Sinapsi Presynaptically silenzioso studiato con microscopia ottica
Summary
Sinapsi glutammatergica possibile passare da una modalità attiva di una modalità silenziosa. Abbiamo dimostrato che lo stato presinaptica attività nella cultura dissociata dei neuroni di roditori viene visualizzato per mezzo una forma risolvibile del colorante-43 FM1 per visualizzare sinapsi attiva e immunostaining con vGluT-1 anticorpi per visualizzare tutte le sinapsi glutammato.
Abstract
Alla base di plasticità sinaptica probabilmente la capacità del sistema nervoso per imparare e ricordare, che potrebbero anche rappresentare un adattamento che impedisce in qualche modo danneggiare gli insulti di diventare neurotossici. Abbiamo studiato una forma di plasticità presinaptica che è interessante anche perché è espresso in commutazione digitale on e off della capacità di un terminale presinaptico s per rilasciare vescicole contenenti il neurotrasmettitore glutammato. Qui mostriamo un protocollo per visualizzare lo stato di attività dei terminali presinaptici in colture cellulari dissociato preparati con l'ippocampo roditori. Il metodo si basa sulla rilevazione sinapsi attiva utilizzando colorazione con una forma risolvibile del colorante styryl FM1-43, comunemente usato per etichettare vescicole sinaptiche. Questo profilo colorazione viene confrontato con immunocolorazione dei terminali stessi con un anticorpo diretto contro il trasportatore del glutammato vescicolare 1 (vGluT-1), una macchia progettato per etichettare tutti sinapsi glutammato indipendentemente dallo stato di attivazione. Troviamo che stimoli depolarizzanti indurre silenziamento presinaptica. La popolazione di sinapsi che tace in condizioni basali può essere attivato prolungato silenzio elettrico o attraverso l'attivazione di percorsi di cAMP segnalazione.
Protocol
Discussion
Significato
- Tipicamente le sinapsi sono pensati per operare attraverso il rilascio di trasmettitore con una probabilità misurabile. Lavoro da noi stessi e gli altri rende evidente che alcune sinapsi sono refrattari al rilascio di neurotrasmettitore, nonostante una serie completa di trasportatore vescicolare dei neurotrasmettitori e altri indicatori chiave presinaptico 2, 6-8. Abbiamo dimostrato in precedenza che l'attività di rete basale nei neuroni è essenziale per mantenere questa popolazi…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da sovvenzioni NIH DA018109 e MH78823, e NIH Neuroscienze Blueprint Nucleo di Grant P30NS057105 alla Washington University.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
References
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