在实体肿瘤间质流体流动升高,可以调节肿瘤细胞的侵袭。在这里,我们描述了技术应用嵌入在一个矩阵的细胞间质流体流动,然后测量其细胞浸润的影响。这种技术可以很容易地适应学习其他系统。
大多数实体肿瘤的生长和发展依赖于初始变换的癌细胞,他们的反应基质的相关信号在肿瘤微环境1。此前,在肿瘤微环境的研究主要集中在肿瘤基质的相互作用1-2。然而,肿瘤微环境,还包括各种生物物理力量,其影响仍然知之甚少。这些部队是肿瘤生长的生物力学的后果,导致基因表达的变化,细胞分裂,分化和入侵3。矩阵密度4,5-6,刚度和结构6-7,组织间液压力8,8间质流体流动都改变在癌症的发展。
在肿瘤间质流体流动特别是高于正常组织8-10。估计间质液FLOW速度进行了测量,发现是在0.1-3微米S -1的范围内,根据肿瘤大小和分化9,11。这是由于肿瘤诱导的血管生成和血管通透性增加12所造成的升高间质流体压力。间质流体流动已被证明能增加入侵的癌细胞13-14血管成纤维细胞和平滑肌细胞15。这次入侵可能是由于自体细胞趋化细胞周围建立3 – D 16的梯度或增加15基质金属蛋白酶(MMP)的表达,分泌趋化因子和细胞粘附分子表达17。然而,细胞感受到流体流动的机制,不能很好地理解。此外,改变肿瘤细胞的行为,间质流体流动的调节其他细胞在肿瘤微环境的活动。它与(一)驾驶的成纤维细胞分化成肿瘤促进myofibr州18,(B)抗原的搬运和其他可溶性因子,淋巴结肿大19,(三)调节淋巴管内皮细胞形态20。
这里介绍的技术对体外细胞间质流体流动和量化入侵( 图1)的影响。这种方法已经公布在基质和癌细胞侵袭13日至15日,17多个研究测量流体流量的影响。通过改变基质组成,细胞类型和细胞浓度,此方法可以适用于其他疾病和生理系统的研究侵袭,分化,增殖,基因表达,如细胞过程间流动的影响。
在这里,我们所描述的量化对肿瘤细胞浸润间流动的影响,使用一个3-D矩阵嵌入细胞内的细胞培养插入方法。这和其他类似的方法已被用来研究多种细胞类型,13日至15日,17间流动的影响。我们的做法,部分模仿使用类型的肿瘤基质微环境,我胶原和基底膜含有蛋白质发现在基底膜上皮组织和周围基质21-22。这个系统是相对容易的设置了,简单,更具成本比大多数微流体装置,用?…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Collagen (Rat Tail) | BD | 354236 | Keep sterile |
Millicell cell culture insert | Millipore | PI8P01250 | 8 μm pore diameter, polycarbonate membrane |
Matrigel | BD | 354234 | Keep sterile |
PBS | Sigma Aldrich | 100M-8202 | 10x for preparing gel solution, 1x for washing steps |
Sodium Hydroxide, 1.0N Solution | Sigma Aldrich | S2770 | Keep sterile |
DMEM 1X | CellGro | 10-013-CV | Keep sterile |
Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | 511150 | Keep sterile |
Penicillin Streptomycin | CellGro | 30002CI | Keep sterile |
Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100-500 ml | 0.5% in PBS |
Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 04042-500 | 4% in PBS |
Deionized Water | Keep sterile | ||
4′,6-diaminido-2-phenylindole (DAPI) | MP Biomedicals | 0215757401 | 1 mg/ml stock solution |
Mounting Solution | Thermo Scientific | TA-030-FM | |
Trypsin-EDTA | CellGro | 25-052-CI | Keep sterile |