Serebellar Ataksi Fare Modelleri Değerlendirme Basit Kompozit Fenotip Puanlama Sistemi

Summary

Biz serebellar ataksi fare modelleri, hastalık şiddeti, hızlı ve hassas ölçümü için bir protokol tanımlamaktadır. Önlemler arka bacak clasping, çıkıntı testi, yürüme ve kifoz içerir. Bu protokol, etkili bir şekilde etkilenen ve etkilenmeyen bireyler arasında ayrımcılık ve zamanla etkilenen bireylerin ilerlemesi algılar.

Abstract

Biz cerebella ataksi fare modelleri, hastalık şiddeti, hızlı ve hassas ölçümü için bir protokol tanımlamaktadır. Spinoserebellar ataksileri, Huntington hastalığı ve spinobulbar müsküler atrofi de dahil olmak üzere çeşitli hastalık modellerinde fenotip değerlendirmeler, daha önce yayınlanmış türetilmiştir. Önlemler arka bacak clasping, çıkıntı testi, yürüme ve kifoz içerir. Her bir ölçüm, dört önlemler için 0-12 toplam 0-3 bir ölçekte kaydedilir. Da nörodejeneratif hastalık fenotiplerinin temporal ilerlemesi nicel sonuçları etkin bir şekilde etkilenen ve etkilenmeyen bireyler arasında ayrımcılık. Önlemler ayrı ayrı analiz veya daha fazla istatistiksel güç bir kompozit fenotip skoru birleştirilir. Dört açıklanan önlemlerin ideal bir kombinasyon söz konusu bozukluk bağlıdır. Biz transgenik fare modelinde spinoserebellar ataksi tip 7 (SCA7) bir hastalık şiddetini değerlendirmek için kullanılan protokol bir örnek sunmak.

Albert R. La Spada ve Gwenn A. Garden Bu yazının eşit katkıda bulunmuştur.

Protocol

Yanlılığı önlemek için, değerlendirmeler yapan deneyci hayvanın genotipi bilgiye sahip olmamalıdır. Bireysel önlemler en şiddetli halini temsil eden ilgili fenotip ve 3 yokluğu temsil eden 0 ile 0-3 bir ölçekte puanlanır. Her bir test puan tekrarlanabilir olduğundan emin olmak için birden çok kez yapılır. Obezite açıklanan tüm önlemler yorumlanması karmaşık hale getirecektir. Araştırmacı fenotip puanlama sonuçları yağlanma olası rolü değerlendirmek için aşağıdaki fareleri tartmak isteyebilirsiniz.

Ledge testi

Çıkıntı testi, ataksilerin ve diğer birçok nörodejeneratif hastalıklar bozulmuş, doğrudan bir koordinasyon ölçüsüdür. Bu tedbir, serebellar ataksi insan belirtileri en doğrudan karşılaştırılabilir.

1. Kaldırın fare kafes ve kafes çıkıntıya yerleştirin. Fareler genellikle çıkıntı boyunca yürüyüş ve kafes içine geri inmeye çalışacaktır.
2. Fare kafes çıkıntı boyunca yürür ve kendisini onun kafes içine düşürür olarak dikkate alınmalıdır. Yabani tip fare genellikle dengesini kaybetmeden çıkıntı boyunca yürüyecek ve incelikle kendisini kafese alt sırt, patilerini kullanarak. Bu 0 puan atanır. Fare çıkıntı boyunca yürürken temele kaybeder, ama aksi bir koordine görünür, 1 puan alır. Kafes içine inen etkili bir merkez yerine pençeleri arka bacaklar, ya da toprakları kullanmayın yoksa, 2 puan alır. Eğer çıkıntı düşer, ya da neredeyse bu yüzden, yürüme ya da kendisini düşürmek için çalışırken ya da sallar ve cesaret rağmen hareket reddediyor, 3 puan alır. Bazı fareler, onları kafes içine çıkıntı boyunca yürümeye ya da inmeye teşvik etmek için yumuşak bir dürtme gerektirir.
3. Çıkıntı test puanı kaydedin.

Hindlimb clasping

Clasping Hindlimb nörodejenerasyon fare modelleri, belirli ataksilerin [1] de dahil olmak üzere bir dizi hastalığın ilerlemesi bir belirteç.

1. , Baz istasyonunun yakınında kuyruk kavrayın ve çevredeki tüm nesnelerin net bir fare kaldırın.
2. 10 saniye boyunca hindlimb pozisyonu dikkate alınmalıdır. Arka ayaklarında sürekli karın, dışa yayvan varsa, 0 puan atanır. Bir hindlimb askıya zaman% 50 daha fazla karın doğru geri çekilir, 1 puan alır. Hem arka ayaklarında zaman askıya% 50'den fazla karın kısmen doğru geri çekilir, 2 puan alır. Arka ayaklarında tamamen geri çekilir ve karın askıya zaman% 50 daha fazla temas varsa, bu 3 puan alır.
3. Fare, kafese geri koyun ve hindlimb clasping puan kaydetmek.

