Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

Молекулярная Считывание Долгосрочные обонятельной адаптации в doi: 10.3791/4443 Published: December 22, 2012

Summary

Здесь мы опишем молекулярного считывания долгосрочных обонятельной адаптации в

Abstract

Во время стимуляции наиболее устойчивых сенсорных нейронов будет адаптировать свой ответ к снижению их чувствительности к сигналу. Адаптацией ответ помогает форма внимание, а также защищает клетки от чрезмерной стимуляции. Адаптация в обонятельной схемы C. Элеганс был впервые описан Кольбер и Баргмана 1,2. Здесь авторы заданных параметров обонятельной парадигмы адаптации, который они использовали для разработки генетических экрана, чтобы изолировать мутантов дефектные в их способности адаптироваться к летучие запахи воспринимаются амфидов крыла клетки типа С (AWC) сенсорных нейронов. Когда дикого типа C. Элеганс животные подвергаются воздействию привлекательной AWC-почувствовали запах 3 в течение 30 минут они будут адаптировать свои реакции на запах и будет игнорировать адаптации запах в хемотаксиса поведенческого анализа для ~ 1 час. Когда дикого типа C. Элеганс животные подвергаются воздействию привлекательной AWC-почувствовали запах в течение ~ 1 час затем они будут игнорировать адаптации запах в переменного токаhemotaxis поведенческого анализа для ~ 3 часа. Эти две фазы обонятельной адаптации в C. Элеганс были описаны как краткосрочные обонятельной адаптации (индуцированные после 30 мин воздействия запаха), и долгосрочные обонятельной адаптации (индуцированные после 60 мин воздействия запаха). Позже работать с L'Etoile и соавт., 4 раскрыли протеинкиназы G (PKG) называется EGL-4, что необходимо как для краткосрочного и долгосрочного обонятельной адаптации в AWC нейронов. EGL-4 белок содержит последовательность ядерной локализации, что необходимо для долгосрочного обонятельные ответы адаптации, но необязательны для краткосрочных обонятельные адаптационных мер в AWC 4. По теги EGL-4 с зеленого флуоресцентного белка, можно было визуализировать локализацию EGL-4 в AWC при длительном воздействии запаха. С помощью этого полнофункционального GFP с метками EGL-4 (GFP :: EGL-4) молекулы мы смогли разработать молекулярные считывания долгосрочных обонятельной адаптации в AWC 5. Используя эту мolecular считывания обонятельной адаптации мы были в состоянии выполнять как прямой и обратный генетический экраны для идентификации мутантных животных, которые проявляют дефектных моделей субклеточном локализации GFP :: EGL-4 в AWC 6,7. Здесь мы опишем: 1) строительство GFP :: EGL-4 выразив животных; 2) протокол для выращивания животных для долгосрочного запаха вызванного ядерной транслокации анализов и 3) на счет в долгосрочной запаха вызванного ядерном событии перемещения и восстановления (повторной сенсибилизации) от ядерных GFP :: EGL-4 состояние.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Строительство GFP меткой EGL-4 выражая Животные

  1. Клонирование поступательного слияния GFP :: EGL-4 под промотор для УСО-3 гена (использование 2678 б.п. непосредственно перед стартовым кодоном): (р) УСО-3 :: GFP :: EGL-4. УСО-3 диски промоутер выражение в амфидов пары нейронов: AWA, AWB; AWC, а слабо в ASH.
  2. Вводят плазмиды (р) УСО-3 :: GFP :: EGL-4 в дикого типа (N2) животных на 50 нг / мкл при содействии инъекций маркеров с использованием стандартных зародышевой линии преобразование методов 8: (р) ФОМ-1: : GFP 9 (25 нг / мкл) и (р) УСО-1 :: DsRed 10 (25 нг / мкл). УСО-1 промоутер дисков выражение в AWC и AWB амфидов нейронных пар, а ФОМ-1 промоутер дисков выражение в целомоциты.
  3. Подвергать трансгенных животных, выражающие внехромосомных массивы, описанному в шаге от 1,2 до ультрафиолетового (УФ) / trimethylpsoralen (TMP) интеграция протокола11.
  4. Bleach синхронизировать животных 12 и культивировать их на нематода роста Media (НГО) пластины, содержащие OP50 Е. палочки для L4 этапе. Вымойте L4 животных с NGM пластин с M9 буфером для удаления OP50 Е. бактерии кишечной палочки.
  5. Удалить M9 буфера и добавить 50-100 мкл 30 мкг / мл рабочего раствора TMP на червя гранул в 1,5 трубку микроцентрифужных мл. Оберните 1,5 мл микроцентрифужных трубки в фольгу, чтобы блокировать окружающего света, и агитировать мягко ротатора в течение 15 минут в фольге пленку 1,5 трубку микроцентрифужных мл. Передача червей в TMP / Червь решение в значительной unseeded пластины NGM.
  6. Expose червей на NGM пластины УФ-350 мкдж (X100) с помощью Stratalinker 2400. Затем добавить червей OP50 содержащие NGM пластины и инкубировать в темноте в течение 5 часов.
  7. Возьмите 50 трансгенных червей примерно 10 посеяны пластин (2-5 червей каждую пластину). Передача P0 в Нью-пластин каждые 24 ч в течение 3 дней.
  8. Возьмите 250 клонального F1nimals (1 животное на пластину). Клон из 2-4 F2 животных из каждой F1 пластины. Проверьте F3 животных, чтобы искать 100% линии, глядя на (р) ФОМ-1 :: GFP экспрессии под рассекает флуоресцентного микроскопа.
  9. Скрещивание итоговой комплексной линии (ы) с животными дикого типа N2 5 раз. Мы будем ссылаться на итоговой комплексной линии pyIs500, и GFP с метками EGL-4 молекулы GFP :: EGL-4.

2. Выращивание и содержание животных ядерной Анализы транслокации

  1. Развивайте pyIs500 животных при 25 ° C на стандартных 10 см пластинах NGM (см. ниже рецепт) посеян с OP50 Е. бактерии кишечной палочки 13 (рис. 1).
  2. 1-й день, подобрать 4:56 L4 pyIs500 животных из пластин культивировали при 25 ° C на пять отдельных 10 см OP50 Е. палочки высевают пластины и инкубировать при 25 ° C (то есть, 4-5 L4 животных на пластину).
  3. На 4-й день, мыть взрослых рopulations из pyIs500 животных от больших пластин NGM использованием S-базальных буфера (см. ниже рецепт). Используйте одноразовые пипетки стеклянные для передачи животных, так как они будут держаться в стороне пластиковые наконечники.

3. Долгосрочные Запах индуцированные ядерной Анализы транслокации

  1. Вымойте pyIs500 животных 3 раза в S-базальной, чтобы удалить бактерии. Не центрифугировать животных между промывками, а скорее позволяют животным поселиться под действием силы тяжести в стационарных 1,5 трубку микроцентрифужных мл. Очень важно, чтобы убедиться, что все бактерии удаляются, и что NGM паштеты свободны от загрязнения, а остаточные бактерии отрицательно скажется на результатах анализа транслокации. Кроме того, мы обнаружили, что автоклавирования пробирки на 1,5 мл микроцентрифужных производит "липкие" собственность на внутренних стенках труб, что приводит животных придерживаться сторон, и поэтому используйте неавтоклавного пробирки на 1,5 мл микроцентрифуге.
  2. В то время как животные урегулирования между мойками, составляющих тОн адаптации решения. Добавить 100 мл S-базальных буфер на 100 цилиндр окончания мл. Добавить адаптации запах S-базальных и запечатать цилиндр, используя полосу Parafilm. При выполнении бензальдегида адаптации добавить 7,5 мкл бензальдегида в 100 мл S-базальной, для бутанон адаптации добавить 11 мкл 2-butaone до 100 мл S-Базальные. Аккуратно перевернуть (не встряхивать) выпускников цилиндр, содержащий S-базальной и запахов в 30 раз для создания однородной эмульсии.
  3. После последней промывки в S-базальной, позволяют животным поселиться и удалить все жидкости. Этикетка одна трубка "+ нас" или "адаптироваться", а другой трубе "-ве" или "unadapt". Затем добавить 1 мл смеси адаптации к трубе адаптации микроцентрифужных (+ VE), и добавьте 1 мл S-базальных на неприспособленных трубки микроцентрифужных контроля (-ве). Старайтесь, чтобы количество животных между 100 и 200 в каждой пробирке. С некоторой практики, это можно оценить примерное количество животных в гранулах на глаз.
  4. Поместите 1,5 мл микроцентрифужных трубку крышки протектораВ каждую пробирку (предотвращает крышки от появляться открытые) и поместите труб на ротатор в течение 80 мин. Мы обнаружили, что запах экспозиции от 60 мин и 80 мин дает аналогичные результаты (как результат в долгосрочной ответы адаптации). Тем не менее, 80 мин экспозиции обеспечивает более стабильные результаты в наших руках. Таким образом, все наши долгосрочные анализы адаптации стандартизированы с помощью 80 Выдержка запах мин (рис. 2).
  5. После 80 мин, мытье животных 3 раза в S-базальной. Разрешить животных разрешить путем притяжения между каждой стирки.

