وصفنا لإنشاء منهجيات<em> في المختبر</em> غيروي نماذج ثلاثية الأبعاد تتألف من الخلايا الليفية المبيض والمبيض الطبيعي سطح خلايا سرطان المبيض أو الظهارية. نناقش استخدام هذه النماذج لدراسة التفاعلات اللحمية-الظهارية التي تحدث أثناء تطور سرطان المبيض.
سرطان المبيض الظهاري (EOCs) هي السبب الرئيسي للوفاة من أمراض النساء الأورام الخبيثة في المجتمعات الغربية. على الرغم من التقدم في العلاجات الجراحية وتحسين الكيميائي البلاتيني، كان هناك تحسن طفيف في معدلات البقاء على قيد الحياة لEOC 1،2 أكثر من أربعة عقود. في حين المرحلة الأولى الأورام لديها معدلات البقاء لمدة 5 سنوات> 85٪، ومعدلات البقاء على قيد الحياة لمرحلة III / IV المرض هي <40٪. وبالتالي، يمكن أن ارتفاع معدلات وفيات EOC انخفضت بشكل ملحوظ إذا تم الكشف عن الأورام في وقت سابق، مراحل، أكثر قابلية للعلاج 3-5. في الوقت الحاضر، ما زال يجهل الأساس الجزيئي الوراثية والبيولوجية في وقت مبكر من مرحلة تطور المرض. وبشكل أكثر تحديدا، لا يعرف إلا القليل عن دور المكروية خلال بدء الورم، ولكن عوامل الخطر المعروفة لEOCs (مثل العمر والتكافؤ) تشير إلى أن المكروية يلعب دورا رئيسيا في نشأة الأولى من EOCs. لذلك قمنا بتطوير نماذج ثلاثية الأبعاد غيرويمن المبيض كل من الطبيعي في وقت مبكر وسرطان المبيض المرحلة. لالمبيض الطبيعي، شاركنا في سطح المبيض الطبيعي مثقف الظهارية (IOSE) والخلايا الليفية اللحمية العادي (INOF) الخلايا، الذي خلده تنبيغ retrovrial من الوحيدات الحفاز لعميم الإنزيم تيلوميراز الإنسان (hTERT) لتمديد عمر هذه الخلايا في الثقافة. في تصميم نموذج المراحل الأولى من التحول المبيض الخلايا الظهارية، overexpression من الجين الورمي CMYC في الخلايا IOSE، ومرة أخرى شارك في تربيتها مع خلايا INOF. واستخدمت هذه النماذج غيروي للتحقيق في آثار الشيخوخة والشيخوخة على التحول وغزو الخلايا الظهارية. نحن هنا وصف الخطوات المنهجية في تطوير هذه نموذج ثلاثي الأبعاد، وهذه المنهجيات ليست محددة لتنمية المبيض الطبيعي والأنسجة سرطان المبيض، ويمكن استخدامها لدراسة أنواع الأنسجة الأخرى حيث التفاعلات الخلية اللحمية والظهارية هي الأساسية جانب من جوانب صيانة الأنسجة وديsease التنمية.
ما زال يجهل الكثير عن بيولوجيا في مرحلة مبكرة سرطان المبيض الظهاري (EOC). ربما كان واحدا من العقبات الرئيسية في هذا المجال لسنوات عديدة وعدم فهم أصول الأنسجة محددة لهذا المرض، وأهمية دور المكروية في التنمية EOC. على مدى السنوات القليلة الماضية، وأصبح من الواضح أن EOC هو مر…
The authors have nothing to disclose.
تم إجراء هذا البحث في كلية كيك للطب في جامعة كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية، وجامعة كوليدج في لندن، المملكة المتحدة. ويتم تمويل KL من المعهد الوطني للمنحة الصحة 5 U19 CA148112-02. وقد تم تمويل BG المشروع من خلال منحة من المؤسسة الخيرية الاستئناف عشية الأورام النسائية (UK). وبعض هذه الأعمال التي اضطلعت في UCLH / UCL تمويل جزئي من وزارة الصحة بحوث الطبية الحيوية NIHR نظام التمويل المركز.
Reagent | Supplier | Catalogue Number |
PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
PBS | VWR | 12001-766 |
0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.