Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Эффективное доставки генов в нескольких территориях ЦНС Использование In Utero Электропорация

doi: 10.3791/2957 Published: June 23, 2011

Summary

В электропорации внутриутробно позволяет для быстрой доставки гена в пространственно-временном и-контролируемым образом в развивающихся центральной нервной системы (ЦНС). Здесь мы опишем хорошо адаптируется внутриутробно электропорации протокола, которые могут быть использованы для доставки выражение конструкции на несколько эмбриональных областях ЦНС, в том числе конечного мозга, промежуточного мозга и сетчатки.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Настройка

  1. Настройка хирургических область, как показано на рис. 1А, '. Ключевые компоненты настройки включают Эппендорф Femtojet microinjector, Narishige микроманипулятора с иглодержателя, Leica steromicroscope, волоконно-оптические системы освещения, ECM 830 квадратных системы Электропорация волны с электродами, грелку и испаритель для изофлуран анестезии.
  2. Очистите все инструменты с Bransonic ультразвуковые Cleaner использованием Metriclean2 Низкое пенообразование решение для sonicating хирургических инструментов. Стерилизуйте инструменты в автоклаве. Стерилизованный инструмент, затем хранить в Germex.
  3. Подготовка шприцы с теплым стерильным физиологическим раствором и стерильные лактата раствор Рингера.

2. Анестезия

  1. Место животных внутри небольшой (12 см х 20 см) анестезии камеры. Использование испарителем, доставить 5% изофлуран анестезии и кислород при 1L/min (рис. 1А, '). Примечательно, что очень важно собирать изофлуран выхлопных использованием очистки системы.
  2. Удаление животного из камеры, когда дыхание становится глубоким и регулярным. Щипать Toe и глаз мигает рефлекс тесты используются для обеспечения полной анестезии.
  3. Место беременные мыши на спине в верхней части грелку (37 ° С). Грелку сначала стерилизовать вытирая с 70% этанола, а затем покрыты стерилизовать, lintless площадки марли. Используйте респиратор трубки и маски аппаратом для доставки изофлуран (2,25%) во время операции.
  4. Inject бупренорфин (0.1mg/kg массы тела) подкожно под кожу на затылке.
  5. Монитор животных всей операции для глубокого и регулярного дыхания. Животное не должно задыхаться, дышать неглубоко и быстро. Мелкие, учащенное дыхание может быть признаком легкой анестезией, и поток изофлуран должна быть увеличена. Если животное начинает задыхаться, уменьшить поток изофлуран. В случае остановки дыхания, включите изофлуран выключен, и увеличить поток кислорода, пока животное выздоравливает. Перезагрузите изофлуран по более низкой концентрации.

3. Животное Подготовка к операции

  1. Лента передние конечности животного на грелку и проверьте еще раз для опровержения ответа, зажимая задние ноги с тупыми щипцами.
  2. Использование стерильного хлопка наконечником тампоном, распространение толстый слой крема для удаления волос (например, Наир) на животе. В фирме инсультов, обеспечить подшерсток полностью покрыты. Оставить на среднем три минуты, проверяя периодически стерильным чистый тампон для удаления волос. Влажная стерильная марля площадку стерильной водой и протрите живот, пока все следы исчезли. Повторите с хлоргексидином (т.е. Stanhexidine) кожу более чистой и больше воды. Сухой живота с чистой, стерильной марли.
  3. Стерилизовать разреза с хлоргексидином (т.е. Stanhexidine), а затем более стерильной водой. Сухой живота с чистой, стерильной марли. Повторите этот шаг с использованием 70% этанола и свежее, стерилизованное ватным тампоном.
  4. Место стерильной марли площадку на животе с разрезом посередине, через которое рогов матки будет втянут во время операции.

4. Разрез и выдержки из рогов матки

  1. Чтобы разоблачить рогов матки, сначала найти белой линии, как слабый черту под кожу в средней линии. Использование щипцов, потяните кожу от брюшной стенки и вырезать небольшие, прямой разрез от середины живота вниз на кожу ножницами (около 1 см в длину).
  2. Использование изогнутые щипцы и ножницы, повторите процесс с брюшины.
  3. Место стерильную марлю с небольшой вертикальный разрез через разрез и смочить подогретой стерильного физиологического раствора.
  4. Слайд щипцов в разрез и найдите матки. Держите открытым разрез с щипцами при удалении матки рога.
  5. Осторожно возьмитесь матки между первым и вторым видимым эмбрионов и тянуть эмбрионов на марлю. Удалите обе стороны рога матки, размещение на стерильную марлю и посчитайте количество эмбрионов, отметив, любой резорбция или «нездоровый» (например, меньший размер тела) эмбрионов. Влажные рогов матки физиологическим раствором и осторожно вернуть половину матки в брюшную полость.

5. Введение ДНК в Желудочки

  1. Хирургические иглы готовы с Саттер Flaming микропипетки Puller использованием боросиликатного микропипетки с капиллярами (Программа: тепло = 750, Pull = 30, Vel = 90, Время = 150). Используя стерильный скальпель лезвием, иглы осторожно сбрил на 45 градусов.
  2. Чтобы загрузить иглы, пипетки Пастера тянутся к узким диаметром до пламени. Рот кусок прилагается к загрузке пипетки составить ~ 10 мкл 3мг/мл эндотоксина свободной ДНК смешивается с 0,01% метилового зеленого (примечание: метилового зеленого красителя позволяет инъекции ДНК для визуализации). Заполнена игла затем установлены на стенде микроманипулятора и прикреплен к Femtojet инжектора.
  3. Начиная с эмбрионом ближе всего к яичников, круглые щипцыиспользуются, чтобы осторожно поверните эмбриона в децидуальной так, что он расположен "лицом вперед", что позволяет инъекции происходит в ростральнее каудальном направлении. Волоконно-оптический источник света для освещения используется, чтобы помочь визуализировать средней линии эмбриональных мозг, который в окружении больших боковых желудочков в ростральной области (рис. 1B, B ').
  4. Эмбриона проводится в положении с помощью кругового щипцами. Игла находится над матки так, чтобы угол входа в мозг составляет около 45 градусов. Использование микроманипулятора, а также быстрое и устойчивое движение кончика иглы вводится через стенку матки и в боковой желудочек эмбриона. Инъекции направлены на боковых желудочков, третьего желудочка или субретинальной пространство для целевой конечного мозга, промежуточного мозга и сетчатки, соответственно. Обратите внимание, что эмбриональные пузырьки мозга открыты на ранних эмбриональных стадиях, что ДНК вводится в боковые желудочки будет поступать в 3-й желудочек.
  5. Пресс ножной педалью для введения эндотоксина свободной ДНК (1-3 мкл) с использованием Eppendorf Femtojet microinjector. Успешных инъекций легко визуализируется распространение метилового зеленого красителя всей эмбриональной желудочков мозга. Игла затем медленно удаляется рисунок резервные копии, чтобы избежать поломки.

6. Электропорация

  1. Вводят эмбриона (еще в матке) помещается на стерильную марлю вышележащих живот матери и мокрого тщательно с подогреваемой физиологического раствора. Пожалуйста, обратите внимание ** Помимо физиологического раствора к поверхности мембраны необходимо обеспечить эффективное прохождение электрического тока.
  2. GenePaddle электроды используются для захвата матки после инъекции ДНК. Пять квадратных электрические импульсы 40-50V и 50 мс поставляются в размере одного импульса в секунду, используя ECM8300 BTX электропорации системы (рис. 1С, С).
  3. Обложка вводили / электропорации эмбриона с защитным мокрой марли и переходите к следующему эмбриона.
  4. По окончании инъекции / электропорации все желаемые эмбрионов, аккуратно нажмите рогов матки обратно в брюшную полость (рис. 1D).
  5. Осторожно удалите другие рога матки и начать снова с эмбрионом ближе всего к яичника.

7. Шовный и сшивание

  1. После того как все эмбрионы обратно в матку, добавить в брюшную полость ~ 2-3 мл теплого физиологического раствора.
  2. Чтобы закрыть рану, начните с удаления марли на животе и определение стороны брюшины. Начните ушивание брюшины используя черный плетеный шнур шелка. Не рекомендуется использовать рассасывающиеся нити для этой процедуры, как это обычно слабее и может привести к послеоперационных кровотечений и инфекций. Якорь линии на брюшине ближе к грудине и приступить к стежка от якоря. Убедитесь, что все швы плотные, и что никакие основные органы и кожа была случайно вшиты в брюшину. Клип оставшиеся шов и выбросьте.
  3. Вытяните кожа покрыла шов щипцами. Использование 9 мм Reflex ™ кожи закрытия скобы, клип кожа над раной, заботясь, чтобы не основной продукт под шов, или тянуть кожу слишком сильно. Предпочтительным методом является проведение кожу вверх и в сторону от тела щипцами, и прийти в на 90 градусов с основной инструмент. Продолжайте, пока рана закрыта (примерно в три скобы). После завершения обеспечить скобы плотно, слегка нажав вместе с инструментом шов (рис. 1D).