4. Краткосрочные Запах вызванной ядерным Анализы транслокации

  1. В случае краткосрочного запах адаптации, использовать тот же протокол, в долгосрочной запах вызванной транслокацией анализы (Шаги 3.1-3.4), однако вместо инкубации pyIs500 животных в адаптации запаха в течение 80 мин, использовать 30 мин экспозиции . Количественной оценки запаха вызванного ядерной транслокации анализов приведены ниже (шаг 5) является одинаковой для долгосрочных и краткосрочных терм экспозиции.

5. Скоринг Запах вызванной ядерным событий транслокации

  1. Сделайте 2% агарозном колодки, содержащего 5 мМ азида натрия (NaN 3) путем растворения гель-электрофореза в агарозном в дН 2 0. Поместите одну каплю расплавленного агарозном содержащие NaN 3 на предметное стекло стекло. Немедленно поместите другое предметное стекло микроскопа на первом слайде, чтобы сгладить падение расплавленной агарозы. Оставьте на 30 секунд, а затем аккуратно дразнят друг от друга микроскопа скользит, оставляя одну стекло микроскопа с плоской площадке агарозном ~ 1 мм.
  2. После последней промывки в S-базальной, позволяют червям поселиться в 1,5 мл трубки микроцентрифужных и удалить все жидкости. Затем добавьте животных каплям на колодки агарозы из нескольких слайдов микроскопа. Это важно, чтобы количество животных на слайд, чтобы между 50 и 100. Слишком много животных на слайде усложнит скоринга и часто создают рассеивающий свет после синего света возбуждения. Избыток жидкости можетбыть злым из агарозы площадку с помощью небольшого Ким-салфетки. Поместите 0,5 мм, стеклянная крышка скольжения на площадку и дать постоять в течение 2 мин, чтобы обеспечить NaN 3 для иммобилизации животных. Обратите внимание, что животные могут быть взысканы с горки после выигрыша. Животные оправиться от NaN 3 анестетика после ~ 1 час, если передается к тарелке семенами NGM в каплю буфера M9.
  3. На этом этапе крайне важно, чтобы каждый экспериментатор разработать ключевые для отслеживания слайд экспериментальные (+ VE) слайд и слайд которое является контроль (-ве) слайд, и передать слайды в другое лицо, которое будет слепо забить GFP: EGL-4 локализации в клетке. Это позволит контролировать любой экспериментатор предвзятости.
  4. Оценка от 50 до 100 животных в слайд, используя вертикальное флуоресцентный микроскоп с 10X, 40X и 63x увеличением цели и GFP / RFP фильтры. Во-первых, найдите животных под 10-кратным увеличением использования светлого поля освещения. Во-вторых, найдите AWC нейронов, выключив BrighТ-поле освещения и использования ППП фильтр. (Р) УСО-1 :: DsRed дисков выражение в AWB и AWC нейронов. AWC нейроны имеют отличительные овальной формы тела клетки по сравнению с AWB клетки органов, которые имеют меньшие размеры и круглую форму (рис. 2).
  5. После AWC тела клетки были расположены, переключитесь на GFP фильтра и записывать локализация GFP: EGL-4, ядерных или цитоплазматических. Использование счетчиков позволяет экспериментатору продолжать смотреть в окуляр в то время как забил слайд. Примечание: Шаги 5.1-5.5 повторяется по крайней мере 3 раза в разные дни для получения статистически значимых данных (рис. 1-2).

6. Мониторинг GFP с метками EGL-4 во время восстановления от долгосрочной запах Адаптация

  1. После шаг 3,5, делит население pyIs500 животных в нескольких аликвоты и оценка ядерных против цитоплазматических GFP :: EGL-4 в AWC во время нулевой точки (то есть после 80 минут воздействия) и тultiple последующие моменты времени (рис. 3).
  2. Передача и управление (-ве) и экспериментальной (+ VE) животных, используя одноразовые пипетки стекла на NGM пластин.
  3. Разрешить животных для восстановления для различных промежутков времени и пересмотреть локализация GFP :: EGL-AWC 4 дюйма в каждый момент времени, как в шагах от 5,1 до 5,5.

7. Материалы

NGM пластин: на 1 л добавить в 1 л DDH 2 0: 21 г Bacto-агар, 3 г хлористого натрия (NaCl), 2,5 г Бакто-пептон. Автоклав Media. После автоклавирования, прохладно агар, пока температура не читает 54 ° C. Добавьте следующие решения: 25 мл 1М буфера фосфата калия, 1 мл 1 М сульфата магния (MgSO 4), 1 мл 1 М хлорида кальция (CaCl 2); 1 мл холестерина в этаноле (5 мг / мл акций).

1 M Двухосновный К 2 НРО 4 174,2 г / моль: на 500 мл: в 400 мл DDH 2 O, растворить 87,1 г DibasiС К 2 НРО 4. Регулировка громкости в 500 л с DDH 2 O. Фильтр стерилизовать используя 500 мл стерильного фильтра.

1 M одноосновных KH 2 PO 4 136,1 г / моль: на 1 л: в 800 мл DDH 2 O, растворить 136,1 г одноосновных KH 2 PO 4. Регулировка громкости до 1 л DDH 2 O. Фильтр стерилизовать используя 500 мл стерильного фильтра.

1 М фосфат калия (K 3 PO 4) 6.0 Буфер рН: на 1 л: в 1 л Стерильный фильтр, добавить 868 мл 1 М одноосновных KH 2 PO 4. Разрешить устройство для фильтрации через, затем добавьте 132 мл 1 М Двухосновный К 2 НРО 4. Разрешить устройство для фильтрации всех жидкостью. Удалите фильтр и отрегулировать рН до 6,0. Хранить при комнатной температуре.

S-базальная: на 1 л: добавить 50 мл 1М K 3 PO 4 буфера, рН ~ 6,0 и 20 мл 5 М NaCl водн. Заполнить до 1 лDDH 2 O. Автоклав решение.

M9: на 1 л: 3 г KH 2 PO 4, 6 г Na 2 HPO 4, 5 г NaCl, 1 мл 1 М MgSO 4, H 2 O. Заполнить до 1 л DDH 2 0. Стерилизовать автоклавированием.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Например локализации картины GFP :: EGL-4in AWC до и после длительного воздействия запаха показано на рисунке 2. До длительном воздействии запаха, GFP :: EGL-4 локализуется в цитозоле AWC (рис. 2В), и после 80 минут воздействия запаха GFP :: EGL-4 локализуется в ядре AWC (рис. 2D). На поведенческом уровне, животные с цитозольного GFP :: EGL-4 в AWC привлечены к точечным источником запаха (рис. 2 графы представитель результаты анализов хемотаксиса неадаптированных животных - обратите внимание на индекс хемотаксис 3 близка к 1). Животные, демонстрирующие ядерной GFP :: EGL-4 в AWC не привлекают точечного источника адаптации запах (графики рис 2E представитель результаты анализов хемотаксиса адаптированных животных, - отмечают хемотаксис индекс близок к нулю). Для получения статистически значимых данных от постороннего запаха вызванного ядерными анализы транслокации,Эксперименты должны быть запущены по крайней мере, в 3 раза и на отдельные дни. Для подробного описания анализе хемотаксиса может быть полезно обратиться к Юпитеру статье 2490 14.

После EGL-4 входит в ядро AWC нейронов вызывает стабильные и длительные изменения в физиологии AWC, которые сохраняются даже тогда, когда EGL-4 уже не в ядре (рис. 3). После 80 мин экспозиции животных запах будет игнорировать точечного источника адаптации запаха (рис. 3 верхняя панель, небольшой бар на левом), и эта адаптация будет сохраняться даже после 120 мин восстановления (рис. 3 верхняя панель, светло-бар справа). Через 80 мин после воздействия запаха GFP: EGL-4 наблюдается в ядре AWC (рис. 3 нижняя панель, светло-бар слева). Это ядерное вступления является необходимым и достаточным, чтобы вызвать долгосрочные адаптации в AWC 5. После 120 мин восстановления, эти животные не обладают ядерным GFP :: EGL-4 (рисунок 3 нижняя панель, светло-бар справа) еще будет по-прежнему игнорировать точечного источника адаптации запах бензальдегида на поведенческом уровне.

Рисунок 1
Рисунок 1. Обзор протокола для долгосрочного запаха вызванного ядерными анализы транслокации. Во-первых, животные выражения GFP :: EGL-4 (pyIs500 животных) выращивают при температуре 25 ° C на пластинах NGM высевают с OP50 Е. палочки. Во-вторых, животные подвергаются воздействию смеси запахов адаптации (экспериментальная группа) или S-базальных буфера (группа контроля). В-третьих, животных, забитых слепо путем подсчета количества животных выставке ядерной GFP :: EGL-4 в AWC и количество животных выставке цитоплазматических GFP :: EGL-4 в AWC.

