Summary
हम सटीक, नग्न चूहों और बाद धारावाहिक के दिमाग में मानव glioblastoma मल्टीफार्मी कोशिकाओं के stereotactic आरोपण के लिए एक एकीकृत विधि का वर्णन
Abstract
Glioblastoma मल्टीफार्मी (जीबीएम) मानक त्रिकोणीय साधन शल्य लकीर, पोस्ट ऑपरेटिव विकिरण चिकित्सा और temozolomide 1 कीमोथेरेपी से मिलकर उपचार के बावजूद मानव में केवल 14.6 महीने की औसत अस्तित्व के साथ एक उच्च ग्रेड प्राथमिक मस्तिष्क कैंसर है. नई चिकित्सकीय दृष्टिकोण स्पष्ट रूप से करने के लिए रोगी अस्तित्व और जीवन की गुणवत्ता में सुधार की जरूरत है. जीबीएम कि मानव रोग पुनरावृत्ति करना अभी तक ट्यूमर के विकास और उपचार की प्रतिक्रिया पर नजर रखने के लिए धारावाहिक इमेजिंग की अनुमति देने के लिए और अधिक प्रभावी उपचार रणनीतियों के विकास के पशु मॉडल द्वारा सहायता प्राप्त किया जाएगा. इस पत्र में, हम नंगा ट्यूमर xenografts है कि जीबीएम की 2 प्रमुख नैदानिक सुविधाओं पुनरावृत्ति करना में जिसके परिणामस्वरूप चूहों के दिमाग में जैव चित्रणीय जीबीएम कैंसर कोशिकाओं के सटीक stereotactic आरोपण के लिए हमारी तकनीक का वर्णन. इस विधि पैदावार ट्यूमर है कि प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं और सटीक शारीरिक स्थानों में स्थित जबकि vivo bioluminescent इमेजिंग में अनुमति देने के लिए serially अंतर पर नजर रखने केकपाल xenograft विकास और 3-5 उपचार के लिए प्रतिक्रिया. इस विधि कम perioperative रुग्णता और मृत्यु दर के साथ जानवरों से भी अच्छी तरह से सहन.
Protocol
ए पूर्व ऑपरेटिव ट्यूमर सेल तैयारी
- Transduce एक lentiviral अभिव्यक्ति वेक्टर (pGreenFire, सिस्टम बायोसाइंसेज) के साथ U251 glioblastoma मल्टीफार्मी कोशिकाओं stably जुगनू luciferase जीन को व्यक्त करने के लिए.
- इन कोशिकाओं ईगल (DMEM) मध्यम, जो DMEM के होते पूरा है Dulbecco संशोधन के 10 मिलीलीटर में बड़े हो रहे थे 10% भ्रूण बछड़ा सीरम, 1% पेनिसिलिन - स्ट्रेप्टोमाइसिन, और 1% एक T75 ऊतक संस्कृति में incubating फ्लास्क में nonessential अमीनो एसिड के साथ पूरक 5% C0 2 और 37 डिग्री सेल्सियस
- मानक सेल संस्कृति प्रदर्शन, फॉस्फेट साथ कोशिकाओं को धोने के साथ शुरुआत खारा (पीबीएस) buffered द्वारा पीछा trypsinizing है.
- पूरा DMEM साथ trypsin बुझाने, एक 50 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क समाधान हस्तांतरण और सेलुलर कल्टर काउंटर का उपयोग एकाग्रता का निर्धारण.
- प्रति मिनट 3000 क्रांतियों पर लगभग 3 मिनट के लिए पूरा DMEM में काटा कोशिकाओं अपकेंद्रित्र.
- Centrifugation के बाद, aspirateच कोशिकाओं की 50 मिलीलीटर शंक्वाकार फ्लास्क के नीचे में केवल एक गोली छोड़ने मीडिया.
- काम जल्दी बाहर सुखाने से कोशिकाओं को रोकने के लिए, ताजा पूरा DMEM की मात्रा में कोशिकाओं को फिर से स्थगित 50,000 कोशिकाओं / μl और 2 मिलीलीटर बाँझ बर्फ पर रखा शीशी को हस्तांतरण के वांछित एकाग्रता प्राप्त करने के लिए.