8. Послеоперационный уход

  1. Для мониторинга наркозом восстановления, включите женщин на живот и выключите изофлуран. Хранение морду животного внутри дыхательный аппарат, включите кислорода до 3%, чтобы помочь восстановлению от наркоза. Животного должен быть сделан на чистую сухую площадку марлю сверху грелку, чтобы предотвратить переохлаждение.
  2. Хотя животное любящим выпить, вводят 2 мл раствора Рингера подкожно под кожу шеи животного.
  3. Продолжайте удерживать животное под поток кислорода в течение нескольких минут и колодки потепления марли для того, чтобы поднять животное. Короткие всплески движения от животных следует рассматривать как он возвращается в нормальную структуру дыхания. Соблюдайте несколько минут, пока животное кажется сознательное и бодрствования.
  4. Спрей животе самки с Гентамицин спрей и заверните животное в стерильной марли площадку.
  5. Передача животных в стерильных клетку с автоклавного постельные принадлежности и картона жилья.
  6. Бутылки с водой должны быть тщательно очищены, стерилизовать и заполнена стерильной водой. К 500 мл воды, добавить 2 мл sulfamethazine антибиотик (25% акций).
  7. Администрирование 0,05 мг / кг подкожно бупренорфин следующее утро после операции.
  8. Монитор женщин тесно в течение первых 24 часов после операции. Если животные находятся более 24 часов, женщины переехали в новые стерИль клеток на 2-й день.

9. Представитель Результаты

Неокортекс

Неокортекс области центральной нервной системы, которая отвечает за визуальное и сенсомоторной обработки и высших когнитивных функций. Она состоит из нейронов глутаматергической проекции и ГАМК-интернейронов, которые вытекают из спинной и брюшной конечного мозга, соответственно. Для решения роли различных генов в развитии коры головного мозга, которые мы используем в внутриутробно электропорации либо misexpress или блок выражении (то есть за счет использования конструкции shRNA) различных генов в спинной или вентральной конечного мозга 1,3,4. Для misexpress генов в эмбриональных конечного мозга, мы используем вектор bicistronic выражение (pCIG2), содержащих ЦМВ-βactin промоутер-усилитель и внутренний сайт рибосомы въезд (IRES)-расширенной зеленого флуоресцентного белка (EGFP, в pCIG2) кассету, что позволяет трансфицированных ячейки, которые будут обнаружены epifluorescence (рис. 2-C). Мы использовали эту технологию ввести выражение конструкции в конечном мозге от E11.5 к E15.5 (Приведенные данные являются на E12.5;. Рис. 2). Позволяя эмбрионов разработать несколько дней после электропорации, мы имеем возможность отслеживать дифференциации и миграции GFP-меченых предшественников. Как дифференциации доходов, 3-х дней после электропорации GFP + клеток дифференцироваться и мигрировать из желудочковой зоны (ВЗ), субвентрикулярной зону (СВЗ) и промежуточную зону (из) и в кортикальной пластинки (ф;. Рис 2С). Если мозги электропорации на E12.5 анализируются после 24 часов, мы можем контролировать более ранних событий в созревании предшественников и миграцию нейронов путем совместного маркировки с маркерами апикального прародителей (т.е. Pax6;. Рис 2А), базально-предшественников (т.е. Tbr2; . Рис 2B) и постмитотических неокортекса нейронов (то есть, Tbr1;. Рис 2С).

Промежуточный мозг

Гипоталамус лежит в вентральной базе центральной нервной системы и функции шлюза между эндокринной и вегетативной нервной системы. Во время разработки, несколько ядер, которые составляют зрелые гипоталамус отличить от общей зоны предшественников, что линии вентральной-область эмбриональных промежуточного мозга. В настоящее время молекулярные пути, которые регулируют пролиферацию клеток предшественников, нейронная дифференциация и формирование ядер гипоталамуса мало изучены. Мы использовали внутриутробно электропорации на целевое выражение гена-репортера в эмбриональном промежуточного мозга путем введения ДНК в 3-й желудочек E12 embryos.We затем следуют распределения GFP в дифференциации нейронов в E14. С помощью этой методологии, мы успешно целевых GFP выражение таламус, предварительно таламуса и гипоталамуса (рис. 3А). Анализ корональные разделы показывает, что мы успешно целевых GFP выражение клеток-предшественников, что линия желудочковой зоны 3-го желудочка и нейронов, которые мигрируют из мантии в зоне формирования ядер (рис. 3В)

Сетчатка

Сетчатка нейронных слой глаза, отвечает за преобразование фотонов света в электрические импульсы передаются в мозг. Он развивается, как outpocketing эмбрионального промежуточного мозга, и, следовательно, является производным от нервной трубки. Нейронных сетчатки развивается из апикальной отсек предшественника, который лежит рядом с субретинальной пространство, которое отделяет полость глаза от головы мезенхимы. Ориентация на ДНК-конструкции для сетчатки прародителей, следовательно, требует, что инъекции делаются в небольшой площади цели. Использование микроманипуляторами, нам удалось успешно цель этой небольшой площади у эмбрионов от E13.5 к E15.5 (показана E15.5 electroporations из PCIC с корреспондентом mCherry, рис 4.). Если электропорации сетчатки рассматриваются 24 часа после трансфекции, заметим, что наиболее mCherry + клеток расположены в наружном слое нейробластов (onbl), где деление предшественников расположены, а не в сетчатке слоя клеток ганглия (ГКЛ, вставка изображения), где постмитотических клетки локализовать.

Рисунок 1
Рисунок 1. Введение в внутриутробно электропорации настройки и методологии. () Ключевых компонентов хирургической настройки включают Эппендорф Femtojet microinjector (1), Narishige микроманипулятора с иглодержателя (2), Leica steromicroscope (3), волоконно-оптических осветительных приборов системы (4), ECM 830 квадратных системы Электропорация волны с электродами (5) и грелку (6). (') Животных под наркозом использованием испаритель для изофлуран анестезии. (В, В ') Короче говоря, после анестезии, рогов матки подвергаются и ДНК смешивается с прочным зеленым вводят в эмбриональные пузырьки мозга. Успешное введение визуализируется отслеживание быстро зеленого красителя (В '). (С, С ') После ДНК успешно вводят внутривенно, весла электроды расположены по обе стороны от матки, positioning эмбрион так, что ДНК будет притягиваться к положительному полюсу в области мозга выбора. (D, D ') После того как все желаемые эмбрионы вводят внутривенно, матки выталкивается обратно в брюшную полость (D), брюшины зашивается, а кожа сшиты (D'). Беременная самка затем позволили восстановить и электропорации щенков собраны в нужном моменты времени.

Рисунок 2
Рисунок 2. Представитель пример спинной telencephalic электропорации. (AC) Микрофотография корональных разрез E13.5 спинной конечного мозга электропорации на E12.5 с pCIG2. Электропорации GFP + клеток анализируются для их выражения маркеров апикальной прародителей (Pax6 +, красный,), базально-прародителей (Tbr2 +, красный, Б) и постмитотических нейронов (Tbr1 +, красный, С). ср, кортикальной пластинки; СВЗ, субвентрикулярной зоны, В. З.; желудочковой зоны.

Рисунок 3
Рисунок 3. Представитель пример диэнцефальных электропорации. () Вентрально E14 мозга, который был электропорации на E12 с pCIG2. GFP epifluorescence видна в таламус, предварительно таламуса и гипоталамуса, демонстрируя распространение microinjected pCIG2 плазмиды течение 3-го желудочка. (B) Микрофотография корональных разрез электропорации мозга, показывая миграции GFP + клеток из желудочков зоне и в зоне мантии, где ядрах гипоталамуса будет форме. 3В, третьего желудочка; Т, таламус, Hy, гипоталамус, тг, мантии зоны; тел, конечного мозга; Pret, prethalamus; В.З., желудочковой зоны.

