베로 세포 배양 분석하여 필드 수집 모기에서 감염성 바이러스의 검출
Summary
우리는 처리 방법을 설명하고 화면의 필드 수집 베로 세포 배양 분석에 의해 바이러스의 다양성을 위해 모기. 이 기술을 채용함으로써, 우리는 코네티컷에서 수집한 모기 4 taxonomic 가정에서 9 가지 바이러스를 감지했습니다.
Abstract
모기는 웨스트 나일 바이러스, 뎅그열 바이러스 및 chickungunya 바이러스와 같은 중요한 인간 병원균을 포함하여 별개의 바이러스의 숫자를 전송. 이 바이러스의 대부분은 자신의 발병 범위의 강화와 새로운 영역을 확장, 이러한 위협에 대응하는 효과적인 감시 및 제어 프로그램을 necessitating 있습니다. 바이러스 활동을 모니터링하는 한 가지 전략은 발병 사이트 모기의 대규모 번호를 수집하고 바이러스 감염을 테스트 포함됩니다. 이 문서에서는, 우리는 처리하는 방법을 과정을 설명하고, 베로 세포 배양 분석하여 전염성 바이러스에 모기를 현장 수집 화면. 모기가 트랩 위치와 수종별로 분류하고, ≤ 50 개인가 들어있는 수영장으로 분류됩니다. 풀링 표본은 믹서 – 공장 및 수성 단계가 합류 베로 세포 배양 (복제 E6)에 주사됩니다를 사용하여 버퍼 호수에 균질하고 있습니다. 세포 배양은 3-7 이후 접종 및 세포 배양 재배 바이러스가 적절한 진단 assays에 의해 식별됩니다 시절부터 cytopathic 효과에 대한 모니터링입니다. 이 방법을 이용하여, 우리는 코네티컷, 미국에서 수집한 모기에서 9 가지 바이러스를 격리 있고,이 중에서 5 인간의 질병을 일으키는 것으로 알려져 있습니다. 이러한 바이러스의 세 (웨스트 나일 바이러스, 포토 바이러스와 라 크로스 바이러스) 북미 또는 1999 년 이후 뉴잉글랜드 지역에 대한 새로운 기록을 나타냅니다. 바이러스의 광범위한 다양성을 감지하는 능력은 모두 모기가 인구에 설립하고 최근 새로운 바이러스 모니터링하는 것이 중요합니다.
Protocol
Discussion
베로 세포 배양 분석은 바이러스의 다양성을위한 화면 필드 수집 모기에 효과적인 방법으로 제공하고 있습니다. 이것은 구체적으로 목표 하나 또는 관심있는 몇 가지 바이러스 분자 방법 대조를 이룹니다. 또한, 우리는 베로 세포 배양 분석이 똑같이 RT – PCR 7보다 민감한 경우가 아니므로 미래 연구를위한 참조 컬렉션에 저장된 바이러스 격리 우리에게 제공하는 것으로 나타났습니다. 그?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 기꺼이 DRS의 중요한 기여를 인정합니다. 존 앤더슨, 앤드류 메인이 공부 셜리 티렐. 이 작품은 질병 통제 및 예방 (U50/CCU116806-01-1)와 농업의 미국학과 (58-6615-1-218, CONH00768 및 CONH00773)의 센터에서 교부금에 의해 부분적으로 지원되었다.
Materials
| Name of reagent/ equipment | Company | Catalog Number |
|---|---|---|
| Fetal bovine serum | Gibco – Invitrogen | 16140 |
| Anti-biotic/mycotic | Gibco – Invitrogen | 15240 |
| Sodium bicarbonate NaHCO3, 7.5% Soln. | Gibco – Invitrogen | 25080 |
| L-Glutamine 200mM 100x | Gibco-Invitrogen | 25030 |
| Powdered minimal essential medium (MEM) | Gibco – Invitrogen | 11700 |
| 10X Dulbecco’s PBS | Gibco – Invitrogen | 14080 |
| Trypsin-EDTA | Gibco – Invitrogen | 15400 |
| Rabbit serum | Gibco – Invitrogen | 16120 |
| Vero Cells (Clone E6) | ATCC | CRL-1586 |
| Small tissue culture flasks, vented caps, 25 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353112 |
| Large tissue culture flasks, vented caps, 175 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353108 |
| Copper-coated BB’s, 4.5 mm | Crosman | 0767 |
| Mixer Mill | Retsch | MM300 |
| Isopack freezer racks | Eppendorf | 022510240 |
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