Vi beskriver metoder til oprettelse af<em> In vitro</em> Heterotypiske tredimensionelle modeller omfatter æggestokkene fibroblaster og normalt ovarialt overflade eller ovariecancer epitelceller. Vi diskuterer brugen af disse modeller til at studere stromal-epiteliale samspil, der opstår i løbet af kræft i æggestokkene udvikling.
Epitelial kræft i æggestokkene (EOCs) er den hyppigste dødsårsag fra gynækologisk malignitet i de vestlige samfund. Trods fremskridt inden kirurgiske behandlinger og forbedrede platinbaserede kemoterapier, har der været en lille forbedring i EOC overlevelsesrater i mere end fire årtier 1,2. Mens fase I tumorer har 5-års overlevelsesraterne> 85%, overlevelseschancerne for stadium III / IV sygdom er <40%. Således kunne den høje dødelighed for EOC være signifikant nedsat, hvis tumorer blev opdaget ved tidligere, mere behandlelige, trin 3-5. På nuværende tidspunkt er den molekylære genetiske og biologiske grundlag for sygdommens tidlige stadium udvikling dårligt forstået. Mere specifikt er lidt om den rolle, mikromiljø under tumor initiering, men kendte risikofaktorer for EOCs (fx alder og paritet) tyder på, at mikromiljø spiller en central rolle i den tidlige tilblivelse EOCs. Vi har derfor udviklet tre-dimensionelle heterotypiske modelleraf både normalt ovarie og i early stage ovariecancere. For normalt ovarie, vi co-dyrket normalt ovarialt epitel overflade (IOSE) og normal stromal fibroblast (INOF) celler, immortaliseret ved retrovrial transduktion af den katalytiske underenhed af human telomerase holoenzymet (hTERT) for at forlænge levetiden af disse celler i kultur. At modellere de tidligste stadier af ovarie epitelcelle transformation, overekspression af CMYC onkogenet i IOSE celler, igen dyrket sammen med INOF celler. Disse heterotypiske modeller blev anvendt til at undersøge virkningerne af aldring og alderdom på transformation og invasion af epitelceller. Her beskriver vi de metodiske trin i udviklingen af disse tre-dimensionelle model, og disse metoder er ikke specifikke for udviklingen af normal æggestok og kræft i æggestokkene væv, og kan bruges til at studere andre vævstyper hvor stromale og epitel celleinteraktioner er en fundamental aspekt af vævet vedligeholdelse og diskadedyr eller sygdomme i udvikling.
Biologi tidlige fase epitelial kræft i æggestokkene (EOC) er svær at forstå. Måske en af de væsentligste hindringer på dette område i mange år har været den manglende forståelse af vævsspecifikke oprindelse af sygdommen, og om betydningen af den rolle, mikromiljøet i EOC udvikling. I de senere år er der blevet klart, at EOC er en heterogen sygdom med flere distinkte histophathological subtyper, formentlig med forskellige cellulære oprindelse til forskellige undertyper. For eksempel viser de ak…
The authors have nothing to disclose.
Denne forskning blev udført på Keck School of Medicine, University of California, USA og University College London, UK. KL er finansieret af National Institute of Health tilskud 5 U19 CA148112-02. BG blev finansieret af en projektbevilling fra Eve Appeal gynækologiske onkologiske velgørenhed (UK). Noget af dette arbejde, der udføres på UCLH / UCL blev delvist tilskud fra Department of Health er NIHR Biomedical Research Centre støtteordning.
Reagent | Supplier | Catalogue Number |
PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
PBS | VWR | 12001-766 |
0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.