Интерстициальный потока жидкости поднимается в твердых опухолях и могут модулировать опухолевой инвазии клеток. Здесь мы опишем технику применить интерстициальный потока жидкости в клетки встроены в матрицу, а затем измерить его воздействие на клетки вторжения. Этот метод может быть легко адаптирована для изучения других систем.
Роста и прогрессирования наиболее солидных опухолей зависит от начальных преобразований раковые клетки и их реакции на строму связанных сигнализации в опухолевых микроокружения 1. Ранее исследования на опухоль микросреде была сосредоточена главным образом на стромальные опухоли взаимодействий 1-2. Тем не менее, опухоль микросреде также включает в себя различные биофизические силы, последствия которого остаются плохо. Эти силы биомеханического последствия роста опухоли, что приводит к изменениям в экспрессии генов, клеточного деления, дифференцировки и инвазии 3. Матрица плотности 4, жесткость 5-6, 6-7 и структуры, интерстициального давления жидкости 8, интерстициальный потока жидкости 8, все изменили в прогрессии рака.
Интерстициальный потока жидкости, в частности, выше в опухоли по сравнению с нормальными тканями 8-10. По оценкам интерстициальной жидкости этой скорости были измерены и признаны в диапазоне 0,1-3 мкм с -1, в зависимости от размера опухоли и дифференциации 9, 11. Это связано с повышенным давлением интерстициальной жидкости вызвано опухолью индуцированной ангиогенеза и повышенной проницаемостью сосудов 12. Интерстициальный потока жидкости было показано, что увеличение проникновение раковых клеток 13-14, сосудистые фибробластов и гладкомышечных клеток 15. Это вторжение может быть связано с аутологичной градиент хемотаксиса создали вокруг клетки в 3-D 16 или увеличение матрицы металлопротеиназы (ММП) выражение 15 секрецию хемокинов и молекул клеточной адгезии выражение 17. Тем не менее, механизм, посредством которого клетки чувствуют жидкости не очень хорошо понял. В дополнение к изменению поведения опухоли клетки, интерстициальные поток жидкости изменяет активность других клеток в опухоли микроокружения. Это связано с (а) вождение дифференциации фибробластов в опухоли содействия myofibrобласти 18, (б) транспортировки антигенов и других растворимых факторов, в лимфатические узлы 19, и (с) модуляции лимфатические эндотелиальные клетки морфогенеза 20.
Техники, представленные здесь накладывает интерстициальный потока жидкости на клетки в пробирке и количественно ее влияние на вторжение (рис. 1). Этот метод был опубликован в нескольких исследований для оценки воздействия жидкости на стромальные и вторжение раковых клеток 13-15, 17. При изменении состава матрицы, тип клеток и концентрации клеток, этот метод может быть применен к другим болезням и физиологических систем для изучения последствий внедрения потока на клеточных процессов, таких как вторжение, дифференцировке, пролиферации и экспрессии генов.
Здесь мы описали методику количественной оценки эффекта внедрения потока на инвазии опухоли клетки, используя встроенный клетки в 3-D матрица в течение вставки культуре клеток. Этот и подобные методы были использованы для изучения влияния внедрения потока на различные типы клеток, 1…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Collagen (Rat Tail) | BD | 354236 | Keep sterile |
Millicell cell culture insert | Millipore | PI8P01250 | 8 μm pore diameter, polycarbonate membrane |
Matrigel | BD | 354234 | Keep sterile |
PBS | Sigma Aldrich | 100M-8202 | 10x for preparing gel solution, 1x for washing steps |
Sodium Hydroxide, 1.0N Solution | Sigma Aldrich | S2770 | Keep sterile |
DMEM 1X | CellGro | 10-013-CV | Keep sterile |
Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | 511150 | Keep sterile |
Penicillin Streptomycin | CellGro | 30002CI | Keep sterile |
Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100-500 ml | 0.5% in PBS |
Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 04042-500 | 4% in PBS |
Deionized Water | Keep sterile | ||
4′,6-diaminido-2-phenylindole (DAPI) | MP Biomedicals | 0215757401 | 1 mg/ml stock solution |
Mounting Solution | Thermo Scientific | TA-030-FM | |
Trypsin-EDTA | CellGro | 25-052-CI | Keep sterile |