- बर्फ पर कोशिकाओं को संक्षेप में एक कम सेटिंग हर ~ 20 कोशिका आसंजन को रोकने मिनट पर vortexed किया जाना चाहिए. कोशिकाओं intracranial implantations के लिए सुरक्षित रूप से इस्तेमाल किया जा सकता है बर्फ पर नियुक्ति के बाद दो घंटे के लिए.
बी orthotopic xenograft आरोपण
- नग्न athymic एनसीआर माउस (परमाणु / यू) वजन करने के लिए एक आधारभूत, वजन पूर्व आरोपण स्थापित. हम आम तौर पर चूहों के वजन के साथ 17 और 24 ग्राम के बीच उम्र के 6-10 सप्ताह का चयन करें.
- 1 घंटा दाखिल करने से पहले, 5 मिलीग्राम / किलो पोस्ट ऑपरेटिव दर्द और सूजन के लिए एक इलाज के रूप में उपचर्म इंजेक्शन के माध्यम से गैर स्टेरायडल विरोधी भड़काऊ दवा meloxicam के साथ माउस पूर्व औषधि.
- Anesthetizई 140 मिलीग्राम / किग्रा और 10 मिलीग्राम / किग्रा क्रमशः की एक खुराक पर एक एक मिश्रण / ketamine xylazine की intraperitoneal इंजेक्शन के साथ पशु.
- पुष्टि करें कि पर्याप्त जानवर एक पैर की अंगुली चुटकी सहज प्रतिक्रिया का आकलन करने से anesthetized माउस है. यदि पशु पैर की अंगुली चुटकी जवाब, प्रक्रिया देरी जब तक संज्ञाहरण प्रभाव ले या अतिरिक्त संज्ञाहरण (<मूल राशि का 25%) इंजेक्शन लगाने पर विचार कर सकते हैं.
- थूथन restrainer के काटने बार में माउस कृन्तक hooking और थूथन पर नाक क्लैंप कस जबकि यह सुनिश्चित करना है कि माउस के सिर पर है द्वारा Stoelting डिजिटल में स्थिति के लिए तैयार माउस anesthetized माउस स्टीरियोटैक्टिक मंच (Stoelting इंक) के लिए बस एक स्तर विमान.
- Stoelting stereotactic मंच स्र्द्ध माउस स्थानांतरण, जानवर की स्थिति को समायोजित इतना है कि कान सलाखों के सुझावों कान नहर की दुम का अंत में कर रहे हैं. एक बार पशु कपाल - लांगुलिय स्थिति adjus किया गया हैटेड, काटने स्तेरेओतक्तिक फ्रेम करने के लिए बार सुरक्षित. माउस एक फर्म प्लास्टिक हीटिंग प्लेट (हार्वर्ड उपकरण) टेप के साथ Stoelting प्रतिक्रिया नियंत्रित सर्जरी के दौरान तापमान विनियमन प्रदान करने के लिए एक मंच के लिए सुरक्षित पर आराम करना चाहिए.
- आवश्यक के रूप में कान सलाखों के ऊंचाई समायोजित करें और फिर कान नहर की दुम का भाग में कान सलाखों अग्रिम, उन्हें इस तरह है कि माउस का सिर एक स्तर विमान में है और उंगली स्पर्श पर immobilized हासिल है. श्वसन संकट के संकेत के लिए ध्यान से कान सलाखों के नियुक्ति के बाद मॉनिटर. ढीला और फिर से स्थिति अगर जानवर संकट में है.
- दौरान एक गुदा तापमान तापमान TCAT 2DF नियंत्रक (हार्वर्ड तंत्र) से जुड़ा जांच पशु के तापमान पर नजर रखने और हीटिंग माउस के नीचे तैनात 36 में पशु के शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए एक थाली प्रतिक्रिया नियंत्रण प्रदान की lubricated टिप डिग्री सेल्सियस डालें प्रक्रिया.
- आंखों के लिए नेत्र मरहम लागू करने के लिए preveNT के सुखाने.
