En CD4 oppregning metoden, α-test, er beskrevet som bruker hele spytt for å gi raske og nøyaktige CD4-tall. De α-test koster pennies og eliminerer behovet for teknisk opplæring, kostbare reagenser som monoklonale antistoffer, instrumentering, kjøling, transport av prøver, samt innsamling og håndtering av blod.
Det er et presserende behov for rimelig CD4 telling å overvåke HIV sykdom. CD4 Oppregningen er utilgjengelig i ressurs-begrensede områder på grunn av tid og temperatur restriksjoner, teknisk raffinement, og kostnader av reagenser, særlig monoklonale antistoffer til måle CD4 på blodceller, det eneste øyeblikket akseptabel metode. En vanlig brukt kostnadsbesparende og tidsbesparende laboratorium strategi er å beregne, fremfor å måle visse blodverdier. For eksempel er LDL-nivå beregnet ved hjelp av målte nivåene av total kolesterol, HDL og triglyserider en. Dermed teller identifisering av celle-frie korrelater som direkte regulerer antallet CD4 + T celler kan gi en nøyaktig metode for beregning CD4 grunn av fysiologiske relevans korrelater.
Antall stamceller som angir blod og er skjebnebestemt til å bli sirkulerende CD4 + T celler bestemmes av chemokine CXCL12 ennd sin reseptor CXCR4 grunn av sin innflytelse på locomotion to. Prosessen med stamcelle bevegelse inn i blodet er i tillegg regulert av celleoverflaten human leukocytt elastase (hle CS) og hle CS-reaktivt aktive α 1 proteinase inhibitor (α 1 PI, en α antitrypsin, SerpinA1) 3. I HIV-1 sykdom, er α en PI inaktivert på grunn av sykdom prosesser 4. I de tidlige asymptomatiske kategorier av HIV-1 sykdom, ble aktiv α 1 PI funnet å være under normal i 100% av ubehandlede HIV-1 pasienter (median = 12 mM, til og oppnå normale nivåer i løpet av de symptomatiske kategoriene 4, 5. Dette mønsteret har blitt tilskrevet immune inaktivering, ikke for lite syntese, proteolytisk inaktivering, eller oksygenering. Vi observerte at i HIV-1 fag med> 220 CD4-celler / mL ble CD4-tall korrelert med serumnivået av aktive α en PI (r 2 = 0,93, p < 0,0001, n = 26) og inaktive α en PI (r 2 = 0,91, p <0,0001, n = 26) 5. Administrasjon av α 1 PI til HIV-1 infiserte og ikke-infiserte pasienter resulterte i dramatiske økninger i CD4-tall tyder på α 1 PI deltar i regulering av antallet CD4 + T celler i blodet tre.
Med stimulering, inneholder hele spytt nok serøs sekresjon (plasma inneholder proteinavleiring materiale som passerer gjennom blodårene vegger i spytt) for å tillate måling av aktive α 1 PI og korrelasjonen av denne målingen er bevis på at det er en nøyaktig metode for beregning CD4-tall. Kort, sialogogues som tyggegummi eller sitronsyre stimulere exudation av serum i hele munnen spytt. Etter å stimulere serum exudation, er aktiviteten av serum α 1 PI i spytt målt ved sin evne til å hemme elastase aktivitet. Svin bukspyttkjertelen elastase (PPE)er en lett tilgjengelig billig kilde til elastase. PPE binder seg til α 1 PI danner en en-til-en kompleks som hindrer PVU fra spalte sine spesifikke substrater, hvorav den ene er den kolorimetrisk peptid, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA 3 NA). Ruger spytt med en mette konsentrasjon av PVU i 10 min ved romtemperatur tillater binding av PVU til alle aktive α 1 PI i spytt. Den resulterende hemming av PVU ved aktiv α 1 PI kan måles ved å legge PVU underlaget SA 3 NA. (Figur 1). Selv CD4-tall er målt i blod volum (CD4 celler / mL), er konsentrasjonen av α 1 PI i spytt knyttet til konsentrasjonen av serum i spytt, ikke til volum av spytt siden volum kan variere betydelig i løpet av dagen og person til person seks. Imidlertid er nesten alt proteinet i spytt på grunn av serum innhold, og proteininnholdet i spytt er measurable 7. Dermed er aktive α 1 PI i spytt beregnes som forholdet til spytt proteininnhold og den såkalte α 1 PI Index. Resultater som presenteres her viser at α 1 PI Index gir en nøyaktig og presis fysiologisk metode for beregning av CD4-tall.
Ufortynnet serum inneholder median 36 mM α 1 PI og 3,6 mM α 2 makroglobulin (α 2 M) en 10-fold forskjell 8. Begge proteiner konkurrere om binding til PPE. Disse to egenskapene, konsentrasjon og PPE tilhørighet, har blitt utnyttet for å utvikle en metode som er i stand til spesifikt måle α 1 PI i normal serum i nærvær av konkurrerende α 2 M 8. Denne metoden kan påvise så lite som 50 nm μ 1 PI i 0,3% serum. På en serumfor…
The authors have nothing to disclose.
Forskningen ble støttet av Harry Winston Research Foundation.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Sialogogue, 0.05M citric acid | Eda’s Sugarfree Candies, 4900 Rear N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 | Sugar-Free Lemon dropS |
Porcine pancreatic elastase, type 1 (EC 3.4.21.36) | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103 | E1250 |
Succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide | Sigma-Aldrich | S4760 |
Coomassie Brilliant Blue R-250 | Sigma-Aldrich | B7920 |
Tissue culture-treated, 96 well microplates | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 | 35-3072 |
Microplate Reader with filters for 405 nm and 595 nm | MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Vienna, Virginia 22182 | Dynex P97277 |