被描述的CD4枚举法,α测试,它采用全唾液,以提供快速,准确的CD4细胞计数。 α-测试成本便士和消除技术培训,如昂贵的试剂,单克隆抗体,仪器仪表,制冷,样品运输,以及收集和处理血液的需要。
有负担得起的CD4枚举监测HIV疾病的迫切需要。的CD4枚举是在资源有限的地区,由于时间和温度的限制,技术复杂,试剂成本,尤其是单克隆抗体的血细胞,目前唯一可以接受的方法来衡量的CD4遥不可及。节约成本和节省时间的一种常用实验室的策略,而不是衡量某些血液值,是计算。例如,低密度脂蛋白水平计算,总胆固醇,高密度脂蛋白(HDL),甘油三酯1使用的测量水平。因此,确定无细胞的相关因素,直接调节的CD4 + T细胞可以提供一个准确的方法,计算CD4计数由于生理意义的相关因素。
进入血液,并注定要成为循环CD4 + T细胞的干细胞数量确定的趋化因子CXCL12的1ND及其受体CXCR4,由于他们对运动2的影响。此外,进入血液干细胞的运动过程调节细胞表面人类白细胞弹性蛋白酶(HLE CS)和HLE CS-反应活性α1蛋白酶抑制剂(α1有价证券,α1抗胰蛋白酶,SerpinA1)3。在HIV-1病毒病,α1 PI灭活由于疾病的进程4。 α1 PI在HIV-1疾病的早期症状类别,积极发现低于100%未经治疗的HIV-1患者(中位数= 12μM,以及达到正常水平,在对症4大类,5正常。格局已被归因于免疫灭活,不足够的合成,蛋白失活,或充氧。我们观察到,在HIV-1> 220的CD4细胞/μl的科目,CD4细胞计数了积极的α1 PI水平呈正相关(R 2 = 0.93,P&LT; 0.0001,N = 26)和无效的α1的PI(R 2 = 0.91,P <0.0001,N = 26)5。 α1的PI HIV-1感染和未感染者的管理,导致在α1 PI参与调节的CD4 + T细胞,血液中的3中的CD4计数显着增加。
与刺激,全唾液中含有足够的浆液性渗出物(血浆含有蛋白质的物质通过血管壁进入唾液传递)允许测量活性α1 PI与此测量的相关性的证据表明,它是一种精确的方法计算CD4细胞计数。简言之,如嚼口香糖或柠檬酸sialogogues刺激到整个口腔唾液,血清渗出。刺激血清渗出后,血清α1 PI唾液中的活性是衡量其能力,抑制弹性蛋白酶的活性。猪胰弹性蛋白酶(PPE)的弹性蛋白酶是一个现成的廉价来源。个人防护装备的α1有价证券结合形成一个到一个复杂的,防止切割其特定的底物,其中之一是的比色法肽,琥珀- L-丙氨酸-L-丙氨酸- L-丙氨酸-P-硝基苯胺(SA的个人防护装备3不适用)。孵化器为在室温下10分钟的个人防护装备的饱和浓度的唾液,允许个人防护装备的所有活动α1 PI唾液中的约束力。可以衡量的PPE抑制活性α1有价证券加入的PPE基板SA的3不适用。(图1)。虽然CD4细胞计数测量血容量(CD4细胞/μL),α1 PI唾液中的浓度与唾液中的血清浓度,唾液量,因为体积可以改变白天和人大大6人。然而,几乎所有的唾液中的蛋白质是由于血清含量,唾液中的蛋白质含量是测量surable 7。因此,活性α1 PI唾液中的唾液蛋白质含量的比率计算,被称为α1 PI指数。结果提出此表明,α1 PI指数提供了一个准确和精确的计算CD4细胞计数的生理方法。
未稀释的血清中含有的中位数为36μM的α1 PI和3.6微米α2巨球蛋白(α2米 ),10倍的差异8。这两种蛋白质的竞争结合个人防护装备。利用这两个特点,浓度和个人防护装备的亲和力,已发展出一种方法,是专门测量在正常血清中存在竞争α2米 8的α1有价证券。这种方法可以在0.3%血清检测低至50纳米μ1有价证券。在血清稀释度为2.5…
The authors have nothing to disclose.
研究是由哈利·温斯顿研究基金会的支持。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Sialogogue, 0.05M citric acid | Eda’s Sugarfree Candies, 4900 Rear N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 | Sugar-Free Lemon dropS |
Porcine pancreatic elastase, type 1 (EC 3.4.21.36) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103 | E1250 |
Succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide | Sigma-Aldrich | S4760 |
Coomassie Brilliant Blue R-250 | Sigma-Aldrich | B7920 |
Tissue culture-treated, 96 well microplates | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 | 35-3072 |
Microplate Reader with filters for 405 nm and 595 nm | MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Vienna, Virginia 22182 | Dynex P97277 |