Рисунок 2
Рисунок 2. и соавт. 6 Рисунок 2B. До длительном воздействии запаха, GFP :: EGL-4 локализуется в цитозоле AWC. Рисунок 2С. На поведенческом уровне, животные с цитозольного GFP :: EGL-4 в AWC привлечены к точке кислыйCE запаха. Этот график был сформирован из представителей результатов анализов хемотаксиса неадаптированных животных. Обратите внимание на индекс хемотаксис близка к 1. Рис 2D. После 80 мин воздействия запаха GFP :: EGL-4 локализуется в ядре AWC. Рис. 2E. Животных выставке ядерной GFP :: EGL-4 в AWC не привлекает для точечного источника адаптации запах. Этот график был сформирован из представителей результатов анализов хемотаксиса адаптированных животных. Обратите внимание на индекс хемотаксис близка к нулю.

Рисунок 3
Рисунок 3. Когда EGL-4 входит в ядро AWC нейронов вызывает стабильные и длительные изменения в физиологии AWC, которые сохраняются даже тогда, когда EGL-4 уже не в ядре. Животных, подвергшихся воздействию запахов (80 мин) могут оправиться от долгосрочного воздействия запахов и забил за цитоплазматических по сравнению с ядернымлокализация GFP :: EGL-4. (Верхняя панель) после 120 мин восстановлению животных, которые подвергались воздействию запаха в течение 80 мин по-прежнему адаптирована на поведенческом уровне. (Нижняя панель) после 120 мин восстановлению животных, которые подвергались воздействию запаха в течение 80 мин не обладают ядерным GFP :: EGL-4. Таким образом, ядерная EGL-4 вызывает стабильные долгосрочные изменения в физиологии AWC, которые сохраняются после EGL-4 уже не в ядре. Рисунок изменен с разрешения Lee и соавт. 5. Рисунок 3 верхней панели. После 80 мин экспозиции животных запах будет игнорировать точечного источника адаптации запах, и эта адаптация будет сохраняться даже после 120 мин восстановления. Рис. 3 нижней панели. Через 80 минут запах GFP воздействия :: EGL-4 наблюдается в ядре AWC. Это ядерное вступления является необходимым и достаточным, чтобы вызвать долгосрочные адаптации в AWC. После 120 мин восстановления, эти животные не обладают ядерным GFP :: EGL-4 еще будет по-прежнему игнорировать точку суRCE на адаптацию запах бензальдегида на поведенческом уровне.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Запах вызванной ядерным вступления GFP с метками EGL-4 молекулы описано здесь обеспечивает надежную молекулярного считывания обонятельной адаптации в C. Элеганс. Запах вызванной ядерным анализы транслокации просты и требуют лишь несколько дней на подготовку. PyIs500 животное, которое мы построили для этих анализов, выражает маркер, который освещает AWC нейронов, а также выразил GFP с метками EGL-4 белка. Таким образом, мы считаем, что экспериментатор с практически никакого опыта работы с этим классом нейрон может очень быстро (возможно, после изучения нескольких десятков животных) начинают чувствовать себя комфортно определения правильного клетку и очки для ядерной против цитоплазматических EGL-4. Это может быть полезно для читателя, чтобы обратиться к Юпитеру статье 835, описывающей GFP анализа в C. Элеганс 15.

Чтобы убедиться, что данные, полученные самого высокого качества, мы предлагаем следующие рекомендации:1) все скоринга должно быть сделано слепо, 2) культивирование пластины, содержащие никаких следов загрязнения (грибковой или бактериальной) не может быть использована, 3) червей, которые опытные голода во время культивации не должна использоваться и 4) адаптация смеси должны быть приготовлены на В день эксперимента.

