ハイスループット抗真菌薬スクリーニングのためのカンジダバイオチップ（ カルシウム BChip）
Summary
我々は3次元ナノバイオフィルムから成る高密度マイクロアレイプラットフォームを開発しました<em> C.カンジダ</em>と呼ばれる<em> Caの</em> BChip。上でテスト薬剤の感受性プロフィール<em> Caの</em> BChipは、真菌チップは理想的な抗真菌薬の真のハイスループットスクリーニングに適していることを示唆し、従来の96ウェルプレートモデルに匹敵するものです。
Abstract
カンジダ·アルビカンスは現在、米国の病院1の第四の最も一般的な院内血流感染を表すカンジダ症の主な病因物質が残ります。これらの日和見感染症は、標的の個人の増加のために成長して脅威を与えると、容認できないほど高い死亡率を運ぶ。これは、抗真菌薬の限られた武器にだけでなく、最も一般的に使用される抗真菌剤に対する耐性の出現に起因する部分である。さらに治療を複雑にしてカンジダ症の症状の大部分がバイオフィルムの形成に関連付けられているという事実であり、これらのバイオフィルム内の細胞は、最も臨床的に使用される抗真菌剤2に対する抵抗性のレベルの増加を示しています。ここでは Cで構成され、高密度マイクロアレイの開発を記述する我々 は 、Ca BChip 3名前を付けて アルビカンスナノバイオフィルム、。簡単に言うと、ロボットのマイクロアレイは、t使用されますCのOプリント酵母細胞固体基板上にカンジダ 。印刷中に、酵母細胞は、50 nLのように低く、適切なコーティングを施したガラス基板上に固定化されたボリュームを用いた3次元マトリックスで囲まれています。最初の印刷後、スライドはバイオフィルムの開発を可能にするために24時間37℃でインキュベートする。この期間中にスポットが成熟したC.に関連付けられている典型的な構造と表現型の特性を表示し、完全に開発した"ナノバイオフィルム"に成長albicansのバイオフィルム（ すなわち形態の複雑さ、三次元アーキテクチャと薬剤耐性）4。全体としては、Ca BChipは〜750と同等と空間的に別個のバイオフィルムから構成され、複数のチップを印刷して同時に処理することができる付加的な利点である。細胞の生存率は、fun1の代謝の蛍光強度マイクロアレイスキャナーを用いて染色を測定することによって推定されています。この菌のチップは、理想的にはuのに適しています抗真菌薬創薬のための真のハイスループットスクリーニングにおけるSE。現在の規格（ すなわち、バイオフィルム形成5の96ウェルマイクロタイタープレートモデル）に比べ、菌のバイオチップの主な利点は、自動化、小型化、量と試薬と分析時間のコストの節約だけでなく、労働の撤廃です。集中的な手順を実行します。我々はこのようなチップが大幅に抗真菌薬の創薬プロセスをスピードアップすると確信しています。
Protocol
Discussion
我々は、 カンジダ·アルビカンスバイオフィルムのナノリットルボリュームで構成されるセルベースの高密度マイクロアレイは、Ca BChipを開発しました。マイクロアレイは、非拡散、半球状3Dゲルのために必要な疎水性を提供しながら、コラーゲンゲルスポットの堅牢な添付ファイルで許可される変更されたガラス基板上に印刷された。 単一のCA BChipは約8、96ウェルプレー…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、サウス·テキサス·技術経営（POCrr 2009.041）、研究資源のナショナルセンター（UL 1RR025767）から医学と科学の統合のための研究所からの補助金によって、歯科·頭蓋顔面研究所国立研究所（から一部で賄われていた5R21DE017294）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) | Sigma-Aldrich | 440140 |
| Polystyrene-Co-Maleic Anhydride (PS-MA) | Sigma-Aldrich | 426946 |
| Glass microscopy slides | Fisher Scientific | 12-549-3 |
| Rat Tail collagen type I | BD Biosciences | 354236 |
| Robotic Microarrayer | Omnigrid Micro | MICROSYS4000/4100A |
| Microarray Scanner | Genepix Personal 4100A | GENEPIX4100A |
| Hybridization Cassette | ArrayIt Corporation | AHCXD |
| FUN1 [2-chloro-4-(2,3-dihydro-3-methyl-(benzo-1,3-thiazol-2-yl)-methylidene)-1-phenylquinoliniumiodide] | Invitrogen Corp. | F-7030 |
| Fluconazole | Sicor Pharmaceuticals, Inc. | J02AC01 |
| Amphotericin B | Sigma | A2411 |
| RPMI-1640 | Mediatech, Inc. | 50-020-PC |
| Ceramic Tip 190 μm orifice | Digilab | 60020441-00 |
| GraphPad Prism Software | GraphPad Software, Inc. | |
| Genepix Pro V4.1 | Molecular Devices |
References
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