Modulation der hippocampally-abhängige räumliche Arbeitsgedächtnis durch direkte intrahippocampal Mikroinjektion, begleitet und gefolgt von<em> In vivo</em> Mikrodialyse für Metaboliten in der bewussten, sich verhaltenden Tier.
Glukosestoffwechsel ist ein nützlicher Marker für die lokale neuronale Aktivität, die die Grundlage von Methoden wie 2-Desoxyglucose und funktionelle Kernspintomographie. Allerdings solcher Methoden in Tiermodellen erfordert die Verwendung Anästhesie und damit sowohl verändert das Gehirn Zustand und verhindert Verhaltensmaßnahmen. Ein alternatives Verfahren ist die Verwendung von in vivo-Mikrodialyse zur kontinuierlichen Messung des Gehirns extrazellulären Flüssigkeit Konzentrationen von Glukose, Laktat, und verwandte Metaboliten an wachen, ungehemmte Tiere. Diese Technik ist besonders nützlich, wenn mit Aufgaben entworfen, um auf spezifische Hirnregionen und / oder akute pharmakologische Manipulation verlassen kombiniert, zum Beispiel, zeigen Hippocampus Messungen während einer räumlichen Arbeitsgedächtnis Aufgabe (spontane Wechsel) ein erfrischendes Bad im extrazellulären Glukose und Lactatanstiegs, die sind suggestive der verstärkten Glykolyse 1,2 und intrahippocampal Verabreichung von Insulin sowohl verbessert das Gedächtnis und erhöht Hippocampus Glykollyse 3. Substanzen wie Insulin kann der Hippocampus über den gleichen Mikrodialysesonde verwendet, um Metaboliten zu messen geliefert werden. Die Verwendung von spontanen Wechsels als Maß der Hippokampus-Funktion ausgelegt ist, jede von confound belastenden Motivatoren (zB Fußschock), Ruhigstellen oder Belohnungen (zB Nahrungsmittel), die alle beide Aufgabenleistung und Metabolismus verändern kann zu vermeiden; diese Aufgabe stellt auch eine Messung der motorischen Aktivität, die Steuerung ermöglicht für unspezifische Effekte der Behandlung. Zusammen ermöglichen diese Verfahren die direkte Messung der neurochemischen und metabolische Variablen Regelverhalten.
Alle Lösungen in Mikrodialyse verwendet sollte sofort filtriert werden vor der Verwendung mit einem 0,2 um Filter. Nach dem Einführen der Sonde in die Führungskanüle, beobachten zu bestätigen, dass Strömung ungehindert und Probensammelvorrichtung auftritt. Wenn der Durchfluss stoppt nach dem Einsetzen ist die wahrscheinlichste Ursache Beschädigung der Sonde Membran durch unzureichende Pflege beim Einsetzen verursacht, und ein frischer Sonde muss ersetzt werden.
Wie oben erwähnt, ein …
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wurde durch die NIH / NIDDK (DK077106 ECM) unterstützt.
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
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CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |