ゼブラフィッシュ心筋症モデル:薬物による心毒性

Overview

このビデオでは、実験群のバリエーションを最小限に抑えたゼブラフィッシュ心筋症モデルを作成する技術を説明し、サンプルでは、ドキソルビシンを使用してゼブラフィッシュ心筋症モデルを作成します。

Protocol

1. 魚の中での DOX 注射

1. スポンジを入れたきれいな100mmのペトリ皿を解剖顕微鏡の下に置き、焦点を合わせます。スポンジを切って、長さ約4cmの空洞を作って魚を保持します。大きな魚のために長い空洞を作ります。
2. 10 μL マイクロシリンジで 34 G 針を準備します。針を1x HBSSバッファですすいで、シリンジとチューブから泡やブロックを取り除きます。
3. 0.16 mg/mL トリカインを含む胚水中の成体魚を2分間麻酔します。
   メモ: 5分以上の長時間麻酔とDOX注射は、魚の死を引き起こす可能性があります。
4. トリカインでスポンジを胚水に浸し、注射のためにスポンジに魚を移します。
5. 以下に説明する 2 つの方法のいずれかで IP DOX インジェクションを実行します。
   1. クラシック IP インジェクション
      1. スポンジの空洞に腹部を持つ魚を配置します。骨盤のひれの間の正中線に魚の体に45°の角度で、針を素早く挿入し、約1〜2mmを貫通する。すべてのDOXソリューションをゆっくりとリリースします。針を引き出す前に5 s待ちます。魚の腹に見える赤い色でDOXの配信を確認してください。
   2. 代替IPインジェクション
      1. 魚を右側の前にスポンジの上に横に置きます。左手で鈍いエンド鉗子を使って魚をそっと安定させ、右手でマイクロ注射器を持ちます。
      2. 針を骨盤ひれの上の横線の下に置き、ベベルを上に向けます。45°の角度で7時の位置を指し示し、骨盤と肛門ひれの間にある魚の空洞に針3〜4mmを挿入し、プランジャーをゆっくりと押し落とします。魚の腹に見える赤い色でDOXの配信を確認してください。
6. 注射した魚を新鮮なシステムの水で満たされたきれいな交差タンクに素早く移し、魚を回復させます。注射の間に1x HBSSバッファで針を一度すすい。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish