פרוטוקול שלנו מדגים כיצד למזוג ג 'ל חלבון מרובים בכל פעם על ידי מיחזור Invitrogen Nupage קלטות Novex minigel וחומרים זולים שנרכשו בחנות שיפוץ הבית. שיטה זו חסכונית יעילה כולל דרך לאחסן את הג'לים על 4 מעלות צלזיוס במשך כמה שבועות. על ידי מחדש באמצעות קלטות ג'ל פלסטיק של ג'ל זמינים מסחרית, מעבדות הפועלות ג'ל חלבון תכופים יכול לחסוך בעלויות משמעותיות לעזור לסביבה.
Abstract
הערכה של חלבונים באמצעות סולפט dodecyl נתרן polyacrylamide ג'ל אלקטרופורזה (SDS-PAGE) ניתוח היא טכניקה נפוצה בשימוש על ידי חוקרים לביוכימיה וביולוגיה מולקולרית 1-4. עבור מעבדות המבצעות בדיקות יומיות של חלבונים, העלות של ג'ל polyacrylamide זמינים מסחרית (~ $ 10/gel) יכול להיות משמעותי לאורך זמן. כדי להקטין את העלות, כמה חוקרים להכין ג'ל שלהם polyacrylamide. השיטות המסורתיות של לשפוך את הג'לים בדרך כלל לנצל ציוד מיוחד ו ג 'ל זכוכית צלחות כי יכול להיות יקר למנוע לשפוך ג'ל רבים ואחסונם לשימוש עתידי. יתר על כן, טיפול של לוחות הזכוכית במהלך ניקוי או ג'ל לשפוך יכול לגרום שבירה בשוגג יצירת מפגע בטיחותי, אשר עשוי למנוע את השימוש בהם בשיעורי מעבדה לתואר ראשון. פרוטוקול שלנו מדגים כיצד לשפוך ג'ל חלבונים רבים בו זמנית על ידי מיחזור Invitrogen Nupage קלטות Novex minigel, ותואר שני זולterials לרכוש בחנות שיפוץ הבית. שיטה זו חסכונית יעילה כולל דרך לאחסן את הג'לים על 4 מעלות צלזיוס במשך כמה שבועות. על ידי מחדש באמצעות קלטות ג'ל פלסטיק של ג'ל זמינים מסחרית, מעבדות הפועלות ג'ל חלבון תכופים יכול לחסוך בעלויות משמעותיות לעזור לסביבה. בנוסף, קלטות ג'ל פלסטיק עמידים מאוד שבירה, מה שהופך אותם אידיאליים עבור כיתות מעבדה לתואר ראשון.
Protocol
1. הכנת קלטות מול נקי ובחזרה צלחות קלטת שימוש Invitrogen Nupage minigel Novex או minigel אחר קלטת מסחרי. להכין 1-3 מ"ל של כ אפוקסי פלסטיק ומערבבים היטב על פי הוראות היצרן. החל אפוקסי…
Discussion
ג'ל אלקטרופורזה חלבון היא שיטה הכרחית עבור מעבדות ביולוגיה מולקולרית ביותר. Minigels זמינים מסחרית לספק רמה גבוהה של נוחות, אבל יכול להיות יקר. כאן אנו מראים כיצד לעשות שימוש חוזר בקלטות minigel של המותג הפופולרי של minigels זמינים מסחרית. שיטה זו שומרת על הנוחות של בעל מקור המ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים הווארד יוז רפואי במכון למדע UF לפרס החיים על AH
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).