نحن تصف طريقة لعملية وشاشة الميدانية التي تم جمعها. البعوض لمجموعة متنوعة من الفيروسات من خلال فحص خلايا فيرو الثقافة من خلال استخدام هذه التقنية ، وقد اكتشفنا 9 فيروسات مختلفة من الأسر التصنيفية 4 في البعوض التي تم جمعها في ولاية كونيتيكت.
أنواع البعوض أن تنقل عددا من الفيروسات متميزة بما في ذلك مسببات الأمراض البشرية الهامة مثل فيروس غرب النيل ، وفيروس حمى الضنك ، وفيروس chickungunya. وقد كثفت العديد من هذه الفيروسات في نطاقاتها المتوطنة وتوسيعها لمناطق جديدة ، مما يستدعي المراقبة والسيطرة الفعالة برامج للرد على هذه التهديدات. استراتيجية واحدة لمراقبة نشاط فيروس ينطوي على جمع أعداد كبيرة من البعوض من المواقع الموبوءة واختبارها للعدوى الفيروسية. في هذه المقالة ، ونحن تصف كيفية التعامل معها ، والعملية ، والشاشة التي تم جمعها ميدانيا البعوض عن الفيروسات المعدية التي فيرو الخلية مقايسة الثقافة. يتم فرز حسب الموقع البعوض وأنواع الشرك ، وتجميعها في أحواض تحتوي على ≤ 50 فردا. والمتجانس العينات المجمعة مخزنة في المياه المالحة باستخدام خلاط ، مطحنة ، وتحصين المرحلة المائية متكدسة على الثقافات الخلية فيرو (استنساخ E6). ويتم رصد مزارع الخلايا لتأثير الاعتلال الخلوي من الأيام المحددة 3-7 بعد التلقيح وأي فيروسات نمت في الثقافة الخلية المقايسات التشخيصية المناسبة. باستخدام هذا النهج ، ونحن عزل 9 فيروسات مختلفة من البعوض التي تم جمعها في ولاية كونيتيكت ، الولايات المتحدة الأمريكية ، وبين هؤلاء ، ومن المعروف أن تسبب المرض 5 الإنسان. ثلاثة من هذه الفيروسات (فيروس غرب النيل ، وفيروس بوتوسي ، ولوس انجليس لفيروس كروس) تمثل سجلات جديدة لأمريكا الشمالية أو منطقة نيو إنجلاند منذ عام 1999. القدرة على الكشف عن تنوع واسع من الفيروسات أمر بالغ الأهمية لرصد كل من أنشأ والفيروسات الناشئة حديثا في أسراب البعوض.
فيرو مقايسة خلية ثقافة بمثابة وسيلة فعالة للبعوض الشاشة الميدانية التي تم جمعها لمجموعة متنوعة من الفيروسات. هذا يتناقض مع الأساليب الجزيئية التي تستهدف على وجه التحديد واحد أو عدد قليل من الفيروسات الفائدة. علاوة على ذلك ، وجدنا أن فيرو مقايسة ثقافة الخلية بنفس الق…
The authors have nothing to disclose.
نحن نعترف بامتنان بالمساهمات الهامة من الدكاترة. جون أندرسون ، واندرو شيرلي Tirrell الرئيسية لهذه الدراسة. وأيد هذا العمل في جزء من المنح المقدمة من مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (U50/CCU116806-01-1) وزارة الزراعة الأمريكية (58-6615-1-218 ، CONH00768 وCONH00773).
Name of reagent/ equipment | Company | Catalog Number |
---|---|---|
Fetal bovine serum | Gibco – Invitrogen | 16140 |
Anti-biotic/mycotic | Gibco – Invitrogen | 15240 |
Sodium bicarbonate NaHCO3, 7.5% Soln. | Gibco – Invitrogen | 25080 |
L-Glutamine 200mM 100x | Gibco-Invitrogen | 25030 |
Powdered minimal essential medium (MEM) | Gibco – Invitrogen | 11700 |
10X Dulbecco’s PBS | Gibco – Invitrogen | 14080 |
Trypsin-EDTA | Gibco – Invitrogen | 15400 |
Rabbit serum | Gibco – Invitrogen | 16120 |
Vero Cells (Clone E6) | ATCC | CRL-1586 |
Small tissue culture flasks, vented caps, 25 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353112 |
Large tissue culture flasks, vented caps, 175 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353108 |
Copper-coated BB’s, 4.5 mm | Crosman | 0767 |
Mixer Mill | Retsch | MM300 |
Isopack freezer racks | Eppendorf | 022510240 |