Summary
खरगोश के पैर के घुटने में osteochondral दोष के इलाज के लिए एक प्रयोगात्मक तकनीक का वर्णन किया है. osteochondral दोष में अल्लोजीनिक mesenchymal स्टेम सेल के प्रत्यारोपण ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में एक होनहार विकास प्रदान करता है. आतंच सेल के थक्के की तैयारी
Protocol
Mesenchymal स्टेम सेल के अलगाव के लिए एक दाता खरगोश की ए तैयारी (सर्जरी कक्ष)
- प्रकोष्ठों पुरुष 4 महीने की उम्र में न्यूजीलैंड व्हाइट (NZW) खरगोश और लगभग 3 किलोग्राम शरीर के वजन से अलग कर रहे हैं.
- Propofol (10 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन चार) द्वारा संज्ञाहरण प्रेरित और सोडियम pentobarbital (100 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन iv) के बलिदान.
- एक बिजली क्लिपर के साथ पिछले पैर, पीठ और पेट से फर दाढ़ी और फर शून्य.
- 70% इथेनॉल के साथ अच्छी तरह से मुंडा क्षेत्र कीटाणुरहित.
- ऊतकों और ligaments के लिए कुंद संदंश, तेज कैंची (या स्केलपेल) और हड्डी कटर का उपयोग करें.
- पैर और बछड़ा की कपाल सतह के साथ एक चीरा बनाओ.
- या तो तेज या कुंद विच्छेदन से त्वचा और चमड़े के नीचे ऊतक को दर्शाते हैं.
- अलग मांसपेशियों और टिबिया और फीमर से स्नायुबंधन. एक साफ विच्छेदन बनाने के लिए संभव के रूप में हड्डी के करीब कटौती रखें. इस समय टिबिया से फीमर अलग मत करो.
- क कटough ऐसीटैबुलम से फीमर के सिर अलग करने के लिए संयुक्त कूल्हे.
- Tibial-ऊरु जटिल तरक्की.
- हड्डियों से किसी भी शेष नरम ऊतक परिमार्जन या बाँझ कपड़ा ऊतकों के साथ हड्डियों रगड़ना स्केलपेल ब्लेड का प्रयोग करें. इस बिंदु पर, फीमर और टिबिया अभी भी जुड़े हुए हैं.
- काटने से पटेला निकालें, तो अंत में अलग हड्डियों को संयुक्त घुटने स्नायुबंधन कटौती.
- स्प्रे 70% इथेनॉल के साथ हड्डियों को अलग किया, हवा सूखी और सेल संस्कृति मध्यम (DMEM 1% पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (पेन / Strep)) उन्हें नम रखने के साथ एक 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में प्रत्येक हड्डी जगह है.
- अब एक बाँझ सेल संस्कृति लामिना का प्रवाह हुड के तहत स्विच.
बी (सेल संस्कृति हुड) हड्डियों और विस्तार से खरगोश एमएससी की फ्लशिंग
- ट्यूब से हड्डियों को ले लीजिए और बाँझ संदंश का उपयोग कर 150 मिमी बर्तन में रख दें.
- दोनों हड्डी नया 150 मिमी व्यंजन को एक बाँझ देखा और चाल टुकड़े के साथ समाप्त होता है निकालें.
- दवा के साथ एक 10 मिलीलीटर सिरिंज भरेंउम (DMEM), एक 18 गेज सुई देते हैं और अस्थि मज्जा के उद्घाटन में डालें.
- फिर, डिश में अस्थि मज्जा फ्लश करने के लिए माध्यम के साथ मज्जा गुहा कुल्ला. यदि संभव हो तो बाद में, दूसरे छोर से कुल्ला. यदि आवश्यक हो, छोर से अधिक दूर देखा. हड्डी तोड़ने चाहिए, सिर्फ हड्डी के अंदर कुल्ला.
- सिरिंज में सेल के माध्यम निलंबन महाप्राण और निलंबन अस्थि मज्जा गुहा और मज्जा के थक्के दिखाई आगे नहीं हड्डी के माध्यम से मुक्त चल रहा है जब तक बार बार अस्थि मज्जा कुल्ला.
- एक बार अस्थि मज्जा मज्जा झुरमुटों एक 18 गेज सुई के माध्यम से पारित करके बाधित, सभी हड्डियों से एकत्र किया गया है: सुई संलग्न के साथ सिरिंज भरें और मध्यम में जबरदस्ती बाहर.
- बाद में, एक 50 मिलीलीटर ट्यूब में एक सेल फिल्टर के माध्यम से निलंबन फिल्टर. सेल नुकसान को रोकने के क्रम में, 10 मिलीलीटर मध्यम साथ संस्कृति डिश 2x धोने और साथ ही फिल्टर.
- आरटी पर 5 मिनट के लिए 500 XG पर निलंबन अपकेंद्रित्र.
- सतह पर तैरनेवाला और resuspend सेल तितर निकालेंएट 10 मिलीलीटर मध्यम में (DMEM के 1% पेन / Strep).
- एक Biocoll अलग समाधान का उपयोग कर परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear (PBMC) और mesenchymal स्टेम सेल (एमएससी) से अलग रक्त कोशिकाओं.
- Biocoll एक 15 मिलीलीटर ट्यूब में समाधान अलग से 5 मिलीलीटर भरें और ध्यान से आरटी पर 20 मिनट (ब्रेक के बिना) के लिए 800 XG पर शीर्ष और अपकेंद्रित्र पर सेल निलंबन के 5 मिलीलीटर जोड़ें.
- PBMC और mesenchymal स्टेम सेल इंटरफेस पर बने हुए हैं जबकि Biocoll, नीचे करने के लिए लाल रक्त कोशिकाओं तलछट से होने के नाते सघन: संभावित परिणामों चित्रा 1 देखें.
- ध्यान से एक 15 मिलीलीटर ट्यूब में इंटरफेस को हटाने और 5 मिलीलीटर पीबीएस के साथ धो लो.
- के रूप में, चरण 22 में वर्णित 5 मिलीलीटर पीबीएस में resuspend अपकेंद्रित्र और 2-3x दोहराने.
- फिर, आरटी पर 10 मिनट (ब्रेक के साथ) के लिए 350 XG पर फिर से अपकेंद्रित्र.
- 10 मिलीलीटर मध्यम में Resuspend और एक hemocytometer में कोशिकाओं की गिनती.
- 150 मिमी बर्तन में लगभग 5 x 10 6 के एक प्रारंभिक बोने घनत्व पर प्लेट कोशिकाओं.
- 2-3 दिनों के बाद, फिर सेगैर पक्षपाती कोशिकाओं चाल. आप सेल मलबे को हटाने के क्रम में पीबीएस पहले से कुल्ला करना पड़ सकता है. ताजा पूरा मध्यम जोड़ें (DMEM + 10% भ्रूण बछड़ा सीरम (एफसीएस) 1% पेन / Strep) बाद में.
- कोशिकाओं हर 3-4 दिनों (चित्रा 2) फ़ीड.
- बाद 5-10 दिनों के लिए पहली बार पारित होने कोशिकाओं.
इन विट्रो में आतंच थक्के के सी. तैयारी
- आरोपण के दिन में 0.25% trypsin-EDTA के लिए एक 3 मिनट जोखिम से बोतल / बर्तन से पक्षपाती कोशिकाओं को रिलीज. पूरा मध्यम जोड़कर trypsinization बंद करो.
- एक 50 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में कोशिकाओं बांटो और पीबीएस के साथ दो बार उन्हें धोने.
- Trypan नीले धुंधला द्वारा सेल व्यवहार्यता और संख्या का निर्धारण करते हैं.
- 50,000 कोशिकाओं / microcentrifuge ट्यूब जोड़ें और आरटी पर 5 मिनट के लिए 500 XG पर centrifugation द्वारा छर्रों इकट्ठा. जरूरत के रूप में कम से कम एक थक्का के लिए एक mastermix तैयार.
- 17 μl पीबीएस में सेल गोली Resuspend और Tissu की फाइब्रिनोजेन घटक के 25 μl मिश्रणइस 17 μl एमएससी निलंबन के साथ सीओएल किट.
- Vivo में छेद ड्रिल (चित्रा 3) के अनुसार पूर्व drilled छेद (3x3.6 मिमी) के साथ एक बाँझ थाली ले लो.
- सबसे पहले, 42 μl फाइब्रिनोजेन सेल निलंबन और शीर्ष पर फिर से 4 μl थ्रोम्बिन समाधान की तत्काल अलावा द्वारा पीछा एक छेद, में 4 μl थ्रोम्बिन समाधान (500 आइयू / एमएल) टीका लगाना. पिपेट टिप में थक्के से बचने के लिए निलंबन मिश्रण मत करो. सबसे पहले, pipetted फाइब्रिनोजेन सेल निलंबन के 50 μl मात्रा सतह के तनाव की वजह से पिघलने के बिना पूर्व drilled छेद के रिम बढ़ाना होगा. हालांकि, पूरी थक्के के बाद (60 मिनट के बाद) थक्का करार है और पूर्व drilled छेद में फिट बैठता है.
- ध्यान से पीबीएस के साथ एक microcentrifuge ट्यूब में एक कुंद संदंश और जगह का उपयोग कर थक्का निकालें. 2 थक्के / जानवरों की तैयारी.
- सर्जरी के कमरे में थक्के लो.
आतंच थक्के में allogeneic mesenchymal स्टेम सेल डी. आरोपण
- Propofol के चार इंजेक्शन (10 मिग्रा / किग्रा शरीर के वजन) द्वारा खरगोश (5-6 महीने पुरानी NZW, पुरुष, 3.5-4.0 किलोग्राम शरीर के वजन,) के लिए संज्ञाहरण प्रेरित.
- एक बिजली क्लिपर और वैक्यूम फर के साथ पर संचालित किया जा घुटने दाढ़ी. पहले नामित सभी प्रक्रियाओं ऑपरेटिंग कमरे की बाँझ पर्यावरण के प्रदूषण से बचने के लिए एक सर्जरी तैयारी कमरे में प्रदर्शन कर रहे हैं.
- इंटुबैषेण के बाद, 1.5 मिलीग्राम / किग्रा / मिनट propofol और 0.05 मिलीग्राम / किग्रा / नसों मिनट fentanyl साथ संज्ञाहरण बनाए रखें. Capnography, नाड़ी oximetry और पल्स दर का उपयोग करके संज्ञाहरण मॉनिटर.
- पूरी तरह मुंडा घुटने कीटाणुरहित और एक बाँझ ड्रेसिंग के साथ खरगोश के बाकी को कवर किया.
- पटेला टटोलना और वुटने की चक्की के लिए औसत दर्जे का एक त्वचा चीरा प्रदर्शन करते हैं.
- बाँझ शर्तों के तहत एक औसत दर्जे का parapatellar संधिकर्तन द्वारा संयुक्त घुटने खोलें. किसी भी छोटे सतही रक्त वाहिकाओं काटने से बचने की कोशिश करें.
- (चित्रा 4) पार्श्वतः पटेला विस्थापित.
- Inspe बादकिसी भी सहवर्ती उपास्थि घावों या संयुक्त विसंगतियों के लिए संयुक्त घुटने की ction, एक बंद डिवाइस के साथ एक बाँझ हवा ऑपरेटिंग शक्ति ड्रिल के साथ घिरनी जैसा नाली में दो osteochondral दोष (गहरी 3 मिमी, आठ के आकार का आंकड़ा) (व्यास में 3.6 मिमी) बना (चित्रा 5).
- दोष स्वच्छ और बाँझ खारा के साथ उन्हें कुल्ला.
- दाखिल करने से पहले, दोष में आतंच गोंद का 20 μl भरने और दोष के तल पर उन्हें समान रूप से वितरित.
- तब थक्के प्रत्यारोपण प्रेस फिट आंकड़ा आठ के आकार का दोष में.
- थक्के के बाद, घिरनी जैसा नाली भीतर पटेला स्थानांतरित करना और एक बार कुछ मोड़ और घुटने खिंचाव.
- पार्श्वतः एक बार फिर से पटेला विस्थापित और फाइब्रिनोजेन सेल के थक्के जगह में अब भी कर रहे हैं की जाँच करें.
- फिर पटेला बदलें और (दोनों absorbable सीवन के साथ एक बटन टांके (4-0 Vicryl) और एक निरंतर त्वचीय सिवनी (4-0 Monocryl) के साथ परतों में घाव बंद होने के साथ आपरेशन खत्मसामग्री).
- अंत में, जल वाष्प को पारगम्य ड्रेसिंग एक स्प्रे के साथ घाव मुहर.
- पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल के लिए, घाव 7 दिनों के लिए दैनिक जाँच की है. खरगोश पोस्ट ऑपरेटिव analgesia Carprofen 4 मिलीग्राम / किलो सुप्रीम कोर्ट हर 24 घंटे (4 दिनों के लिए) और Buprenorphin 0.03 मिलीग्राम / किलो सुप्रीम कोर्ट हर 12 घंटे (2.5 दिनों के लिए) के लिए प्राप्त करते हैं. घुटने की एक स्थिरीकरण (जैसे ड्रेसिंग) आवश्यक नहीं है.
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Representative Results
वर्णित सर्जिकल तकनीक एक कृत्रिम osteochondral दोष में अल्लोजीनिक mesenchymal स्टेम सेल का एक सफल अलगाव और आरोपण परमिट. प्रयोगात्मक सेटअप आसपास के कार्टिलेज में प्रत्यारोपण के एक सफल एकीकरण में हुई.
दोष आसपास उपास्थि की तुलना में समान biomechanical गुणों और इसी तरह के स्थायित्व के साथ मरम्मत ऊतक से भर गया था. आतंच सेल थक्का osteochondral दोष (चित्रा 3) के रूप में एक ही आकार था जो पूर्व drilled छेद के साथ एक बाँझ थाली पर इन विट्रो में तैयार किया गया था. नतीजतन, प्रत्यारोपित आतंच थक्का और समय से पहले अध: पतन या delamination (चित्रा 6) के लिए एक जोखिम कारक होगा जो आसपास उपास्थि के बीच कोई clefts थे. मरम्मत ऊतक का एक बेसल चिकित्सा subchondral हड्डी प्रवेश कर गया था, क्योंकि यह सुनिश्चित किया है, और इस प्रकार एक कर्तन के खिलाफ काम किया था. एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू अल्पावधि आय थामरम्मत ऊतक के fness, जो उस पर एक बढ़ा बोझ और एक संभव समय से पहले अध: पतन से बचने के लिए स्वस्थ आसपास उपास्थि ऊतक से मेल खाना चाहिए. हमारे प्रारंभिक प्रयोगों (नहीं दिखाया डेटा है) में, हम 12 सप्ताह के बाद एक पर्याप्त कठोरता पहले से ही हासिल किया जा सकता था. इसके अलावा, प्रत्यारोपण के एक अक्षुण्ण और सजातीय सतह कतरनी तनाव और संभव प्रत्यारोपण क्षति (चित्रा 6) कम है, जो पाया गया था.
चित्रा 1. Biocoll अलग समाधान का उपयोग PBMCs और MSCs से रक्त कोशिकाओं और प्लाज्मा के पृथक्करण.
चित्रा 2. संस्कृति में 5 दिनों के बाद mesenchymal स्टेम सेल (न्यूजीलैंड व्हाइट खरगोश) की monolayer.
चित्रा 3. पूर्व drilled छेद (3x3.6 मिमी) ऊपर एक एक आतंच सेल थक्का के साथ भरा जा रहा है साथ बाँझ थाली.
4 चित्रा. औसत दर्जे parapatellar संधिकर्तन के बाद संयुक्त घुटने पर खुला.
चित्रा 5. घिरनी जैसा नाली में osteochondral दोष (व्यास, आंकड़ा आठ के आकार में गहरी 3 मिमी, 3 मिमी).
6 चित्रा. घुटने संयुक्त 12 सप्ताह दो drilled osteochondral दोष में दो आतंच सेल के थक्के के आरोपण के बाद खोला गया.
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Discussion
हाल के वर्षों में, जटिल जोड़ osteochondral दोष के इलाज की संभावना है - जैसे osteochondritis dissecans, अस्थिगलन और आघात से उत्पन्न उन के रूप में - ऊतक इंजीनियरिंग दृष्टिकोण के साथ अधिक से अधिक आकर्षक बन गया. जैसा कि पहले उल्लेख वैकृत संस्थाओं में ऊतकों को नुकसान subchondral हड्डी तक फैली हुई है और विभिन्न आंतरिक चिकित्सा क्षमता 1 की विशेषता दो ऊतकों शामिल है. Osteochondral जोड़ क्षति 11,23 के रोगजनक प्रक्रियाओं के लिए subchondral हड्डी की भूमिका में एक बढ़ती रुचि है. जोड़ कार्टिलेज और उसके समर्थन हड्डी के कार्यात्मक शर्तों कस जुड़े हुए हैं. या तो ऊतक की चोट लगने पर प्रतिकूल यांत्रिक पर्यावरण के साथ ही पूरे संयुक्त 24 के homeostatic संतुलन प्रभावित करते हैं. संयुक्त गति के यांत्रिक विघटन, ढीले शरीर गठन शामिल डिब्बे में यांत्रिक पहनते हैं और उदासीनता के माध्यम से osteochondral इकाई में बदलावसतहों विरोध ऑस्टियोआर्थराइटिस 1,11 के एक पहले शुरुआत और विकास के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसलिए, osteochondral दोष के उत्थान के लिए ऊतक इंजीनियरिंग दृष्टिकोण मेजबान ऊतकों 2 आसपास के साथ प्रभावी संघ को बढ़ाने के क्रम में अंतर्निहित subchondral हड्डी की पर्याप्त बहाली के साथ किया जाना चाहिए. Mesenchymal स्टेम सेल osteochondral मरम्मत के इन विशिष्ट आवश्यकताओं को प्रदान करने के लिए एक आदर्श सेल स्रोत होने लगते हैं. प्रोटोकॉल संभावित osteogenic और chondrogenic प्रजातियों में प्रतिरोपित mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के चुनिंदा भेदभाव उत्प्रेरण द्वारा हड्डी और उपास्थि ऊतक बहाली की पदोन्नति पर प्रकाश डाला गया.
Chondrocytes की तुलना में, mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के कई प्रमुख फायदे हैं: वे आसानी से किसी भी अधिक से अधिक दाता पक्ष रुग्णता बिना अस्थि मज्जा, synovialis और वसा ऊतकों से अलग किया जा सकता है. Mesenchymal स्टेम सेल इन विट्रो विस्तार में के दौरान अंतर और नहीं हैइसलिए हो सकता है संस्कृति का विस्तार बड़े जोड़ कार्टिलेज दोष के इलाज के लिए बड़ी संख्या में. इसके अलावा, वे प्रतिरक्षादमनकारी होने लगते हैं और - उचित उत्तेजनाओं के जवाब में - chondrocytes और osteocytes 25,26 में अंतर कर सकते हैं. Mesenchymal स्टेम सेल का एक और उल्लेखनीय लाभ अल्लोजीनिक mesenchymal स्टेम सेल अस्वीकृति प्रतिक्रिया 27 के किसी भी हस्ताक्षर के बिना इस्तेमाल किया जा सकता है, जिसका अर्थ है कि उनके hypoimmunity, प्रदर्शित करता है. इसलिए, एक या दो दाता जानवरों से एक सेल पूल सभी प्रयोगों के लिए पर्याप्त हो सकता है. यह जानवरों के लिए आपरेशन समय और अतिरिक्त नुकसान कम कर देता है.
कई प्रयोगों osteochondral मरम्मत 19,20 के लिए आतंच गोंद का उपयोग आशाजनक परिणाम दिखाया. आमतौर पर, थ्रोम्बिन समाधान के साथ फाइब्रिनोजेन सेल निलंबन का टीका कृत्रिम osteochondral घावों में सीधे, बगल में किया एक प्रक्रिया के रूप में वर्णित किया गया है. कुछ ही मिनटों के बाद पूर्व थक्के के समय (की एक छोटी अवधि के बाद) आपरेशन आमतौर पर पटेला और घाव बंद स्थानांतरित करने से समाप्त हो गया है.
कई पायलट परीक्षण में, हम आतंच सेल निलंबन की पर्याप्त थक्के के लिए यह अधिक से अधिक 60 मिनट लगते हैं पता चला कि सीटू में -. आपरेशन के दौरान - यह पूरी थक्के के लिए अधिक से अधिक 60 मिनट इंतजार करना शायद ही संभव है. इसके अलावा, osteochondral घावों अनुकरण पूर्व drilled छेद के साथ एक बाँझ थाली के उपयोग के द्वारा, यह स्पष्ट रूप से पूरी तरह से दोष को भरने के लिए इस्तेमाल किया गया था जो आतंच गोंद,, की राशि काफी सख्त थक्का के सिकुड़ने के कारण नहीं था कि यह दिखाने के लिए संभव था . इस दोष के एक अनुकूल और पूरी भरने को प्राप्त करने के लिए अग्रिम में आतंच गोंद का एक उच्च मात्रा की आवश्यकता है. इन विट्रो में थक्का की तैयारी प्रदर्शन कर यह आसानी से drilled दोष का उचित आकार के निर्माण के आकार को समायोजित करने और इसलिए, पूरी तरह से और congruently osteochondral दोष भरने के लिए संभव है.
इसके अतिरिक्त, एकएन विट्रो में सेल के थक्के की तैयारी नहीं पूरी तरह से कठोर आतंच सेल निलंबन चिपकने का रिसाव को रोकता है लेकिन (केवल कुछ ही मिनट के बाद). इसलिए, यह शुरू करना मात्रा दोष में रहना होगा कि गारंटी दी जा सकती है और उपास्थि एकीकरण और पुर्ननिर्माण के साथ शुरू हो जाएगा.
वर्णित तकनीक osteochondral मरम्मत के क्षेत्र में प्रयोगात्मक स्टेम सेल अनुसंधान के लिए एक मानकीकृत विधि परमिट. प्रोटोकॉल बाद में खरगोश के पैर के घुटने की osteochondral उपास्थि दोष में उन्हें फिर से समाविष्ट करने के क्रम में mesenchymal स्टेम कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने तरीका प्रदान करता है. ऑटोलॉगस chondrocytes पहले से ही एक आतंच सेल मॉडल 19 में osteochondral दोष में प्रत्यारोपित किया गया है. थक्का तैयारी के साथ ही बजाय chondrocytes की mesenchymal स्टेम कोशिकाओं की इन विट्रो मॉडल में एक का उपयोग remodeling और osteochondral घावों की मरम्मत के लिए एक अधिक लाभदायक और होनहार नए दृष्टिकोण प्रतीत होता है.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
इस परियोजना जर्मन रिसर्च एसोसिएशन (अनुदान महामहिम 4578/3-1) से और आंशिक रूप से FP7 यूरोपीय संघ परियोजना "गाम्बा" NMP3-SL-2010-245993 द्वारा वित्त पोषित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Biochrom AG | F 0415 | |
| FCS | PAN Biotech GmbH | 0401 | |
| Propofol | Fresenius Kabi | ||
| Penicillin/Streptomycin | Biochrom AG | A 2210 | 1,000 units/10 μg/μl in 0.9% NaCl |
| PBS Dulbecco (1X) | Biochrom AG | L1815 | |
| Ethanol (70%) | Merck KGaA | 410230 | |
| Trypan Blue Solution (0.4%) | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Biocoll Separation Sol. | Biochrom AG | L6115 | Isotonic solution Density: 1,077 g/ml |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Invitrogen GmbH | 25300-054 | |
| Fentanyl | DeltaSelectGmBH | 1819340 | |
| NaCl solution (0.9%) | BBraun | 8333A193 | |
| Syringes (Injekt) | BBraun | 4606108V | |
| Needles (Sterican) | BBraun | 4657519 | |
| Forceps (blunt/sharp) | Aesculap | ||
| Scissors | Aesculap | ||
| Scalpels | Feather Safety Razor Co | 02.001.30.022 | |
| Pipettes research | Eppendorf | ||
| Bone Cutter | Aesculap | ||
| Tissue culture dishes 100 mm/150 mm | TPP AG | 93100/93150 | Growth area 60.1 mm2/147.8 mm2 |
| Tissue culture flasks 25/75 mm2 | TPP AG | 90025/90075 | 25 mm2, 75 mm2 |
| Centrifuge Tubes (50 ml) | TPP AG | 91050 | Gamma-sterilized |
| CO2 Incubator | Forma Scientific Inc. | ||
| Cell culture laminar flow hood Hera Safe | Heraeus Instruments | ||
| Sterile saw | Aesculap | ||
| Centrifuge Megafuge 2.0 R | Heraeus Instruments | ||
| Hemocytometer | Brand GmbH+Co KG | 717810 | Neubauer |
| Air operated power drill | Aesculap | ||
| TISSUCOL-Kit 1.0 ml Immuno | Baxter | 2546648 | |
| Fibers (4-0 Monocryl, 4-0 Vicryl) | Ethicon | ||
| Spray dressing (OpSite) | Smith&Nephew | 66004978 | Permeable for water vapor |
References
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