Yürüyüş

Yürüyüş koordinasyon ve kas fonksiyonu bir ölçüsüdür.

1. Onun kafes fare çıkarın ve baş araştırmacı uzak bakacak şekilde düz bir yüzey üzerine yerleştirin.
2. Yürür gibi arkasından fare uyun. Fare, vücut ağırlığı, karın yere dokunmadan değil, tüm ekstremitelerde desteklenen ve her iki arka ayaklarında eşit katılımıyla ile, normalde hareket ederse, 0 puan alır. Bir titreme gösterir ya da yürürken, gevşek görünür, 1 puan alır. Gösteriyorsa ciddi bir titreme, şiddetli topallama, pelvis indirdi, ya da ayak lokomosyon ("ördek ayak") sırasında vücuttan uzaklaştıran noktası, 2 puan alır. Fare zorluk ilerlemeye ve zemin boyunca karın sürükler, 3 puan alır.
3. Fare, kafese geri koyun ve onun yürüyüş puan kaydetmek.

Kifoz

Kifoz karakteristik bir dorsal omurga eğriliği fare modelleri [2] nörodejeneratif hastalığın yaygın bir tezahürüdür. Nörodejenerasyon sekonder spinal kasları kas tonusu kaybı neden olur.

1. Fare, kafesinden çıkarın ve düz bir yüzey üzerine yerleştirin.
2. Bu yürüyüşler olarak dikkate alınmalıdır. Fare yürür ve kalıcı kifoz bulunmamış kolayca omurgayı düzeltmek için mümkün ise, 0 puan alır. Fare hafif kifoz sergileyen ancak omurga düzeltmek mümkün ise, 1 puan alır. Omurganın tamamen düzeltmek için mümkün ve kalıcı ama hafif kifoz korur, 2 puan alır. Yürür ya da oturur, 3 puan atanır fare belirgin kifoz korur.
3. Fare, kafese geri koyun ve onun kifoz puan kaydetmek.

Temsilcisi sonuçları

Yeterli sayıda hayvan, bu yordamı suşları arasında ve zaman içinde aynı gerginlik içinde fenotip farklılıkları algılama yeteneğine sahiptir. Veri analizi için, alarak, her bir tedbir için puanının hesaplanmasındaher bireyin üç ölçümleri demek. Önlemler, her birey için bir kompozit fenotip skoru içine ayrı ayrı analiz ya da kombine edilebilir.

Grafik ve önemini belirlemek için uygun istatistiksel yöntemler uygulanır. Şekil 1, bir fare transgenik SCA7 model bileşik bir fenotip değerlendirme sonuçlarını gösterir. Bu floxed SCA7 92Q transgenik model, 92 CAG tekrarları ile insan-7 ataksin gen loxP siteleri tarafından çevrili ve bir bakteriyel yapay kromozom ifade. Kompozit fenotip skoru 12 maksimum olası bir puan için clasping, çıkıntı yürüyüş, yürüme ve kifoz değerlendirmeler içerir. Insan hastalığı ilerici niteliği ile tutarlı bir artan kompozit fenotip skoru, floxed SCA7-92Q transgenik farelerin ilerici SCA7 fenotip olduğunu göstermiştir.

Şekil 1 Floxed-SCA7-92Q farelere 20 hafta (*** p <0.001 Bonferroni post-hoc 2-way ANOVA) başlayarak Sigara Transgenik littermates önemli ölçüde farklı bir ilerici SCA7 fenotip sergilerler. Fare, yürüyüş ve kifoz clasping çıkıntı testi için her biri 0-3 ölçek olarak değerlendirildi. Her yaşta her genotip için ortalama bileşik skoru hesaplandı. Barlar SEM temsil eder.

Discussion

Bu protokol, serebellar ataksi fare modelleri hastalık şiddetinin hassas ve kolay uygulanabilir bir değerlendirme olacak şekilde tasarlanmıştır. Skorlama sistemi bireysel bileşenleri nörodejenerasyon farklı fare modellerinde daha fazla veya daha az etkili olacaktır.

Bu skorlama sistemi elemanları insan nörodejeneratif hastalığın fare modelleri, çeşitli ataksilerin, Huntington hastalığı ve spinobulbar müsküler atrofi [1-3] de dahil olmak üzere etkin bir şekilde değerlendirmek için kullanılır olmuştur. Testler ideal bir kombinasyon söz konusu bozukluk bağlıdır. Bu protokol başlangıçta spinoserebellar ataksi tip 7 (SCA7) transgenik fare modelleri değerlendirmek için yazarlar tarafından dizayn edilmiştir.

Davranış bozukluklarının bir hayvan yeterince artık beslenme ve hidrasyon bağımsız olarak sürdürmek için mobil bir sahne olduğunu ilerledi, burada sunulan veri oluşturmak için istihdam SAC7 model, hayvanlar 40-43 hafta ya da daha erken yaşta kurban edildi.