संक्रामक वायरस के फील्ड एकत्र मच्छरों से वेरो सेल संस्कृति परख द्वारा जांच
Summary
हम प्रक्रिया के लिए एक विधि का वर्णन है और स्क्रीन क्षेत्र एकत्र वायरस का एक विविधता के लिए वेरो सेल संस्कृति परख द्वारा मच्छरों. इस तकनीक काम करके, हम कनेक्टिकट में एकत्र मच्छरों में 4 वर्गीकरण परिवारों से 9 विभिन्न वायरस का पता लगाया है.
Abstract
मच्छरों पश्चिम नील नदी वायरस, डेंगू वायरस, और chickungunya वायरस जैसे महत्वपूर्ण मानव रोगज़नक़ों सहित अलग वायरस के एक संख्या संचारित. उनके स्थानिकमारी वाले श्रेणियों में इन वायरस से कई तेज है और नए क्षेत्रों के लिए विस्तारित, इन धमकियों का जवाब प्रभावी निगरानी और नियंत्रण कार्यक्रम की जरूरत महसूस. एक वायरस गतिविधि पर नजर रखने की रणनीति के स्थानिकमारी वाले साइटों से मच्छरों की बड़ी संख्या का संग्रह शामिल है और उन्हें वायरल संक्रमण के लिए परीक्षण. इस अनुच्छेद में, हम वर्णन कैसे संभाल करने के लिए, प्रक्रिया, और स्क्रीन वेरो सेल संस्कृति परख द्वारा संक्रामक वायरस के लिए मच्छरों क्षेत्र एकत्र. मच्छरों जाल स्थान और प्रजातियों के द्वारा हल कर रहे हैं, और ≤ 50 व्यक्तियों युक्त पूल में बांटा है. जमा नमूनों बफर मिल एक मिक्सर और जलीय चरण मिला हुआ वेरो सेल संस्कृतियों (E6 क्लोन) पर inoculated है का उपयोग खारा में homogenized हैं. सेल संस्कृतियों दिनों 3-7 के बाद टीका और किसी भी वायरस सेल संस्कृति में हो उपयुक्त निदान assays के द्वारा पहचाने जाते हैं cytopathic प्रभाव के लिए निगरानी कर रहे हैं. इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, हम कनेक्टिकट, संयुक्त राज्य अमेरिका में एकत्र मच्छरों से 9 विभिन्न वायरस अलग है, और इनमें से 5 के लिए मानव रोग का कारण जाना जाता है. इन वायरस के तीन (पश्चिम नील नदी वायरस, पोटोसी वायरस, और La Crosse वायरस) उत्तर अमेरिका या 1999 के बाद से नई इंग्लैंड क्षेत्र के लिए नए रिकॉर्ड का प्रतिनिधित्व करते हैं. वायरस की एक विस्तृत विविधता का पता लगाने की क्षमता की निगरानी दोनों स्थापित और मच्छर आबादी में नए उभरते वायरस के लिए महत्वपूर्ण है.
Protocol
Discussion
वेरो सेल संस्कृति परख वायरस का एक विविधता के लिए स्क्रीन क्षेत्र एकत्र मच्छरों के लिए एक प्रभावी तरीका के रूप में कार्य करता है. यह आणविक विधियों है कि विशेष रूप से एक लक्ष्य या ब्याज की कुछ वायरस को विर…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम कृतज्ञता डीआरएस के महत्वपूर्ण योगदान को स्वीकार करते हैं. जॉन एंडरसन, एंड्रयू मुख्य और शर्ली Tirrell इस अध्ययन करने के लिए. इस काम के हिस्से में रोग नियंत्रण और रोकथाम (U50/CCU116806-01-1) और अमेरिकी कृषि विभाग (58-6615-1-218, CONH00768, और CONH00773) के लिए केंद्र से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Name of reagent/ equipment | Company | Catalog Number |
|---|---|---|
| Fetal bovine serum | Gibco – Invitrogen | 16140 |
| Anti-biotic/mycotic | Gibco – Invitrogen | 15240 |
| Sodium bicarbonate NaHCO3, 7.5% Soln. | Gibco – Invitrogen | 25080 |
| L-Glutamine 200mM 100x | Gibco-Invitrogen | 25030 |
| Powdered minimal essential medium (MEM) | Gibco – Invitrogen | 11700 |
| 10X Dulbecco’s PBS | Gibco – Invitrogen | 14080 |
| Trypsin-EDTA | Gibco – Invitrogen | 15400 |
| Rabbit serum | Gibco – Invitrogen | 16120 |
| Vero Cells (Clone E6) | ATCC | CRL-1586 |
| Small tissue culture flasks, vented caps, 25 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353112 |
| Large tissue culture flasks, vented caps, 175 cm2 | Falcon – Becton Dickinson | 353108 |
| Copper-coated BB’s, 4.5 mm | Crosman | 0767 |
| Mixer Mill | Retsch | MM300 |
| Isopack freezer racks | Eppendorf | 022510240 |
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