의 형광 단백질의 편광 Translocation XenopusWnt 신호에 응답> Ectoderm
Summary
Xenopus ectoderm은 배아의 세포 극성의 연구에 대한 매력적인 모델이되고있다. 분석은 형광 단백질의 subcellular 배포는 ectoderm 세포에 과세되는, 설명되어 있습니다. 이 프로토콜은 신호의 공간적 제어 관련 주소 질문을하는 데 도움이됩니다.
Abstract
세포 극성 동적으로 배아 개발 1, 2 중 내장 및 외부 양쪽 요인에 의해 규제됩니다 진핵 세포의 기본 속성입니다. 이 규정에 관련된 신호 경로 중 하나는 embryogenesis 동안 여러 번 사용하고 인간의 질병에 3, 4, 5에 중요합니다 Wnt 경로입니다. 이 경로의 여러 분자 구성 요소는 coordinately 공간 제한 방식으로 신호를 통제하지만 기본 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다. Xenopus 배아 상피 세포가 다양한 신호 단백질의 subcellular 지방화를 공부하는 우수한 시스템입니다. 형광등 융합 단백질은 RNA의 microinjection에 의해 Xenopus의 배아에서 표현, ectodermal의 explants 준비하고 단백질 지방화는 epifluorescence에 의해 평가됩니다. 이 실험 프로토콜에서 우리는 Diversin, 신호 및 세포 극성 결정 6, 7에 연루되어 세포질 단백질의 subcellular 지방화는 Wnt 신호 전달 8 공부 Xenopus ectodermal 세포의 시각이다 방법에 대해 설명합니다. Wnt 리간드 또는 Frizzled 수용체의 Coexpression 붉은 형광 단백질, RFP와 함께 융합 Diversin의 유통을 바꿀지도 모르겠어, 그리고 편광 패션 8, 9에있는 세포막에 모집. 이 전 생체내 프로토콜은 신호의 공간적 제어 손상 조직과는 다른 그리고 더 많은 어려운 분석되는 교양 포유 동물 세포의 체외 연구에서에 대한 유용한 이외해야합니다.
Protocol
Discussion
우리는 Diversin의 subcellular 지방화를 특징으로 위의 프로토콜을 사용하고 있습니다. 동물 극 explants에서 Diversin – RFP는 핵 옆에 발견되었으며 cryosections (그림 1)에서 G – tubulin, centrosomal 마커와 colocalized. 단백질의 subcellular 지방화가 확인되면, 삭제 구조는 단백질 도메인이 필요하고 subcellular 지방화 충분되는 구축 생성할 수 있습니다. 이 방법을 사용 Diversin의 centrosomal 현지화 도메인은 중간에 매핑되?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
소콜 실험실에서 연구는 건강의 국가 Institues 후원됩니다.
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