Рисунок 4
Рисунок 4. Представитель пример сетчатки электропорации. Корональные разрез глаз E16.5 электропорации с PCIC на E15.5 показывающие накопление mCherry +-клеток в наружный слой нейробластов, а не в Brn3b + ганглиозных клеток сетчатки в слое ганглиозных клеток. Вставкой, большем увеличении образ коробку области. GCL, сетчатки слоя клеток ганглия; ле, линзы; onbl, внешний слой нейробластов; ре, сетчатки.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Внутриутробное электропорации могут быть использованы для анализа разнообразных процессов развития. Например, трансфекции репортер генов, таких как GFP, mCherry или щелочной фосфатазы может быть использован для проведения линии отслеживания и нейронных экспериментов миграции. Кроме того, Cre рекомбиназы может быть временно выразил избирательного устранения floxed аллелей в пространственно-и / или временно контролируемой манере. Кроме того, shRNA или доминирующего отрицательного конструкции могут быть электропорации в нокдаун функции гена-мишени. Наконец, целевая гиперэкспрессия или misexpression ключевых генов в обоих дикого типа и / или генетически мутантных линий мышей могут быть использованы для изучения решений ячейки судьбы. Высокая пропускная способность этого анализа очень важно, так как позволяет проводить тестирование множество комбинаций факторов в очень короткое время. Одно примечание предостережения, что эта процедура вызывает изменения в экспрессии генов в клетках, выстилающих игл запись (например, травма-ответ генов upregulated в рану, как это наблюдалось нами и другими 13). Таким образом, рекомендуется, чтобы сосредоточиться на электропорации клетки вне месте раны. Кроме того, эмбриональная выживаемость низки, когда впервые обучения этой технике, но быстро начало> 95% с практикой. На сегодняшний день мы успешно использовали в технологии внутриутробно электропорации для выявления генов, регулируемых proneural bHLH транскрипционных факторов в конечном мозге 4. Мы также проверку использования этого метода для анализа telencephalic цис-регуляторных элементов 3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Авторы хотели бы поблагодарить Ева Hadzimova, Пьер Маттар и Кристофер Ковач для их первоначальной работы по созданию внутриутробно электропорации технологии в CS лаборатории. Эта работа финансировалась Канадский институт исследований в области здравоохранения (CIHR) грант (44 094 СС) и CIHR / Фонд борьбы слепоты (FFB) новые команды Грант (00933-000) для CS и Альберта детской больницы Фонд исследований Грант ДМК. РД была поддержана Надежда стипендии CIHR Канаде, RC поддерживается Студенчество FFB и LML был поддержан грант CIHR Обучение генетики и развития ребенка.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fine scissors Surgical Tools Fine Science Tools 14078-10
Iris scissors, curved Surgical Tools Fine Science Tools 14061-10
Olsen-Hegar Ex-Delicate Needle Holder Surgical Tools Fine Science Tools 12002-12
Ring forceps, 9mm Surgical Tools Fine Science Tools 11103-09
Eye dressing Forcep Surgical Tools Fine Science Tools 11051-10
Dumont #7 DMX Forcep Surgical Tools Fine Science Tools 11271-30
Dumont #5 DMX Forcep Surgical Tools Fine Science Tools 11251-30
Tissue forcep-Adson Surgical Tools Fine Science Tools 11027-12
Reflex Clip Applier Surgical Tools World Precision Instruments, Inc. 500343
Perforated Spoon, 15 mm diameter Surgical Tools Fine Science Tools 10370-18
Autoclip Remover Surgical Tools Mikron 427637
Silk Black Braided Suture Surgical Tools Ethicon Inc. K871
Reflex Skin Closure Stainless Steel Wound Clips Surgical Tools World Precision Instruments, Inc. 500346
ECM 830 Square Wave Electroporation System Instruments VWR international 58018-004
Tweezers w/Variable Gap 2 Round 5mm Platinum Plate Electrode Instruments Protech International, Inc. CUY650P5
Tweezers w/Variable Gap 2 Round 7mm Platinum Plate Electrode Instruments Protech International, Inc. CUY650P7
Eppendorf Femtojet Microinjector Instruments VWR international CA62111-488
Foot Control for Eppendorf Femtojet Microinjector Instruments VWR international CAACCESS (misc.)
Bransonic Ultrasonic Cleaner Model 1510R-DTH Instruments VWR international CA33995-534CPN-952-118
Sutter P97 Micropipet Puller Instruments Sutter Instrument Co. P-97
Micropipettes -– Borosilicate with filament O.D.: 1mm, I.D.: 0.78 mm, 10 cm length Instruments Sutter Instrument Co. BF100-78-10
3-Axis Coarse Manipulator Instruments Carl Zeiss, Inc. M-152
Magnetic Holding Device for micromanipulator Instruments World Precision Instruments, Inc. M1
Steel Base Plate for micromanipulator Instruments World Precision Instruments, Inc. 5052
Micropipette Holder Instruments World Precision Instruments, Inc. MPH3
Micropipette Handle Instruments World Precision Instruments, Inc. 5444
Stereomicroscope Instruments Leica Microsystems MZ6
Vaporizer for isoflurane anesthetic Instruments Porter Instruments Company MODEL 100-F
Metriclean2 Low foaming solution for sonicating surgical tools Surgical Reagents Metrex Research Corporation 10-8100
Gentamicin 40mg/ml in 0.2 g methylene blue antibiotic spray after suturing Surgical Reagents Sigma-Aldrich G1264
Germex for sterilizing surgical tools Surgical Reagents Vétoquinol DIN# 00141569
BNP ophthalmic ointment Surgical Reagents Vétoquinol DIN# 00516414
Nair® Surgical Reagents Church & Dwight Co. commercially available
Stanhexidine 4% w/v skin cleaner Surgical Reagents Omega Laboratories Inc. 01938983
Buprenorphine (Temgesic) analgesic Surgical Reagents Merck & Co. 531-535
Sulpha "25" sulphamethazine oral antibiotic Surgical Reagents Professional Veterinary Laboratories DIN# 00308218
Lactated Ringer Solution Surgical Reagents Baxter Internationl Inc. DIN# 0061085
Saline -– 0.9% sodium chloride Surgical Reagents B. Braun Medical DIN# 01924303
Inhalation Anesthetic -– Isoflurane USP Surgical Reagents Pharmaceutical Partners of Canada DIN# 02237518
Fast Green FCF Surgical Reagents Sigma-Aldrich F7252

