Консервативные сигнализации инсулина пути найдены в плодовой мушки Дрозофилы Сделайте этот организм потенциального инструмента для моделирования метаболических расстройств, включая сахарный диабет II типа. В связи с этим, очень важно установить физиологические тесты для эффективного измерения системного действия инсулина в периферической глюкозы в распоряжении взрослых летать.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Инъекции инсулина и гемолимфы добычи для измерения чувствительности к инсулину у взрослых Дрозофилы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Консервативные питательных зондирования механизмы существуют между млекопитающими и плодовой мушки, где пептиды напоминающие млекопитающих инсулина и глюкагона, соответственно функция для поддержания гомеостаза глюкозы во время развития личиночной 1,2 этапов. Исследования в основном на пост-митотического мухи взрослых показали возмущения гомеостаза глюкозы в результате генетических абляции инсулин-подобный пептид (ЦЛП) продуцирующих клеток (IPC) 3. Таким образом, взрослые мухи весьма перспективны в качестве подходящей модели генетической системы для метаболических заболеваний, включая диабет второго типа. В целях дальнейшего развития системы плодовой мушки, сравнимый физиологические тесты, используемые для измерения толерантности к глюкозе и чувствительность к инсулину у млекопитающих должны быть установлены. С этой целью мы недавно описал роман методика измерения устный ответ на толерантность к глюкозе у взрослого человека летать и продемонстрировали важность для взрослых IPCs в поддержании гомеостаза глюкозы 4,5. Здесь мы изменили ранее описанной процедуры для инъекций инсулина 6 и соединил его с нового метода добычи гемолимфы для измерения периферической чувствительности к инсулину у взрослого человека летать. Уникально, наш протокол позволяет прямого физиологического измерения способности взрослой мухи распоряжаться периферических нагрузки глюкозой на инсулинотерапии, методологию, которая делает возможным охарактеризовать инсулина мутантов и возможных мер, влияющих на толерантность к глюкозе и чувствительность к инсулину у взрослой мухи.
Протокол
1. Подготовка Инсулин решения
- Подготовка свежих бычьих решение инсулина путем растворения инсулина в ФБР для достижения концентрации 0,01 мг / мл. Оба инсулина / PBS и контроля PBS решения должны быть на льду всей инъекции процедуры. Эти решения должны быть подготовлены с 0,5% (объем / объем) FD & C Blue нет. 1 пищевой краситель.
2. Подготовка игл и инъекций Настройка
- Подготовка капиллярных игл стекла с использованием микропипетки puller.The следующие съемник настройки дают иглы достаточно высокого качества для инъекций: Тепло, 345; Pull, 210; Скорость, 100; Время, 200 (100 мс). Только что вытащил иглы должны б....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Методике, описанной в настоящем докладе, потенциально полезны в любых исследований, которые исследует физиологические процессы, в результате чего обнаруживаются изменения в состав гемолимфы дрозофилы. Объединив впрыска и гемолимфы коллекции таким образом, можно установить непосредственный физиологически соответствующими последствиями частности экспериментального лечения или манипуляций. Основным преимуществом такого "кровопускания" технику в гемолимфе сбор по сравнению с предыдущими методами с участие.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантами НИА к YW.CF (AG21068, AG31086).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента / оборудование | Компания | Номер в каталоге | |
| Бычьего инсулина | Сигма | I5500 | |
| Бесконечность Глюкоза реагент | Thermo Electron Corporation | TR1541 | |
| Руководство microinjector | Саттер Инструмент | ||
| Р-87 Flamming / коричневый микропипетки съемник | Саттер Инструмент | ||
| Одноместный баррель боросиликатного стекла капиллярной | Системы AM | 626000 | |
| FD & C Blue № 1 | McCormick & компании | ||
| 1 мкл микрокапиллярных труб | Драммонд | ||
| Три оси микроманипулятора ручной и базы | Инструменты Всемирного Precision |
Ссылки
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora c....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
