Выявление инфекционных Касперского с поля, собранные Комары от Vero Пробирной культуры клеток
Summary
Мы опишем метод для обработки и экран полевых собраны комаров для разнообразия вирусов Веро анализа культуры клеток. Используя эту технику, мы обнаружили 9 различных вирусов из 4 семей в таксономических комаров, собранных в Коннектикуте.
Abstract
Комары передавать число различных вирусов, включая важных человеческих патогенов, таких как вирус Западного Нила, лихорадка денге вируса, и chickungunya вируса. Многие из этих вирусов активизировались в эндемичных диапазонов и расширена на новые территории, что требует эффективных программ надзора и контроля, чтобы реагировать на эти угрозы. Одна из стратегий для мониторинга вирусной активности включает в себя сбор большого количества комаров из эндемичных сайтов и их тестирования на вирусную инфекцию. В этой статье мы опишем, как в обращении, процесс, и экран полевых собраны комаров для инфекционного вируса от Vero анализа культуры клеток. Комары сортируются по расположению ловушку и видов, а сгруппированы в пулы содержащего ≤ 50 человек. Объединенные образцы гомогенизировали в буферном растворе с помощью миксера-мельница и водную фазу прививку на сливной Vero клеточных культурах (Clone E6). Клеточные культуры контролируются на цитопатический эффект от нескольких дней 3-7 после прививки и любые вирусы, выращенные в культуре клеток определяются соответствующие диагностические анализы. Используя такой подход, мы выделили 9 различных вирусов от комаров, собранных в Коннектикут, США, и среди них, 5 как известно, вызывают болезни человека. Три из них вирусы (вирус Западного Нила, вирус Потоси и Ла-Кроссе вируса) представляют собой новый рекорд для Северной Америки или регионе Новая Англия с 1999 года. Способность обнаруживать большое разнообразие вирусов имеет решающее значение для мониторинга, которые создали и вновь появляющихся вирусов в организме комара населения.
Protocol
Discussion
Vero клеточной культуре анализа служит эффективным методом для скрининга поле, собранные комаров для разнообразия вирусов. Это контрастирует с молекулярными методами, которые специально направлены один или несколько вирусов, представляющих интерес. Более того, мы обнаружили, что Веро ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы выражаем искреннюю благодарность важный вклад д-ра. Джон Андерсон, Эндрю Главная и Ширли Tirrell к настоящему исследованию. Эта работа была частично поддержана грантами от Центров по контролю и профилактике заболеваний (U50/CCU116806-01-1) и Министерство сельского хозяйства США (58-6615-1-218, CONH00768 и CONH00773).
Materials
| Name of reagent/ equipment | Company | Catalog Number |
|---|---|---|
| Fetal bovine serum | Gibco – Invitrogen | 16140 |
| Anti-biotic/mycotic | Gibco – Invitrogen | 15240 |
| Sodium bicarbonate NaHCO3, 7.5% Soln. | Gibco – Invitrogen | 25080 |
| L-Glutamine 200mM 100x | Gibco-Invitrogen | 25030 |
| Powdered minimal essential medium (MEM) | Gibco – Invitrogen | 11700 |
| 10X Dulbecco’s PBS | Gibco – Invitrogen | 14080 |
| Trypsin-EDTA | Gibco – Invitrogen | 15400 |
| Rabbit serum | Gibco – Invitrogen | 16120 |
| Vero Cells (Clone E6) | ATCC | CRL-1586 |
| Small tissue culture flasks, vented caps, 25 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353112 |
| Large tissue culture flasks, vented caps, 175 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353108 |
| Copper-coated BB’s, 4.5 mm | Crosman | 0767 |
| Mixer Mill | Retsch | MM300 |
| Isopack freezer racks | Eppendorf | 022510240 |
References
- Chosewood, L. C., Wilson, D. E. . Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. , (2007).
- Anderson, J. F. Isolation of West Nile virus from mosquitoes, crows, and a Cooper’s hawk in Connecticut. Science. 286, 2331-2333 (1999).
- Armstrong, P. M., Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Main, A. J. Isolations of Potosi virus from mosquitoes (Diptera: Culicidae) collected in Connecticut. J Med Entomol. 42, 875-881 (2005).
- Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. A new genetic variant of La Crosse virus (Bunyaviridae) isolated from New England. Am J Trop Med Hyg. 75, 491-496 (2006).
- Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Vossbrinck, C. R., Main, A. J. Epidemiology of West Nile virus in Connecticut, USA: a five year analysis of mosquito data 1999-2003. Vector Borne Zoonotic Dis. 4, 360-378 (2004).
- Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Tirrell-Peck, S. J. Multiple isolations of eastern equine encephalitis and highlands J viruses from mosquitoes (Diptera: Culicidae) during a 1996 epizootic in southeastern Connecticut. J Med Entomol. 35, 296-302 (1998).
- Armstrong, P. M., Andreadis, T. G. Eastern equine encephalitis virus in mosquitoes and their role as bridge vectors. Emerg Infect Dis. 16, 1869-1874 (2010).
- Andreadis, T. G., Anderson, J. F., Armstrong, P. M., Main, A. J. Isolations of Jamestown Canyon virus (Bunyaviridae: Orthobunyavirus) from field-collected mosquitoes (Diptera: Culicidae) in Connecticut, USA: a ten-year analysis, 1997-2006. Vector Borne Zoonotic Dis. 8, 175-188 (2008).
- Beaty, B. J., Calisher, C. H., Shope, R., Lennette, E. H., Lennette, D. A., Lennette, E. T. Chapter 11. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial, and Chlamydial Infections. , 189-212 (1995).
- Karabatsos, N. . International Catalogue of Arboviruses Including Certain Other Viruses of Vertebrates. , (1985).
- Lanciotti, R. S. Rapid detection of west nile virus from human clinical specimens, field-collected mosquitoes, and avian samples by a TaqMan reverse transcriptase-PCR assay. J Clin Microbiol. 38, 4066-4071 (2000).
- Lambert, A. J., Martin, D. A., Lanciotti, R. S. Detection of North American eastern and western equine encephalitis viruses by nucleic acid amplification assays. J Clin Microbiol. 41, 379-385 (2003).