Все сенсорные системы демонстрируют примеры пластичность нейронов. Передача сигналов в ядре высоко консервативные особенности устойчивых форм пластичность нейронов 16. К разработке молекулярного считывания обонятельные пластичность, которая представляет ядерная транслокация PKG в стимулировали нейроны, мы предоставляем платформу для быстрого и подробного вскрытия пластичность нейронов в модели в естественных условиях. Используя наш молекулярный считывания обонятельной адаптации мы начали описывать некоторые события, которые формируют обонятельные адаптации в C. Элеганс 5,6,7. Однако, это только начало, и изучая этот процесс как функцияGE, пола, инфекция или диета, мы можем раскрыть важные темы пластичность нейронов в цепи и системы уровня.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Мы хотели бы поблагодарить Скотта Хэмилтона, и члены лаборатории O'Halloran за внимательное чтение этой рукописи. Мы также благодарим нашего анонимного рецензента за отличные предложения и проницательными комментариями.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bacto Agar Difco DF0140-07-4 NGM plates
Sodium Chloride Fisher Chemical S671-10 NGM plates
Bacto Peptone Difco DF0118-07-2 NGM plates
Potassium Phosphate Dibasic Fisher Chemical S375-500 S-Basal buffer and NGM plates
Potassium Phosphate Monobasic Fisher Chemical P285-500 S-Basal buffer and NGM plates
Kimwipes - Small Kimberly-Clark LS2770
Ethanol 100% Gold Shield Chemical Co. 43196-115 diluting odors for chemotaxis assays
Calcium Chloride Sigma-Aldrich C8106-500G NGM plates
Magnesium Sulphate MP Biomedicals 150136-500G NGM plates
Sodium Azide 99% Fisher Scientific ICN10289180 Anesthetic
Agarose - UltraPure Invitrogen 16500-500 Agarose pads
Benzaldehyde Sigma-Aldrich B1334-100G AWC odor
Butanone, ACS Grade Sigma-Aldrich 360473-500ML AWC odor
Microcentrifuge Tubes - 1.5 ml Colored Denville LS8147
Pasteur Pipet Disposable Glass 5-3/4" Fisher Scientific 13-678-20B
Stratalinker Stratagene Stratalinker 2400 UV integration
Filter Vacuum Bottle - 500 ml Nalgene 09-740-25B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Odorant-specific adaptation pathways generate olfactory plasticity in C. elegans. Neuron. 14, (4), 803 (1995).
  2. Colbert, H. A., Bargmann, C. I. Environmental signals modulate olfactory acuity, discrimination, and memory in Caenorhabditis elegans. Learning and Memory. 4, (2), 179 (1997).
  3. Bargmann, C. I., et al. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction in C. elegans. Neuron. 74, (3), 515 (1993).
  4. L'Etoile, N. D., et al. The cyclic GMP-dependent protein kinase EGL-4 regulates olfactory adaptation in C. elegans. Neuron. 36, 1079-10 (2002).
  5. Lee, J. I., et al. Nuclear entry of a cGMP-dependent kinase converts transient into long-lasting olfactory adaptation. PNAS. 107, (13), 6016 (2010).
  6. O'Halloran, D. M., et al. Regulators of AWC-mediated olfactory plasticity in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5, (12), e1000761 (2009).
  7. O'Halloran, D. M., et al. Changes in cGMP levels affect the localization of EGL-4 in AWC in Caenorhabditis elegans. PLoS ONE. 7, (2), e31614 (2012).
  8. Mello, C. C., et al. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO Journal. 10, 3959-39 (1991).
  9. Miyabayashi, T., et al. Expression and function of members of a divergent nuclear receptor family in Caenorhabditis elegans. Dev. Biol. 215, 314 (1999).
  10. L'Etoile, N. D., Bargmann, C. I. Olfaction and odor discrimination are mediated by the C. elegans guanylyl cyclase ODR-1. Neuron. 25, (3), 575 (2000).
  11. Mello, C., Fire, A. DNA transformation. Methods Cell Biol. 48, 451 (1995).
  12. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. Wormbook. (2006).
  13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, (1), 71 (1974).
  14. Kauffman, A., Parsons, L., Stein, G., Wills, A., Kaletsky, R., Murphy, C. C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays. J. Vis. Exp. (49), e2490 (2011).
  15. Berkowitz, L. A., Hamamichi, S., Knight, A. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. Application of a C. elegans Dopamine Neuron Degeneration Assay for the Validation of Potential Parkinson's Disease Genes. J. Vis. Exp. (17), e835 (2008).
  16. Pittenger, C., Kandel, E. R. In search of general mechanisms for long-lasting plasticity: Aplysia and the hippocampus. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 358, (1432), 757 (2003).
Молекулярная Считывание Долгосрочные обонятельной адаптации в<em&gt; C. Элеганс</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).More

He, C., Lee, J. I., L'Etoile, N., O'Halloran, D. A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans. J. Vis. Exp. (70), e4443, doi:10.3791/4443 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter