Nous décrivons les méthodes pour établir<em> In vitro</em> Hétérotypiques modèles tridimensionnels comprenant des fibroblastes et la surface de l'ovaire ou de l'ovaire normale des cellules ovariennes cancéreuses épithéliales. Nous discutons de l'utilisation de ces modèles pour l'étude du stroma-épithéliales interactions qui se produisent au cours du développement du cancer de l'ovaire.
Cancers épithéliaux de l'ovaire (COU) sont la principale cause de décès par cancer gynécologique dans les sociétés occidentales. Malgré les progrès dans les traitements chirurgicaux et l'amélioration des chimiothérapies à base de platine, il ya eu peu d'amélioration dans les taux de survie des COE pendant plus de quatre décennies 1,2. Bien que les tumeurs de stade I ont des taux de survie à 5 ans> 85%, les taux de survie pour le stade III / IV maladies sont <40%. Ainsi, les taux élevés de mortalité pour COE pourrait être considérablement diminué si les tumeurs ont été détectées au plus tôt, plus traitables les étapes 3-5. À l'heure actuelle, la base génétique moléculaire et biologique de stade de développement précoce de la maladie est mal comprise. Plus précisément, on sait peu au sujet du rôle du microenvironnement tumoral lors de l'initiation, mais les facteurs de risque connus pour la COU (par exemple l'âge et la parité) suggèrent que le microenvironnement joue un rôle clé dans la genèse précoce de la COU. Nous avons donc développé des modèles tridimensionnels hétérotypiquesà la fois de l'ovaire normal et du début des cancers de l'ovaire stade. Pour l'ovaire normal, nous co-cultivées surface épithéliale ovarienne normale (IOSE) et des fibroblastes du stroma normale (INOF) cellules, immortalisé par transduction retrovrial de la sous-unité catalytique de la télomérase humaine holoenzyme (hTERT) pour prolonger la durée de vie de ces cellules en culture. Pour modéliser les premières étapes de la transformation cellulaire épithélial de l'ovaire, la surexpression de l'oncogène dans les cellules CMYC IOSE, nouveau co-cultivées avec des cellules INOF. Ces modèles hétérotypiques ont servi à étudier les effets du vieillissement et de la sénescence sur la transformation et l'invasion des cellules épithéliales. Ici, nous décrivons les étapes méthodologiques dans le développement de ces modèles en trois dimensions; ces méthodologies ne sont pas spécifiques au développement de l'ovaire normal et les tissus du cancer de l'ovaire, et pourrait être utilisée pour étudier les autres types de tissus où les interactions cellules stromales et épithéliales sont un élément fondamental aspect de l'entretien des tissus et didéveloppement malad.
La biologie du stade précoce de cancer ovarien épithélial (COE) est mal comprise. Peut-être l'un des principaux obstacles dans ce domaine depuis de nombreuses années a été le manque de compréhension des origines tissulaires spécifiques de la maladie, et de l'importance du rôle du microenvironnement dans le développement des COE. Au cours des dernières années, est devenu clair que des COE est une maladie hétérogène avec de multiples sous-types distincts histophathological, probablement avec diffé…
The authors have nothing to disclose.
Cette recherche a été effectuée à la Keck School of Medicine, University of California, Etats-Unis, et l'University College London, Royaume-Uni. KL est financé par l'Institut national de la Santé subvention de 5 U19 CA148112-02. BG a été financé par une subvention de projet de la charité appel Eve oncologie gynécologique (Royaume-Uni). Certains de ces travaux entrepris à UCLH / UCL a été en partie le financement du ministère de la Santé INDH recherche biomédicale système de financement du Centre.
Reagent | Supplier | Catalogue Number |
PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
PBS | VWR | 12001-766 |
0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.