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev Biol. 240, 237-246 (2001).
  2. Takahashi, M., Sato, K., Nomura, T., Osumi, N. Manipulating gene expressions by electroporation in the developing brain of mammalian embryos. Differentiation. 70, 155-162 (2002).
  3. Langevin, L. M. Validating in utero electroporation for the rapid analysis of gene regulatory elements in the murine telencephalon. Dev Dyn 236. 1273-1286 (2007).
  4. Mattar, P. Basic helix-loop-helix transcription factors cooperate to specify a cortical projection neuron identity. Mol Cell Biol. 28, 1456-1469 (2008).
  5. Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation. Mech Dev. 121, 1137-1143 (2004).
  6. Gaiano, N., Kohtz, J. D., Turnbull, D. H., Fishell, G. A method for rapid gain-of-function studies in the mouse embryonic nervous system. Nat Neurosci. 2, 812-819 (1999).
  7. Matsuda, T., Cepko, C. L. Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).
  8. Petros, T. J., Rebsam, A., Mason, C. A. In utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells. J Vis Exp. (2009).
  9. Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation. BMC Dev Biol. 7, 103-103 (2007).
  10. Kataoka, A., Shimogori, T. Fgf8 controls regional identity in the developing thalamus. Development. 135, 2873-2881 (2008).
  11. Vue, T. Y. Sonic hedgehog signaling controls thalamic progenitor identity and nuclei specification in mice. J Neurosci. 29, 4484-4497 (2009).
  12. Tsuchiya, R., Takahashi, K., Liu, F. C., Takahashi, H. Aberrant axonal projections from mammillary bodies in Pax6 mutant mice: possible roles of Netrin-1 and Slit 2 in mammillary projections. J Neurosci Res. 87, 1620-1633 (2009).
  13. Buffo, A. Expression pattern of the transcription factor Olig2 in response to brain injuries: implications for neuronal repair. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 18183-18188 (2005).
Эффективное доставки генов в нескольких территориях ЦНС Использование<em> In Utero</em> Электропорация
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dixit, R., Lu, F., Cantrup, R., Gruenig, N., Langevin, L. M., Kurrasch, D. M., Schuurmans, C. Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (52), e2957, doi:10.3791/2957 (2011).More

Dixit, R., Lu, F., Cantrup, R., Gruenig, N., Langevin, L. M., Kurrasch, D. M., Schuurmans, C. Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (52), e2957, doi:10.3791/2957 (2011).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter