Organotypic 슬라이스 문화의 Purkinje 세포 수지상의 형태학의 분석
Summary
우리는 organotypic 소뇌 슬라이스 문화에서 자란 개별 Purkinje 세포의 수지상 나무의 형태를 확인하고 양적 엉덩이에 할 수 있습니다 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜은 Purkinje 세포 수지상 개발의 메커니즘에 대한 연구를 촉진하기위한 것입니다.
Abstract
사람들이 시상면에서 엄격하게 지향하고 작은 설치류 3 출생 후의 시대에 주로 개발하고 인상적인 수지상 트리를 가지고 있기 때문에 Purkinje 세포는 수지상 개발을 공부하기위한 매력적인 모델 시스템입니다. 또한, 여러 가지 항체 안티 Calbindin의 D28K있는 모든 프로세스를 포함 선택적으로하고 집중적으로 라벨 Purkinje 세포가 가장 널리 사용되는 어떤 사용할 수 있습니다. 살아있는 세포에서 수석의보고를 들어, Purkinje 세포 11 선택적으로 EGFP을 표현 마우스 잭슨 실험실을 통해 사용할 수 있습니다. Purkinje 세포 수지상 나무의 수지상 확장의 대부분은 실제로 문화 기간 4 동안 진행되기 때문에 Organotypic 소뇌 슬라이스 문화 전지는 Purkinje 세포 수지상 개발을 쉽게 실험 조작 할 수 있습니다. 여기 organotypi에서 재배 Purkinje 세포의 수지상 형태를보고하고 분석을위한 짧은 신뢰할 수있는 쉬운 프로토콜을 제시C 소뇌 슬라이스 문화. 다양한 용도를 들어, Purkinje 세포 수지상 나무의 양적 평가는 바람직하다. 우리는 신속하고 쉽게 방지 calbindin 스테인드 소뇌 슬라이스 문화로부터 결정될 수있다 두 개의 매개 변수, 수지상 나무의 크기와 분기점 번호에 여기에 집중. 이 두 매개 변수는 Purkinje 세포 수지상 나무의 변경 안정적이고 민감한 측정을 얻을 수 있습니다. 단백질 키나제 C (PKC) 활성 PMA 우리는 수지상 개발의 차이를 시각적으로 그리고 양적 평가 방법을 보여줍니다 metabotropic glutamate 수용체 1 (mGluR1)와 트리트먼트 예를 사용합니다. 다양한 수지상 나무, 선택과 강렬한 immunostaining 방법, 수지상의 메커니즘을 공개에 대한 Purkinje 세포 강력한 모델 시스템을 Purkinje 세포 특정 EGFP 발현과 수지상 성장과 마우스 모델의 기간을 커버 organotypic 슬라이스 문화의 존재의 결합 개발.
Protocol
Discussion
방법은 organotypic 소뇌 슬라이스 문화에 Purkinje 세포 수지상 개발을 연구하고 양적 수지상 나무의 크기와 수지상 지점 지점의 수를 측정하여 Purkinje 세포 수지상 확장을 평가할 수 있습니다 여기에 소개했다. 물론, Purkinje 세포 수석의 더 광범위하고 정교한 정량 분석은 총 수지상의 길이를 결정하는 Sholl 분석을 수행하거나 수지상 나무의 프랙탈 차원을 결정하여 예를 들어, 수 있습니다. ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작업은 바젤 (Basel) 대학 생물 의약 부, 스위스 국립 과학 재단 (National Science Foundation) (31003A-116624)에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Tissue culture Inserts | Millipore | PICM 03050 PICM ORG50 | The PICMORG50 inserts have a low rim and allow viewing of live cultures at a microscope |
| MEM | Gibco, Invitrogen | 11012044 | |
| Glutamax 1 | Gibco, Invitrogen | 35050038 | |
| Basal Medum Eagle | Gibco, Invitrogen | 41010026 | |
| Horse serum | Gibco, Invitrogen | 26050070 | |
| Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Tocris | 1201 | |
| (RS)-3,5-Dihydroxy-phenylglycine (DHPG) | Tocris | 0342 | |
| Rabbit anti-calbindin D-28K | Swant | CB38 | |
| Anti NeuN, clone A60 | Chemicon, Millipore | MAB377 | |
| Rabbit anti-GFP | Abcam | Ab290 |
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