La modulación de hippocampally dependiente de memoria de trabajo espacial mediante microinyección intrahipocampal directo, acompañado y seguido de<em> In vivo</em> Microdiálisis para metabolitos en animales conscientes y se comportan.
Metabolismo de la glucosa es un marcador útil para la actividad neuronal local, formando la base de métodos tales como la resonancia de 2-desoxiglucosa y magnética funcional. Sin embargo, el uso de tales métodos en modelos animales y por lo tanto requiere anestesia tanto altera el estado del cerebro y previene medidas de comportamiento. Un método alternativo es el uso de la microdiálisis in vivo para tomar la medición continua de las concentraciones cerebrales de fluidos extracelulares de los metabolitos de la glucosa, lactato, y similares en animales despiertos, sin restricciones. Esta técnica es especialmente útil cuando se combina con las tareas diseñadas para confiar en regiones específicas del cerebro y / o la manipulación farmacológica aguda, por ejemplo, las mediciones del hipocampo durante una tarea de memoria de trabajo espacial (alternancia espontánea) muestran un descenso de la glucosa extracelular y aumento del lactato que son sugerente de 1,2 glucólisis mejorada, y la administración de insulina intrahipocampal tanto mejora la memoria y aumenta glicol hipocampolisis 3. Sustancias tales como la insulina puede ser entregado a la hipocampo a través de la sonda de microdiálisis mismo que se utiliza para medir metabolitos. El uso de alternancia espontánea como una medida de la función del hipocampo está diseñado para evitar cualquier confundir motivadores de estrés (por ejemplo choque eléctrico), restricción, o recompensas (por ejemplo, alimentos), todos los cuales pueden alterar tanto la ejecución de tareas y el metabolismo; esta tarea también proporciona un medir la actividad motora que permite el control de los efectos no específicos del tratamiento. Combinados, estos métodos permiten la medición directa de las variables neuroquímicos y metabólicos que regulan el comportamiento.
Todas las soluciones utilizadas en la microdiálisis se filtró inmediatamente antes de su uso, usando un filtro de 0,2 micras. Después de la inserción de la sonda dentro de la cánula guía, observar para confirmar que el flujo no está obstruido y recogida de muestras está ocurriendo. Si el flujo se detiene después de la inserción, la causa más probable es el daño a la membrana de la sonda causado por la insuficiente atención en la inserción, y una sonda fresco debe ser sustituido.
<p class="jove_content"…The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue apoyado por el NIH / NIDDK (DK077106 a ECM).
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
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CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |