Summary
Tavşan diz eklemi osteokondral defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Osteokondral kusurları içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin implantasyon doku mühendisliği alanında umut verici bir gelişme sağlar. Fibrin pıhtısı hücre hazırlanması
Abstract
Osteokondral eklem kusurları tedavisinde uzun yıllar hekim zor olmuştur. Son yıllarda eklem kıkırdağı ve subkondral kemik etkileşimlerin daha iyi anlaşılması, tüm osteokondral birimin restorasyon daha fazla dikkat yol açtı. Kıkırdak lezyonlarının göre osteokondral defektlerin rejenerasyonu çok daha karmaşık ve çok daha büyük bir cerrahi ve tedavi mücadeledir. Hasarlı doku sadece yüzeysel kıkırdak katmanı aynı zamanda subkondral kemik içermez. Bu osteokondrozis dissekans ile örneğin oluşur gibi derin, osteokondral hasar, kusurun tam kat eklem yüzeyinin 1 geri değiştirilmesi gerekir. Uygun tedavi prosedürleri onların farklı içsel iyileşme potansiyelini 2 ile bu iki farklı doku göz önünde bulundurmanız gerekir. Son yıllarda, çeşitli cerrahi tedavi seçenekleri ortaya çıkmıştır ve zaten klinik olarak 3 kurulmuştur -6.
Otolog veya allojenik osteokondral nakli eklem kıkırdağı ve subkondral kemik oluşur ve tüm osteokondral biriminin değiştirilmesi sağlar. Kusurlar yüzeyi 3,7,8 kaplı bir uyumlu kıkırdak hasarı sağlamak amacıyla silindirik osteokondral greft ile doldurulur. Dezavantajları kullanılabilir greft, donör alan morbiditesi (otolog nakli için) ve yüzeyin uyumsuzluk sınırlı miktarda olan, böylece bu yöntemin uygulama özellikle büyük kusurları için sınırlıdır.
Doku mühendisliği alanında yeni yaklaşımlar rejeneratif osteokondral tedavisi için umut verici olanaklar açtı. Otolog kondrosit implantasyonu tam kat kıkırdak lezyonlarının tedavisi için ilk hücre, biyolojik bir yaklaşım işaretlenmiş ve şu anda dünya çapında hatta 10 ila 20 yıl implantasyon 9,10 sonra iyi klinik sonuçlar ile kurulmuştur. Bununla birlikte, Date, bu tekniğin subkondral kemik 11 ile ilgili bozukluklar gibi derin lezyonlar her türlü tedavisi için uygun değildir.
Sandviç tekniği Doku Mühendisliği 5,6 mevcut yaklaşımlarla kemik grefti birleştirir. Bu kombinasyon tek başına osteokondral greft görülen sınırlamaları aşmak için mümkün gibi görünüyor. Subkondral defekt alanına aşılama otolog kemik sonra, otolog kondrosit ile numaralı seribaşı bir zar üzerinde dikildi ve yaralı site ile greft topoloji maç için kolaylaştırır edilir. Tabii ki, bir önceki kemik rekonstrüksiyonu ek cerrahi zaman ve çoğu zaman da ek bir ameliyat gerekiyor. Ayrıca, bugüne kadar, uzun vadeli veri 12 kayıp.
Aşılama ek kemiksiz Doku Mühendisliği nakledilen hücrelerin kondrojenik ve osteojenik potansiyeli ile yerli eklem kıkırdağının karmaşık yapısı ve özellikleri geri amaçlamaktadır. HoweveR, yine, bu genellikle daha fazla veya daha az yeniden sadece kıkırdak dokudur. Ek osteokondral hasar belirli bir daha başka bakıma gereksinimi. Allojenik / otolog hücreler ile tohumlanmış osteokondral kusurların katmanlı yapısının bir rejenerasyon elde etmek için, üç boyutlu bir doku mühendisliği ürünlerinin iyi bir tekrar üretim kapasitesi 11 sağlayabilir.
Otolog kondrosit yanında, mezenkimal kök hücre (MSC) bir tam kat kıkırdak doku gelişimi için cazip bir alternatif gibi görünüyor. Çok sayıda klinik öncesi in vitro ve in vivo çalışmalarda, mezenkimal kök hücrelerin mükemmel doku rejenerasyonu potansiyel 13,14 göstermiştir. Özellikle osteokondral defektlerin tedavisi için mezenkimal kök hücrelerin önemli avantajı osteosit yanı sıra kondrositte ayırt etme kapasitesine sahip olmasıdır. Bu nedenle, potansiyel olarak d çok katmanlı bir yenilenme sağlaretkileyebilen.
Son yıllarda, osteokondral rejeneratif potansiyeli olan birçok iskeleleri nedenle geliştirilmiştir ve ilk sonuçlar umut verici 1,15-18 ile değerlendirildi. Ayrıca, hücre taşıyıcı olarak fibrin yapıştırıcı deneysel kıkırdak tamir en tercih edilen tekniklerden biri haline gelmiş ve başarılı bir şekilde çeşitli hayvan çalışmalarında 19-21 ve hatta ilk insan çalışmaları 22 kullanılmıştır.
Aşağıdaki protokol hücre kültüründe sonraki yayılması için ve fibrin-hücre pıhtılaşması için in vitro model bir standart hazırlamak için, bir tavşan kemik iliğinden mezenkimal kök hücreleri izole etmek için deneysel bir tekniktir gösterecektir. Son olarak, tavşan diz ekleminin yapay osteokondral zararların içine önceden belirlenmiş bir fibrin pıhtısı hücre implantasyonu için bir yöntem tarif edilecektir.
Protocol
Mezenkimal Kök Hücre İzolasyon için Donör Tavşan A. hazırlanması (Ameliyathane)
- Hücreler erkek 4 aylık yaşta Beyaz Yeni Zelanda (NZW) tavşan ve yaklaşık 3 kg vücut ağırlığı izole edilmiştir.
- Propofol (10 mg / kg vücut ağırlığı dozunda) ile anestezi neden ve sodyum pentobarbital (100 mg / kg vücut ağırlığı dozunda) ile kurban.
- Bir elektrik kesme makinesi ile arka bacaklarda, sırt ve karnından kürk tıraş ve kürk vakum.
- % 70 etanol ile iyice traş alanı dezenfekte edin.
- Doku ve bağ için künt forseps, keskin bir makas (ya da neşter) ve kemik kesiciler kullanın.
- Bacak ve buzağı kafatası yüzeyi boyunca bir kesi yapmak.
- Ya keskin veya künt diseksiyon ile deri ve deri altı doku yansıtmaktadır.
- Ayrı kas ve tibia ve femur gelen bağlar. Temiz bir diseksiyon yapmak mümkün kemiğe yakın kesim tutun. Şu anda tibiadan femur ayırmayın.
- Thr Cutough asetabulum gelen femur başı ayırmak için kalça eklemi.
- Tibia-femur karmaşık yükseltmek.
- Kemiklerden kalan yumuşak doku kazımak veya steril bez doku ile kemik ovmak neşter bıçak kullanın. Bu noktada, uyluk kemiği ve kaval kemiği de bağlanır.
- Kesim tarafından patella çıkarın, sonra nihayet ayrı kemiklere diz eklemi bağ kesti.
- Sprey% 70 etanol ile ayrılan kemik, kuru hava ve hücre kültür ortamı (DMEM +% 1 penisilin / streptomisin (pen / strep)) onları nemli tutmak için olan bir 50 ml'lik santrifüj tüpüne, her kemik yer sağlar.
- Şimdi steril hücre kültürü laminer akış kaputu altında geçiş.
B. (Hücre Kültürü Hood) Kemikler ve Genişleme gelen Tavşan MSC Flushing
- Tüplerinden kemikleri toplayın ve steril forseps kullanarak 150 mm yemekleri içine yerleştirin.
- Her iki kemik yeni 150 mm yemekleri steril bir testere ve hareket parçaları ile biter çıkarın.
- Medi ile 10 ml şırınga doldurunum (DMEM), bir 18 iğne takın ve kemik iliği açılış takın.
- Daha sonra, çanak içine, kemik iliği temizleme ortamı ile ilik boşluğu yıkayın. Mümkünse Daha sonra, diğer ucundan yıkayın. Gerekirse, uçları daha fazla kapalı gördüm. Kemik kırmak olursa, sadece kemik içini durulayın.
- Şırıngaya hücre orta süspansiyonu aspire ve süspansiyon kemik iliği boşluğu ve kemik iliği-pıhtıları görünür başka kemik ile serbest dalgalı kadar arka arkaya kemik iliği durulayın.
- Bir kez kemik iliği iliği kümeleri bir 18 gauge iğne geçerek bozabilir, tüm kemiklerden tahsil edilmiştir: iğne takılı şırınga doldurun ve orta içine zorla.
- Daha sonra, 50 ml'lik bir tüp içine, bir hücre filtresi aracılığıyla süspansiyon filtre. Hücre kaybını önlemek için, 10 ml ortam ile kültür kaplarına 2 x yıkama ve hem de filtre.
- Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 500 x g'de santrifüj süspansiyon.
- Süpernatant ve tekrar süspansiyon hücre pell çıkarınve arkadaşları 10 ml ortam içinde (DMEM +% 1 Pen / Strep).
- Bir Biocoll ayırmak Çözüm kullanarak Periferik kan mononükleer hücreler (hücre) ve mezenkimal kök hücre (MSC) ayrı kan hücreleri.
- Biocoll 15 ml'lik bir tüp içine Çözüm Ayırma 5 ml doldurmak ve dikkatli bir şekilde oda sıcaklığında 20 dakika (frensiz) boyunca 800 xg'de üst ve santrifüj hücre 5 ml süspansiyon, ilave edin.
- PBMC ve mezenkimal kök hücreler arayüzü kalırken Biocoll, altına kırmızı kan hücreleri tortu daha olmak daha yoğun: Olası sonuçlar Şekil 1.
- Dikkatli bir şekilde 15 ml tüp içine arayüzü kaldırmak ve 5 ml PBS ile yıkayın.
- Gibi, adım 22'de tarif edildiği şekilde 5 ml PBS içinde tekrar süspansiyon santrifüj ve 2-3x tekrarlayın.
- Daha sonra, oda sıcaklığında 10 dakika (frenli) için 350 xg'de tekrar santrifüj.
- 10 ml ortamda süspanse edin ve bir hemasitometre hücreleri saymak.
- 150 mm çanağı yaklaşık olarak 5 x 10 6 arasında bir başlangıç ekim yoğunluğu plakası hücreleri.
- 2-3 gün sonra, tekraryapışmayan hücreler hareket eder. Bu hücre enkaz kaldırmak için PBS ilk ile durulayın gerekebilir. Taze tam ortam ekleyin (DMEM +% 10 fetal buzağı serumu (FCS) ve% 1 Pen / Strep), daha sonra.
- Hücreler her 3-4 günde (Şekil 2) besleyin.
- 5-10 gün sonra, ilk kez için geçiş hücreleri.
In vitro olarak fibrin pıhtısı C. Preparasyon
- İmplantasyon yapıldığı gün olarak,% 0.25 tripsin-EDTA, 3 dakika maruz bırakılan şişeler / yemekler yapışan hücreler bırakın. Tam ortam eklenerek tripsinizasyon durdurun.
- 50 ml şahin tüp hücreleri dağıtmak ve PBS ile iki kez yıkayın.
- Tripan mavisi boyama ile hücre canlılığı ve numaraları belirleyin.
- 50,000 hücre / mikrosantrifüj tüpüne ilave edin ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 500 x g'de santrifüj ile pelet toplamak. Gerektiği gibi en az bir pıhtı için bir master hazırlayın.
- 17 ul PBS içinde hücre pelletini ve TISSU arasında fibrinojen bileşeninin 25 ul karıştırınBu 17 ul MSC süspansiyon ile COL-Kit.
- In vivo olarak delik (Şekil 3) 'e göre önceden delinmiş delikleri (3x3.6 mm) steril bir plaka al.
- İlk olarak, 42 ul fibrinojen-hücre süspansiyonu ve iyi tekrar 4 ul trombin çözeltisi ilave edildi ve ardından hemen bir delik içine, 4 ul trombin solüsyonu (500 IU / ml) inoküle. Pipet içinde pıhtılaşma önlemek için süspansiyon karıştırmayın. İlk olarak, pipetlenen fibrinojen-hücre süspansiyonu 50 ul hacim yüzey gerilimine bağlı erime olmadan önceden delinmiş deliklerin ağız çıkıntı yapacaktır. Ancak, tam pıhtılaşma sonra (60 dakika sonra) pıhtı sözleşme ve önceden delinmiş deliğe uyuyor.
- Dikkatli PBS ile bir mikrosantrifüj tüp içine künt forseps ve yer kullanarak pıhtı çıkarın. 2 pıhtıları / hayvan hazırlayın.
- Ameliyat odasına pıhtıları alın.
Fibrin pıhtısı içinde allojenik Mezenkimal Kök Hücre D. implantasyonu
- Propofol iv enjeksiyonu (10 mg / kg vücut ağırlığı) ile tavşan (5-6 aylık NZW, erkek, 3.5-4.0 kg vücut ağırlığı,) ile anestezi neden.
- Bir elektrik kesme makinesi ve vakum kürk ile ameliyat olmak için diz tıraş. Önce adını tüm işlemler ameliyathane steril çevre kirlenmesini önlemek için bir ameliyat hazırlık odası yapılmaktadır.
- Entübasyon sonra, 1.5 mg / kg / dk propofol ve 0.05 mg / kg / dk intravenöz fentanil ile anestezi korumak. Kapnografi, pulse oksimetre ve nabız ile anestezi izleyin.
- Iyice traş diz dezenfekte ve steril bir sargı ile tavşan geri kalanı kapsar.
- Patella palpe ve patella medial bir cilt kesisi gerçekleştirin.
- Steril koşullar altında bir medial parapatellar artrotomi ile diz eklemi açın. Herhangi bir küçük yüzeysel kan damarları kesme kaçının.
- (Şekil 4) yanal patella yerinden.
- Inspe sonraherhangi bir eşlik eden kıkırdak lezyonları veya ortak anomaliler için diz ekleminin ction, bir stop-cihazla steril bir hava çalışma gücü matkap ile troklear oluk iki osteokondral kusurları (3 mm derinliğinde, sekiz şeklinde resim) (çapı 3.6 mm) oluşturmak (Şekil 5).
- Kusurları temiz ve steril serum fizyolojik ile yıkayın.
- Implantasyon öncesinde, kusurları içine fibrin yapıştırıcı 20 ul doldurun ve defekt alt üzerine eşit olarak dağıtın.
- Daha sonra pıhtı implant basın-donatılmış sekiz rakamı şeklindeki kusur içine.
- Pıhtılaşma sonra, troklear oluk içinde patella yerini değiştirmek ve birkaç kez eğilip diz streç.
- Yanal bir kez daha patella yerinden ve fibrinojen-hücre-pıhtı hala yerinde olup olmadığını kontrol edin.
- Tekrar patella değiştirin ve (her ikisi de emilebilir sütür ile tek bir düğmeye sütür (4-0 vicryl) ve sürekli bir cilt sütür (4-0 Monocryl) ile katmanlar halinde yara kapatılması ile işlemi bitirmekmalzeme).
- Son olarak, su buharı geçirgen soyunma bir sprey ile yara mühür.
- Ameliyat sonrası bakım için, yara 7 gün boyunca günde kontrol edilir. Tavşan post-operatif analjezi Carprofen 4 mg / kg sc, her 24 saat (4 gün) ve Buprenorphin 0.03 mg / kg sc, her 12 saat (2.5 gün için) verilir. Diz bir stabilizasyon (örneğin giyinme) gerekli değildir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Açıklanan cerrahi teknik yapay osteokondral defekt içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin başarılı bir izolasyon ve implantasyon izin verir. Deney düzeneği çevre kıkırdak içine implant başarılı bir şekilde entegrasyonu ile sonuçlanmıştır.
Kusur çevreleyen kıkırdak ile karşılaştırıldığında benzer biyomekanik özellikleri ve benzeri dayanıklılık ile tamir dokusu ile doluydu. Fibrin hücreli pıhtı osteokondral lezyon (Şekil 3) ile aynı boyutta sahip önceden delinmiş delikleri, steril bir plaka üzerinde, in vitro olarak hazırlandı. Sonuç olarak, implante fibrin pıhtısı ve erken dejenerasyon veya delaminasyon (Şekil 6) için bir risk faktörü olacaktır çevreleyen kıkırdak arasında yarıklar vardı. Tamir dokusu bir bazal iyileşme subkondral kemik nüfuz çünkü sağlamıştır ve böylece kesme karşı çalıştı. Bir başka önemli yönü stif olduonarım dokusu fness, hangi üzerinde artan yükü ve olası bir erken dejenerasyon önlemek için sağlıklı çevre kıkırdak doku uyumlu olmalıdır. Bizim ön deneyler (veriler gösterilmemiştir), biz 12 hafta sonra yeterli sertlik zaten elde edilebileceğini gösterdi. Ayrıca, nakli bir sağlam ve homojen bir yüzey kayma gerilmesi ve olası implant hasar (Şekil 6) azaltılmış olan, bulundu.
Şekil 1. Biocoll ayırmak Çözüm kullanarak PBMC'leri ve MKH kan hücreleri ve plazma ayrılması.
Şekil 2. Kültür 5 gün sonra mezenkimal kök hücreler (Yeni Zelanda Beyaz tavşan) bir tek tabaka.
Şekil 3,. Önceden delinmiş delikleri (3x3.6 mm) üst bir bir fibrin-hücre pıhtı ile dolu olması ile steril plaka.
Şekil 4. Medial parapatellar artrotomi sonra diz eklemi açıldı.
Şekil 5,. Troklear oluk osteokondral kusurları (çap, sekiz rakamı şeklindeki derin 3 mm, 3 mm).
6 Şekil. Diz eklemi 12 hafta iki delinmiş osteokondral kusurları, iki fibrin-hücre pıhtılaşması implantasyonu sonrası açıldı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Son yıllarda, karmaşık eklem osteokondral kusurları tedavi olasılığı - Bu osteokondritis dissekans, osteonekroz ve travma sonucu gibi - Doku Mühendisliği yaklaşımlar ile daha cazip hale geldi. Daha önce sözü edilen patolojik kişiler olarak, doku hasarı subkondral kemiğe kadar uzanan ve farklı içsel iyileşme kapasiteleri 1 ile karakterize edilen iki doku içerir. Osteokondral eklem hasarı 11,23 patojenik işlemleri için subkondral kemik rolü giderek artan bir ilgi var. Eklem kıkırdağı ve destek kemik fonksiyonel koşulları sıkıca bağlanır. Ya doku yaralanmaları olumsuz mekanik çevre hem de tüm ortak 24 homeostatik dengesini etkiler. Eklem hareket mekanik bozulması, gevşek vücut oluşumu, yer bölmesinde mekanik aşınma ve yıpratma yoluyla osteokondral biriminde değişiklikleryüzeyler karşı osteoartrit 1,11 önceki bir başlangıcı ve gelişmesine neden olabilir. Bu nedenle, osteokondral defektlerin rejenerasyonu için doku mühendisliği yaklaşımları ana dokuları 2 çevre ile etkili sendika geliştirmek için temel subkondral kemik yeterli restorasyon eşlik etmelidir. Mezenkimal kök hücre osteokondral onarım bu özel gereksinimlerini sağlamak için ideal bir hücre kaynağı gibi görünüyor. Protokol potansiyel osteojenik ve kondrojenik soy nakledilen mezenkimal kök hücrelerin seçici farklılaşma uyararak kemik ve kıkırdak doku restorasyon promosyon vurgulamaktadır.
Kondrosit ile karşılaştırıldığında, mezenkimal kök hücrelerin birçok önemli avantajları vardır: kolayca herhangi bir büyük donör yan morbidite olmadan kemik iliği, synovialis ve yağ dokusundan izole edilebilir. Mezenkimal kök hücrelerin in vitro genişleme sırasında ayırt ve yokbu nedenle olabilir kültür-genişletilmiş büyük eklem kıkırdağı kusurları tedavisi için çok sayıda. Ayrıca, immunsupresif gibi görünüyor ve - uygun uyaranlara yanıt olarak - kondrosit ve osteosit 25,26 içine ayırt edebilirsiniz. Mezenkimal kök hücrelerin bir diğer dikkat çekici avantajı allojenik mezenkimal kök hücrelerin ret reaksiyonu 27 herhangi bir işaret olmadan kullanılabilir anlamına gelir kendi hypoimmunity, görüntüler. Bu nedenle, bir ya da iki donör hayvanlardan alınan hücre havuzu, tüm deneyler için yeterli olabilir. Bu hayvanlara çalışma süresi ve ek zarar azaltır.
Çeşitli deneyler osteokondral onarım 19,20 için fibrin yapıştırıcı kullanarak umut verici sonuçlar ortaya koydu. Genellikle, trombin çözeltisi ile fibrinojen-hücre süspansiyonu aşılama yapay osteokondral lezyonlar doğrudan in situ olarak yapılan bir işlem olarak tarif edilmiştir. Bir kaç dakika sonra, pre-pıhtılaşma süresi (kısa bir süre sonra,) Işlem genellikle patella ve yara kapanması taşındıktan tarafından tamamlandı.
Birkaç pilot testlerde, biz fibrin-hücre süspansiyonu yeterli pıhtılaşma için fazla 60 dakika sürer öğrendim Yerinde -. Operasyon sırasında - bu tüm pıhtılaşma için fazla 60 dakika beklemek pek mümkün değildir. Ayrıca, osteokondral lezyonlar taklit ön delikli steril bir plaka kullanılarak, açıkça tamamen kusur doldurmak için kullanılan fibrin yapıştırıcı, miktarı yeterli sertleşme pıhtı daralma nedeniyle olmadığını göstermek mümkün oldu . Bu kusur bir uyumlu ve tam dolum elde etmek için önceden fibrin yapıştırıcı daha yüksek bir ses gerektirir. In vitro pıhtı hazırlanması gerçekleştirme kolayca açılan kusurun uygun bir boyuta yapı şeklini ayarlamak için ve bu yüzden, tamamen ve ýekilde osteokondral kusur doldurmak mümkündür.
Ayrıca,N, in vitro hücre pıhtı hazırlık değil tamamen sertleştirilmiş fibrine hücre süspansiyonu bir yapışkan sızmasını önler ama (sadece bir kaç dakika sonra). Bu nedenle, başlangıçta amaçlanan hacmi kusur kalmak olacağını garanti edilebilir ve kıkırdak entegrasyon ve yeniden başlayacak.
Açıklanan teknik osteokondral onarım alanında deneysel kök hücre araştırmaları için standart bir yöntem sağlar. Protokol daha sonra tavşan diz ekleminin osteokondral kıkırdak defektleri bunları yeniden implant için mezenkimal kök hücreleri izole etmek için bir tekrarlanabilir bir yol sağlar. Otolog kondrosit zaten fibrin-hücre modeli 19 osteokondral kusurları içine implante edilmiştir. Pıhtı hazırlanması hem de yerine kondrositlerin mezenkimal kök hücrelerinin in vitro modeli kullanılarak şekillenmesi ve osteokondral lezyonların onarımı için daha avantajlı ve umut vadeden yeni bir yaklaşım olduğu görülmektedir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Bu proje Alman Araştırma Birliği (hibe HE 4578/3-1) tarafından ve kısmen FP7 AB Projesi "GAMBA" NMP3-SL-2010-245993 tarafından finanse edildi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | Biochrom AG | F 0415 | |
| FCS | PAN Biotech GmbH | 0401 | |
| Propofol | Fresenius Kabi | ||
| Penicillin/Streptomycin | Biochrom AG | A 2210 | 1,000 units/10 μg/μl in 0.9% NaCl |
| PBS Dulbecco (1X) | Biochrom AG | L1815 | |
| Ethanol (70%) | Merck KGaA | 410230 | |
| Trypan Blue Solution (0.4%) | Sigma-Aldrich | T8154 | |
| Biocoll Separation Sol. | Biochrom AG | L6115 | Isotonic solution Density: 1,077 g/ml |
| Trypsin-EDTA 0.05% | Invitrogen GmbH | 25300-054 | |
| Fentanyl | DeltaSelectGmBH | 1819340 | |
| NaCl solution (0.9%) | BBraun | 8333A193 | |
| Syringes (Injekt) | BBraun | 4606108V | |
| Needles (Sterican) | BBraun | 4657519 | |
| Forceps (blunt/sharp) | Aesculap | ||
| Scissors | Aesculap | ||
| Scalpels | Feather Safety Razor Co | 02.001.30.022 | |
| Pipettes research | Eppendorf | ||
| Bone Cutter | Aesculap | ||
| Tissue culture dishes 100 mm/150 mm | TPP AG | 93100/93150 | Growth area 60.1 mm2/147.8 mm2 |
| Tissue culture flasks 25/75 mm2 | TPP AG | 90025/90075 | 25 mm2, 75 mm2 |
| Centrifuge Tubes (50 ml) | TPP AG | 91050 | Gamma-sterilized |
| CO2 Incubator | Forma Scientific Inc. | ||
| Cell culture laminar flow hood Hera Safe | Heraeus Instruments | ||
| Sterile saw | Aesculap | ||
| Centrifuge Megafuge 2.0 R | Heraeus Instruments | ||
| Hemocytometer | Brand GmbH+Co KG | 717810 | Neubauer |
| Air operated power drill | Aesculap | ||
| TISSUCOL-Kit 1.0 ml Immuno | Baxter | 2546648 | |
| Fibers (4-0 Monocryl, 4-0 Vicryl) | Ethicon | ||
| Spray dressing (OpSite) | Smith&Nephew | 66004978 | Permeable for water vapor |
References
- Kon, E., et al. Novel nano-composite multilayered biomaterial for osteochondral regeneration: a pilot clinical trial. The American Journal of Sports Medicine. 39, 1180-1190 (2011).
- Kon, E., et al. Orderly osteochondral regeneration in a sheep model using a novel nano-composite multilayered biomaterial. Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 28, 116-124 (2010).
- Hangody, L., et al. Autologous osteochondral grafting--technique and long-term results. Injury. 39, 32-39 (2008).
- Marcacci, M., et al. Arthroscopic autologous osteochondral grafting for cartilage defects of the knee: prospective study results at a minimum 7-year follow-up. The American Journal of Sports Medicine. 35, 2014-2021 (2007).
- Ochs, B. G., et al. Remodeling of articular cartilage and subchondral bone after bone grafting and matrix-associated autologous chondrocyte implantation for osteochondritis dissecans of the knee. The American Journal of Sports Medicine. 39, 764-773 (2011).
- Aurich, M., et al. Autologous chondrocyte transplantation by the sandwich technique. A salvage procedure for osteochondritis dissecans of the knee. Unfallchirurg. 110, 176-179 (2007).
- Williams, R. J. 3rd, Ranawat, A. S., Potter, H. G., Carter, T., Warren, R. F. Fresh stored allografts for the treatment of osteochondral defects of the knee. The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 89, 718-726 (2007).
- Szerb, I., Hangody, L., Duska, Z., Kaposi, N. P.
- Brittberg, M., et al. Treatment of deep cartilage defects in the knee with autologous chondrocyte transplantation. N. Engl. J. Med. 331, 889-895 (1994).
- Peterson, L., Vasiliadis, H. S., Brittberg, M., Lindahl, A. Autologous chondrocyte implantation: a long-term follow-up. Am. J. Sports Med. 38, 1117-1124 (2010).
- Gomoll, A. H., et al. The subchondral bone in articular cartilage repair: current problems in the surgical management. Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 434-447 (2010).
- Steinhagen, J., et al. Treatment of osteochondritis dissecans of the femoral condyle with autologous bone grafts and matrix-supported autologous chondrocytes. Int. Orthop. 34, 819-825 (2010).
- Guo, X., et al. Repair of large articular cartilage defects with implants of autologous mesenchymal stem cells seeded into beta-tricalcium phosphate in a sheep model. Tissue Eng. 10, 1818-1829 (2004).
- Centeno, C. J., et al. Increased knee cartilage volume in degenerative joint disease using percutaneously implanted, autologous mesenchymal stem cells. Pain Physician. 11, 343-353 (2008).
- Niederauer, G. G., et al. Evaluation of multiphase implants for repair of focal osteochondral defects in goats. Biomaterials. 21, 2561-2574 (2000).
- Nagura, I., et al. Repair of osteochondral defects with a new porous synthetic polymer scaffold. J. Bone. Joint Surg. Br. 89, 258-264 (2007).
- Schlichting, K., et al. Influence of scaffold stiffness on subchondral bone and subsequent cartilage regeneration in an ovine model of osteochondral defect healing. The American Journal of Sports Medicine. 36, 2379-2391 (2008).
- Schagemann, J. C., et al. Cell-laden and cell-free biopolymer hydrogel for the treatment of osteochondral defects in a sheep model. Tissue Engineering. Part A. 15, 75-82 (2009).
- Vogt, S., et al. The influence of the stable expression of BMP2 in fibrin clots on the remodelling and repair of osteochondral defects. Biomaterials. 30, 2385-2392 (2009).
- Schillinger, U., et al. A fibrin glue composition as carrier for nucleic acid vectors. Pharm. Res. 25, 2946-2962 (2008).
- Ahmed, T. A., Giulivi, A., Griffith, M., Hincke, M. Fibrin glues in combination with mesenchymal stem cells to develop a tissue-engineered cartilage substitute. Tissue Engineering. Part A. 17, 323-335 (2011).
- Haleem, A. M., et al. The Clinical Use of Human Culture-Expanded Autologous Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Transplanted on Platelet-Rich Fibrin Glue in the Treatment of Articular Cartilage Defects: A Pilot Study and Preliminary Results. Cartilage. 1, 253-261 (2010).
- Pape, D., Filardo, G., Kon, E., van Dijk, C. N., Madry, H. Disease-specific clinical problems associated with the subchondral bone. Knee Surg Sports Traumatol. Arthrosc. 18, 448-462 (2010).
- Shirazi, R., Shirazi-Adl, A. Computational biomechanics of articular cartilage of human knee joint: effect of osteochondral defects. Journal of Biomechanics. 42, 2458-2465 (2009).
- Jorgensen, C., Gordeladze, J., Noel, D. Tissue Engineering through autologous mesenchymal stem cells. Curr. Opin. Biotechnol. 15, 406-410 (2004).
- Chen, F. H., Tuan, R. S. Mesenchymal stem cells in arthritic diseases. Arthritis Res. Ther. 10, 223 (2008).
- Le Blanc, K., Tammik, C., Rosendahl, K., Zetterberg, E., Ringden, O. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells. Exp. Hematol. 31, 890-896 (2003).
