Overview
इस वीडियो में भारत की स्याही की मुद्रास्फीति का वर्णन किया गया है--एक धुंधला विधि--ट्यूमर युक्त माउस फेफड़ों में ट्यूमर पिंड की मात्रा निर्धारित करना । धुंधला होने के बाद, फेफड़ों में ट्यूमर नोड्यूल का निरीक्षण करने के लिए फेकेट के समाधान में फेफड़ों को ठीक किया जाता है।
Protocol
1. ट्यूमर असर फेफड़ों की भारत स्याही मुद्रास्फीति का उपयोग कर फेफड़ों मेटास्टेस का सत्यापन
नोट: लूसिफ़ेरेस लाइव ट्यूमर इमेजिंग परिणामों को मान्य करने के लिए, ट्यूमर-असर माउस फेफड़ों की भारत स्याही मुद्रास्फीति को ट्यूमर नोड्यूल की मात्रा निर्धारित करने के लिए प्रदर्शन करें। 4T1 कोशिकाएं अन्य अंगों और ऊतकों(चित्रा 1)में भी मेटास्टेसाइज करती हैं और इसलिए, जरूरत पड़ने पर ट्यूमर मेटास्टेसिस को मान्य करने के लिए इन अंगों की हिस्टोलॉजिकल परीक्षा की जानी चाहिए। यह प्रोटोकॉल एक उदाहरण के रूप में फेफड़ों के मेटास्टेसिस का उपयोग करता है।
- इच्छामृत्यु के लिए चूहों को अपने मौजूदा घर के पिंजरे में रखें। जब अन्य जानवरों के साथ रखे जाते हैं, तो उन चूहों को एक अलग पिंजरे में इच्छामृत्यु नहीं दी जाती है।
- पिंजरे फिल्टर शीर्ष निकालें और सीओ 2 फिल्टर शीर्ष के साथ बदलें। कंप्रेस्ड सीओ 2 गैस सिलेंडर चालू करें (100%) जो सीओ 2 फिल्टर टॉप से जुड़ा हुआ है। 2 एल/मिनट पर प्रवाह दर निर्धारित करें और कम से 10 मिनट के लिए CO2 पर रखें । यदि चूहे अभी भी 10 मिनट के अंत में सांस ले रहे हैं, तो चूहों के सांस लेना बंद करने के बाद कम से कम 1 मिनट तक सीओ 2 को छोड़ दें। सीओ 2 सिलेंडर कंट्रोल और फ्लो मीटर बंद कर दें। 3 मिनट और इंतजार करें और फिल्टर टॉप निकालें।
- एक पॉलीस्टीरिन बोर्ड पर अपनी पीठ पर बलिदान-माउस रखें। श्वासनली तक अबाधित पहुंच सुनिश्चित करने के लिए पैरों को पिन करें। चूहों को 70% इथेनॉल से स्प्रे करें।
- कैंची की एक जोड़ी का उपयोग करना, रिबकेज के माध्यम से माउस के मध्य पेट के मध्य रेखा के साथ और लार ग्रंथियों की ओर काट दिया। श्वासनली का निरीक्षण करें। श्वासनली को बेनकाब करने के लिए श्वासनली के आसपास के ऊतकों को हटाने के लिए संदंश का उपयोग करें।
- श्वासनली के नीचे एक पिपेट टिप को थ्रेड करें। एक हाथ से टिप पकड़े हुए, धीरे-धीरे श्वास नली को ऊपर और शरीर से दूर उठाएं।
- माउस को 180 डिग्री पकड़े हुए मंच को घुमाएं। ट्रेचिया के रास्ते फेफड़ों में इंडिया इंक (10% इंडिया इंक और 01% अमोनियम हाइड्रोक्साइड) इंजेक्ट करने के लिए 1/2 सीसी 27 जी 1/2 ट्यूबरक्यूलिन सिरिंज का इस्तेमाल करें । एक मजबूत प्रतिरोध महसूस किया जाता है जब तक पूरी तरह से स्याही के साथ फेफड़ों फुलाने।
- श्वासनली को काटने के लिए कैंची की एक जोड़ी का उपयोग करें। माउस को पकड़ने के लिए संदंश का उपयोग करें और फेफड़ों के नीचे संदंश का एक और सेट डालें और फेफड़ों के लोब्स को माउस से बाहर खींचें। फेफड़ों को संक्षेप में पानी युक्त बीकर में कुल्ला करें।
- एक रासायनिक धुएं हुड में, फेफड़ों को एक ग्लास प्रस्फुटन शीशी में स्थानांतरित करें जिसमें 3 मिलीलीटर फेकेटे का समाधान (50% इथेनॉल, 6% फॉर्मलडिहाइड, और 3% हिमनद एसिटिक एसिड) होता है। वाष्पीकरण से समाधान को रोकने के लिए शीशी को कैप करें।
नोट: ऊतकों को फेकेट के समाधान में अनिश्चित काल तक संग्रहीत किया जा सकता है। - कुछ ही मिनटों के बाद, काले फेफड़ों(चित्रा 1)पर सफेद डॉट्स के रूप में ट्यूमर पिंड का निरीक्षण करें। आंखों से सफेद ट्यूमर नोड्यूल दिखाई देता है। फेफड़ों को एक धुएं के हुड में एक डिश में स्थानांतरित करें और सफेद धब्बों की संख्या गिनें। प्रत्येक सफेद स्थान एक मेटास्टैटिक ट्यूमर नोड्यूल का प्रतिनिधित्व करता है।
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Representative Results
चित्रा 1. भारत इंक मुद्रास्फीति द्वारा फेफड़ों के ट्यूमर नोड्यूल का दृश्य। ट्यूमर असर माउस के फेफड़े भारत स्याही के साथ फुलाया गया था और फेकेटे के समाधान में तय किया गया था । सफेद बिंदु फेफड़ों के मेटास्टेस हैं।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 9 mm AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| 1/2 CC 27 G 1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 |