- Betadine माउस चीरा साइट कीटाणुरहित, देखभाल करने के लिए आंखों से बचने के लिए सिर के ऊपर करने के लिए समाधान लागू.
- पुष्टि करने के लिए माउस बेहोश है, अतिरिक्त ketamine / यदि आवश्यक (<प्रारंभिक खुराक के 25%) xylazine की एक छोटी राशि पहुंचाने के लिए एक पैर की अंगुली चुटकी प्रदर्शन.
- साफ 0.45 मिमी गड़गड़ाहट ड्रिल (Stoelting) सा ड्रिल (Foredom Microdrill) एक शराब पैड का उपयोग करने के लिए जुड़ी है और फिर एक गिलास मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ (500 अंकुरणकर्ता, CellPoint वैज्ञानिक) में 15 सेकंड के लिए ड्रिल बिट, बाँझ बनाना में केवल ड्रिल बिट डुबो अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ मोती.
- एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करते हुए, एक 0.75 सेमी चीरा longitudinally आँखों के स्तर से दुमदारी से विस्तार मध्य खोपड़ी में. शीर्षस्थान के दृश्य की पुष्टि करें.
- ड्रिल धारक Stoelting मंच देते हैं और ड्रिल धारक में 0.45 मिमी गड़गड़ाहट ड्रिल बिट (Stoelting) के साथ एक ड्रिल (Foredom Microdrill) जगह है, यह स्थिति में हासिल.
- टी पर वास्तव में ड्रिल बिट रखेंशीर्षस्थान और वह फिर शून्य बाहर एक्स, वाई, जेड डिजिटल stereotactic प्रदर्शन के समन्वय. ड्रिल के एक स्थिति 2 पीछे मिमी और 1.5 मिमी सही मस्तिष्क और Foredom ड्रिल के साथ जानवर की खोपड़ी में गोलार्द्ध ड्रिल में शीर्षस्थान पार्श्व टिप ले जाएँ, केवल अस्थि भेदी. एक बाँझ कपास झाड़ू धीरे चीरा के किनारों वापस लेना खोपड़ी के दृश्य को सुविधाजनक बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
- निकालें और stereotactic मंच से ड्रिल धारक ड्रिल.
- Stereotactic मंच Nanomite सुई लगानेवाला सिरिंज पंप (हार्वर्ड तंत्र) संलग्न.
- बर्फ से कोशिकाओं को हटाने और या तो धीरे भंवर संक्षिप्त दालों के साथ ट्यूमर कोशिकाओं से युक्त शीशी या धीरे कोशिकाओं को निलंबित शीशी झटका. एक 30 गेज 1 "लंबे समय फ्लैट बेवल μl 10 सिरिंज (हैमिल्टन सिरिंज) संलग्न सुई के माध्यम से सेल निलंबन की 7 μl ड्रा सिरिंज में बड़े हवाई बुलबुले से बचें. सुनिश्चित करने के लिए तरल पदार्थ की प्रारंभिक 6 μl में कोई हवाई बुलबुले हैं कआईसीएच कुल चूहे में इंजेक्शन मात्रा हो जाएगा. शेष 1 μl में छोटे हवाई बुलबुले की कोई चिंता नहीं हैं. सेल निलंबन के दोहराया आकर्षित अप से बचें, यदि संभव हो तो कोशिकाओं को नुकसान को कम करने के लिए.
- सिरिंज सुई लगानेवाला में भरी हुई सिरिंज स्थिति. एक शराब पैड का उपयोग, सेल निलंबन तरल पदार्थ है कि सुई की नोक जो extracranial अंतरिक्ष में बढ़ ट्यूमर में परिणाम हो सकता है कैंसर की कोशिकाओं के साथ चीरा साइट के प्रदूषण को रोकने में प्रकट होता है की किसी भी हटा दें.
- सुई लगानेवाला पंप सेट के 0.5 μl / मिनट की दर पर 6.0 μl देने. सेल निलंबन के आरोपण के बाद सिरिंज में शेष 1 μl यह सुनिश्चित करता है कि हवाई बुलबुले है कि अक्सर सिरिंज में एकत्र जानवर में नहीं इंजेक्ट कर रहे हैं. हवा के बुलबुले के इंजेक्शन एक घातक वायु अन्त: शल्यता में हो सकता है.
- सिरिंज सुई गड़गड़ाहट खोपड़ी सुई सीधा (90 डिग्री) को बनाए रखने के छेद में अग्रिम. एक बार सुई coordin बाहर खोपड़ी, शून्य तय की हैstereotactic डिजिटल प्रदर्शन और पर ates तो धीरे धीरे 4 मिनट की अवधि पर सुई की नोक अग्रिम जब तक यह 2.5 मिमी की गहराई तक पहुँच. सुई पीछे हिप्पोकैम्पस प्रांतस्था भाग के माध्यम से गुजरता है. एक्स, वाई, जेड stereotactic आरोपण के लिए समन्वय मस्तिष्क गोलार्द्ध भीतर एक laterally तैनात ट्यूमर उत्पन्न जबकि thalamus और ventricles इस प्रकार ट्यूमर कोशिकाओं के साथ मस्तिष्कमेरु द्रव बोने की संभावना को कम करने के लिए निकटता के रूप में इस तरह के महत्वपूर्ण मस्तिष्क संरचना के लिए चोट से बचने के लिए चुना गया था है कि अवांछनीय स्पाइनल ट्यूमर को जन्म दे सकता है. एक पीछे शीर्षस्थान के सापेक्ष स्थान एक बड़े, स्थानीय रूप से उन्नत कक्षा में ulcerating ट्यूमर की संभावना को कम करने के लिए चुना गया था. 2 मिनट के लिए गहराई में सुई के साथ रोकें और फिर कोशिकाओं का आरोपण आरंभ.
- आरोपण के दौरान, खोपड़ी एक microsurgical स्पंज भाला के साथ बार - बार करने के लिए किसी भी तरल पदार्थ युक्त ट्यूमर है कि गड़गड़ाहट छेद से बाहर हो सकता है के दौरान refluxed दूर सूखीआरोपण. Microsurgical स्पंज के साथ सुई में खलल न डालें से बचें. इस तरल पदार्थ को हटाने extracranial अंतरिक्ष में बढ़ ट्यूमर की संभावना को कम करना चाहिए.
- इंजेक्शन के बाद पूरा हो गया है, लगभग 2 मिनट के लिए मस्तिष्क में सुई और फिर धीरे धीरे 3-4 मिनट की एक अवधि में सुई निकालने छोड़.
- कान सलाखों और थूथन restrainer ढीला और stereotactic तंत्र से माउस को हटा दें.
- खोपड़ी में बाँझ हड्डी मोम के साथ गड़गड़ाहट छेद मोम एक बाँझ कपास इत्तला दे दी applicator के लकड़ी के अंत से गड़गड़ाहट छेद भर में आगे और पीछे रगड़ से जमा है. हड्डी मोम लागू जारी रखें जब तक छेद और पूरी तरह से सील कर दिया जाता हड्डी मोम सील गड़गड़ाहट छेद आसन्न खोपड़ी से भरा है.
- पुनः अनुमानित बाँझ कपास swabs साथ चीरा के किनारों और घाव सील, देखभाल करने के लिए पशु आँखों के लिए गोंद जोखिम से बचने के लिए पशु चिकित्सा ऊतक गोंद लागू.
- अंत में, 37 करने के लिए सेट एक हीटिंग पैड पर माउस जगह °पशु जब तक सी चेतना ठीक हो जाए. पशु वापस अपने मूल पिंजरे स्थानांतरण करने के लिए एक बार माउस को सतर्क और उत्तरदायी है.
सी. bioluminescent इमेजिंग (BLI) ट्यूमर के विकास और उपचार के लिए प्रतिक्रिया को मॉनिटर करने के लिए
संक्षिप्त निर्देश bioluminescent इमेजिंग के लिए का पालन करें.
- पहले एक कक्ष में ट्यूमर के साथ 2% isoflurane और ऑक्सीजन के साथ प्रत्यारोपित चूहों anesthetize.
