الخلايا تنفصل عن استعداد الحصين القوارض. وتعتمد الطريقة على الكشف عن نقاط الاشتباك العصبي النشطة باستخدام تلطيخ مع نموذج قابل للتثبيت الصبغة styryl FM1 – 43 ، تستخدم عادة لتسمية حويصلات متشابك. وبالمقارنة مع هذا الملف تلطيخ immunostaining من المحطات نفسه مع جسم مضاد موجه ضد الناقل الغلوتامات الحويصلي 1 (vGluT – 1) ، وصمة عار لتصميم ملصق عن نقاط الاشتباك العصبي الغلوتامات بغض النظر عن حالة التنشيط. نجد أن المحفزات لحث depolarizing إسكات قبل المشبكي. ويمكن تنشيط السكان من نقاط الاشتباك العصبي التي تلتزم الصمت في ظل ظروف خط الأساس إسكات الكهربائي لفترات طويلة أو عن طريق تنشيط مسارات cAMP في الإشارة.
Protocol
Discussion
أهمية
- عادة ما يعتقد أن نقاط الاشتباك العصبي للعمل عن طريق الإفراج عن الارسال مع وجود احتمال للقياس. العمل من أنفسنا والآخرين يجعل من الواضح أن بعض نقاط الاشتباك العصبي والحراريات إلى الإفراج عن الناقلات العصبية ، على…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل عن طريق المنح والمعاهد الوطنية للصحة DA018109 MH78823 ، والمعاهد الوطنية للصحة الأعصاب الأساسية P30NS057105 مخطط المنح في جامعة واشنطن.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
References
- Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures. J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S. Physiological activity depresses synaptic function through an effect on vesicle priming. J. Neurosci. 26, 6618-6626 (2006).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Chang, C., Taylor, A. A., Benz, A. M., Conti, A. C., Muglia, L. J., Mennerick, S. A specific role for Ca2+-dependent adenylyl cyclases in recovery from adaptive presynaptic silencing. J. Neurosci. 28, 5159-5168 (2008).
- Sara, Y., Mozhayeva, M. G., Liu, X., Kavalali, E. T. Fast vesicle recycling supports neurotransmission during sustained stimulation at hippocampal synapses. J. Neurosci. 22, 1608-1617 (2002).
- Kay, A. R., Alfonso, A., Alford, S., Cline, H. T., Holgado, A. M., Sakmann, B., Snitsarev, V. A., Stricker, T. P., Takahashi, M., Wu, L. G. Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat. Neuron. 24, 809-817 (1999).
- Rosenmund, C., Sigler, A., Augustin, I., Reim, K., Brose, N., Rhee, J. S. Differential control of vesicle priming and short-term plasticity by Munc13 isoforms. Neuron. 33, 411-424 (2002).
- Altrock, W. D., tom Dieck, S., Sokolov, M., Meyer, A. C., Sigler, A., Brakebusch, C., Fassler, R., Richter, K., Boeckers, T. M., Potschka, H., Brandt, C., Loscher, W., Grimberg, D., Dresbach, T., Hempelmann, A., Hassan, H., Balschun, D., Frey, J. U., Brandstatter, J. H., Garner, C. C., Rosenmund, C., Gundelfinger, E. D. Functional inactivation of a fraction of excitatory synapses in mice deficient for the active zone protein bassoon. Neuron. 37, 787-800 (2003).
- Ting, J. T., Kelley, B. G., Lambert, T. J., Cook, D. G., Sullivan, J. M. Amyloid precursor protein overexpression depresses excitatory transmission through both presynaptic and postsynaptic mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 353-348 (2007).