- जबकि चूहों anesthetized हैं, उन्हें या तो D-Luciferin पोटेशियम पीबीएस में 50 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता को पतला नमक के 60 μl के साथ subcutaneously या intraperitoneally इंजेक्षन.
- संज्ञाहरण के प्रवाह पर bioluminescent इमेजिंग स्कैनर में नाक शंकु के लिए मुड़ें और जल्दी स्कैनर नाक शंकु में अपने snouts को रखने के लिए चूहों हस्तांतरण.
- चूहों के बीच काले डिवाइडर की स्थिति के लिए एक ट्यूमर से बहुत कम संकेत के साथ उच्च संकेत तीव्रता के साथ bioluminescent संकेत का खून बह रहा है सीमा एक आसन्न ट्यूमर.
- का प्रयोगलिविंग छवि सॉफ्टवेयर के एक कुल D-Luciferin के इंजेक्शन के समय के बाद 30 मिनट की अवधि के लिए लगातार धारावाहिक जोखिम ले. हम "ऑटो" एक्सपोज़र समय स्थापित एहसान के तहत एक या अधिक उजागर छवि की संभावना को सीमित करने के लिए. कोई भी जोखिम> 5 मिनट होना चाहिए.
- उपयुक्त अंतराल पर bioluminescent इमेजिंग दोहरा प्रदर्शन. सीरियल साप्ताहिक इमेजिंग कई अनुदैर्ध्य इलाज के लिए प्रतिक्रिया परीक्षण प्रयोगों के लिए एक उचित विकल्प है.
- छवियों के अधिग्रहण के बाद, जहाँ छवि सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग करने के लिए प्रत्येक ट्यूमर के आसपास प्रत्येक छवि में bioluminescent इमेजिंग सत्र के दौरान अर्जित ब्याज (आरओआई) के एक क्षेत्र ड्राइंग द्वारा ट्यूमर का विश्लेषण. ट्यूमर की bioluminescent संकेत पृष्ठभूमि bioluminescent संकेत तीव्रता की डिग्री के आधार पर सही करने के लिए ब्याज की एक पृष्ठभूमि के क्षेत्र के रूप में प्रत्येक छवि में प्रत्येक माउस के निचले पार्श्व एक दूसरे, ब्याज के छोटे क्षेत्र लागू करें. हम "चमक" के बजाय सेटिंग आउटपुट के रूप में मायने रखता है "का उपयोग कर पसंद करते हैंbioluminescent संकेत के लिए मान.
- Excel में ROI परिणाम निर्यात और अधिकतम पृष्ठभूमि प्रत्येक माउस के लिए समायोजित bioluminescent संकेत का निर्धारण.
- Bioluminescent इमेजिंग दोहराने के रूप में ट्यूमर के विकास की धारावाहिक की निगरानी के लिए संकेत. हमारे प्रयोगों में, हम साप्ताहिक BLI प्रदर्शन करते हैं. D-Luciferin के इंजेक्शन के बाद 30 मिनट हम 5 से अधिक लगातार जोखिम लेने के द्वारा एक दिया इमेजिंग सत्र के लिए अधिक से अधिक BLI संकेत निर्धारित पसंद करते हैं.
प्रतिनिधि डी. परिणाम
इस stereotactic आरोपण तकनीक 90-100% की एक सफल दर ट्यूमर ले के साथ और कम perioperative मृत्यु दर है कि आम तौर पर 5% से कम है के साथ जुड़ा हुआ है. अनायास ही साइड इफेक्ट का खतरा भी है इस तकनीक के साथ कम ट्यूमर ट्यूमर कोशिकाओं या गड़गड़ाहट छेद की अपर्याप्त बंद करने के साथ चीरा के भी बोने से ventricles, या extracranial ट्यूमर के विकास में प्रत्यारोपित कोशिकाओं से रीढ़ की हड्डी के बोने के रूप में जटिलताओं सहित, एकintracranial ट्यूमर llowing खोपड़ी में खोलने के माध्यम से विस्तार.
पूर्व ट्यूमर xenografts के vivo विश्लेषण hypoxia के क्षेत्रों की उम्मीद है, वृद्धि हुई VEGF अभिव्यक्ति और परिगलन का प्रदर्शन किया. हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) stably हमारे जीबीएम सेल लाइन द्वारा व्यक्त फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी इन xenografts infiltrative प्रकृति का पता चला.
चित्रा 1 एक माउस के दिमाग में एक ठेठ जीबीएम कोशिकाओं के सफल stereotactic आरोपण के परिणामों से पता चलता है. यह एक माउस एक 9.4 Tesla चुंबक के साथ तकनीक के साथ यहाँ वर्णित आरोपण के बाद 21 दिनों के प्रदर्शन मस्तिष्क के मस्तिष्क टी 2 भारित एमआरआई स्कैन चित्रा 1 है. दाएँ गोलार्द्ध (गुलाबी में contoured) में ट्यूमर का एक ही ध्यान केंद्रित से पता चलता है 19 3 मिमी को मापने कि आरोपण साइट के सटीक निर्देशांक localizes है.
चित्रा 2 bioluminescent इमेजिंग के परिणामों से पता चलता है techn का उपयोग कर iques 10 चूहों के एक समूह के लिए यहाँ stereotactically प्रत्यारोपित ट्यूमर जो समान रूप से थे स्तरीकृत अधिकतम bioluminescent संकेत तीव्रता के आधार पर करने के लिए या तो कपाल विकिरण (4 Gy x 4 दैनिक fractions) या सब पर कोई उपचार प्राप्त के साथ वर्णित है. इस प्रयोग में, bioluminescent इमेजिंग से पता चलता है कि विकिरण चिकित्सा प्रत्यारोपित ट्यूमर के प्रसार को रोकता है, पता लगाया bioluminescent संकेत में कोई वृद्धि में जिसके परिणामस्वरूप, जबकि संकेत नकली विकिरणित नियंत्रण ट्यूमर, कैंसर कोशिकाओं के अनियंत्रित प्रसार के कारण काफी बढ़ जाती है.
चित्रा 1 (वीडियो) एक माउस मात्रा ट्यूमर (गुलाबी) के contouring के साथ एक U251 glioblastoma मल्टीफार्मी ट्यूमर युक्त मस्तिष्क के कोरोनल एमआरआई वर्गों. एक 9.4 Tesla स्कैनर पर स्कैन एक स्पिन गूंज टी 2 भारित प्रोटोकॉल का उपयोग किया गया था. फिल्म को देखने के लिए यहां क्लिक करें .
2 पुनः "" = "files/ftp_upload/4089/4089fig2.jpg /" />
चित्रा 2. Stereotactically प्रत्यारोपित glioblastoma मल्टीफार्मी ट्यूमर के साथ 10 चूहों या तो 4 भागों में बाहरी बीम विकिरण 16 Gy चिकित्सा या कोई उपचार के साथ इलाज किया गया. Bioluminescent इमेजिंग के साथ चूहे imaged थे उपचार के शुरू होने के बाद इलाज के लिए पहले और साप्ताहिक. ग्राफ सापेक्ष मंझला गुना परिवर्तन जहां गुना परिवर्तन पूर्व उपचार अधिकतम BLI मूल्य वर्तमान अधिकतम BLI मूल्य के अनुपात के रूप में परिभाषित किया गया है के रूप में गणना की bioluminescence प्रस्तुत.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
इस पत्र में वर्णित चूहों में कैंसर कोशिकाओं के stereotactic आरोपण की विधि reproducibly ट्यूमर है कि यथोचित नैदानिक glioblastoma मल्टीफार्मी 2, 6-8 की infiltrative और तेजी से विकास पैटर्न पुनरावृत्ति करना उत्पन्न करता है. यह तकनीक विशेष रूप से चूहों stratifying जहां तुलनीय आकार और जैविक गुणों और विशिष्ट शारीरिक स्थानों में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य ट्यूमर वांछनीय हैं अलग उपचार समूहों के लिए समान रूप प्रयोगों के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है. हम तकनीक का वर्णन का उपयोग कर ट्यूमर कोशिकाओं के स्टीरियोटैक्टिक आरोपण तत्काल सबसे translational अनुसंधान प्रयोगशालाओं 7,9-11 द्वारा प्राप्त किया जाना चाहिए.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Digital Just for Mouse Stereotaxic Instrument | Stoelting | 51730D | Stereotactic platform for mouse implantation |
| Ketamine/xylazine | Injectable anesthesia | ||
| Puralube Vet Ointment (ophthalmic) | Amazon.com | To prevent drying of the mouse's eyes | |
| drill holder for the stereotactic platform | Stoelting | 51681 | |
| Micromotor Electric Drill | Stoelting | 51449 | For drilling through the skull |
| .45 mm carbide drill bit | Stoelting | 514551 | |
| Sterile cotton swabs | Fisher Scientific | 23-400-100 | |
| Glass bead dry sterilizer (Germinator 500) | Braintree Scientific | GER-5287 | To sterilize metal surgical instruments |
| Mouse rectal probe | Braintree Scientific | RET-3-ISO | Compatible with the temperature controller |
| Temperature Controller (TCAT-2DF) | Harvard Apparatus | 727561 | Temperature controller to maintain animal's temperature during surgery |
| Small heating plate | Harvard Apparatus | 727617 | For use with temperature controller to warm mouse during surgery. The heating plate fits under the mouse on the stereotaxic platform. |
| Disposable Scalpels | BD Bard-Parker | 2015-11 | #10 scalpel |
| 10 microliter syringe | Hamilton | 7635-01 | For injection of tumor cells |
| 30 gauge needles, 1" long, with flat point | Hamilton | Various | Must be compatible with the 10 μl syringe |
| Nanomite Programmable Syringe Pump | Harvard Apparatus | 704507 | Digital motorized syringe injector for stereotaxic device |
| Cellulose sterile surgical spear sponges | Ultracell | 40410 | To dry the surgical field |
| Bone wax | Ethicon | W31 | To seal the burr hole |
| Tissumend II synthetic absorbable tissue adhesive | Veterinary Products Laboratories | 3002931 | To seal the incision |
| Hot water pump with warming pad | Gaymar | TP-650 | Warms mice in post-operative period |
| IVIS Lumina II | Caliper Life Science | Bioluminescent imager | |
| D-Luciferin potassium salt | Gold Biotechnology | LUCK-1 | Luciferin for bioluminescent imaging |
References
- Stupp, R. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).
- Jacobs, V. L., Valdes, P. A., Hickey, W. F., De Leo, J. A. Current review of in vivo GBM rodent models: emphasis on the CNS-1 tumour model. ASN Neuro. 3, e00063 (2011).
- Shelton, L. M. A novel pre-clinical in vivo mouse model for malignant brain tumor growth and invasion. J. Neurooncol. 99, 165-176 (2010).
- Brehar, F. M. The development of xenograft glioblastoma implants in nude mice brain. J. Med. Life. 1, 275-286 (2008).
- Ozawa, T., James, C. D. Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging. J. Vis. Exp. (41), e1986 (2010).
- Radaelli, E. Immunohistopathological and neuroimaging characterization of murine orthotopic xenograft models of glioblastoma multiforme recapitulating the most salient features of human disease. Histol. Histopathol. 24, 879-891 (2009).
- Baumann, B. C. Enhancing the efficacy of drug-loaded nanocarriers against brain tumors by targeted radiation therapy. , Submitted (2012).
- Baumann, B. C. An integrated method for reproducible and accurate image-guided stereotactic cranial irradiation of brain tumors using the Small Animal Radiation Research Platform (SARRP). Transl. Oncol. , Forthcoming (2012).
- Park, S. S. MicroPET/CT imaging of an orthotopic model of human glioblastoma multiforme and evaluation of pulsed low-dose irradiation. Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 80, 885-892 (2011).
- Szentirmai, O. Noninvasive bioluminescence imaging of luciferase expressing intracranial U87 xenografts: correlation with magnetic resonance imaging determined tumor volume and longitudinal use in assessing tumor growth and antiangiogenic treatment effect. Neurosurgery. 58, 365-372 (2006).
- Dinca, E. B. Bioluminescence monitoring of intracranial glioblastoma xenograft: response to primary and salvage temozolomide therapy. J. Neurosurg. 107, 610-616 (2007).
