Hippocampal 인슐린 Microinjection 및<em> 생체에</em공간 메모리 테스트 기간 동안> Microdialysis
Summary
직접 intrahippocampal microinjection에 의해 hippocampally에 의존 공간 작업 기억의 변조는 함께하고 다음<em> 생체 내</em의식 행동 동물 metabolites에> microdialysis.
Abstract
포도당 대사는 2 deoxyglucose 및 기능 자기 공명 영상과 같은 방법의 기초를 형성, 지역 신경 활동에 유용한 표시입니다. 그러나, 동물 모델에서 이러한 방법 중 하나를 사용하십시오 마취가 필요하며 따라서 모두 뇌의 상태를 변경하고 행동 조치를 방지 할 수 있습니다. 다른 방법은 깨어 억제 동물 포도당, 젖산, 관련 metabolites의 뇌 세포 외액 농도의 연속 측정을 할 생체 microdialysis에서의 사용이다. 특정 뇌 영역 및 / 또는 급성 약리 조작에 의존하도록 설계 작업과 결합 할 때이 기술은 특히 유용합니다, 예를 들어, 공간 작업 기억 과제 (자연 교대) 동안 hippocampal 측정은 젖산의 세포 포도당과 상승에서 수영을 표시 강화 작용의 1,2, 그리고 intrahippocampal 인슐린 행정의 암시는 메모리를 향상시키고 hippocampal 글리콜을 증가 모두ysis 3. 이러한 인슐린과 같은 물질 metabolites를 측정하는 데 사용되는 동일한 microdialysis 프로브를 통해 해마에 전달 될 수 있습니다. hippocampal 함수의 조치로 자연 교대의 사용은 작업 성능과 신진 대사를 모두 변경할 수있는 모든있는 스트레스 동기 부여 (예 : footshock), 규제, 또는 보상 (예 : 식품)에서 모든 혼란을 방지하도록 설계되어,이 작업은 또한을 제공합니다 치료의 특이 현상 효과에 대한 제어를 허용하는 모터 활동 측정합니다. 결합,이 방법은 행동을 규제 neurochemical과 신진 대사 변수의 직접 측정을 허용합니다.
Protocol
1. 수술 준비 처리. 동물 (마취에 대한 예를 들어 가장 많이 쥐 또는 마우스, 행동 테스트와 microdialysis 및 조합에 대한 방법은 크게 필요로하는 필수 종의 특정 적응과 일반 하나입니다 있지만은) 적어도 10 분 / 일의 최소 처리됩니다 수술하기 전에 이틀 이요. 광범위한 처리가 가능한 혼란 2,4,5을 피하고 테스트시 강세 상태에서 동물을 떠날 표시되었습니다. 우리는 예를 들?…
Representative Results
쥐가 수술에서 빠르게 회복하고 마취의 30 분 다음에 정지에서, 경고 운동성 및 활성해야합니다. 수술이 정상적으로 수행되고 최소한의 치과 시멘트가 사용되는 경우 캐뉼라 캡의 영향을 최소화해야합니다. 감염의 흔적이 수술 모니터링 중에 발견, 또는 쥐가 실험을 종료 즉시 고통 또는 불편의 흔적을 보여주는 어떠한 방법에 경우,이 매우 드문해야합니다. 이전 테스트에 처리하는 동안, 동물은 …
Discussion
microdialysis에 사용 된 모든 솔루션은 0.2 μm 필터를 사용하여 즉시 사용 전에 필터링해야합니다. 가이드 캐뉼라로 프로브의 삽입 후, 그 흐름이 unimpeded입니다 및 샘플 수집이 발생 확인 관찰합니다. 흐름이 삽입 한 후 중지하면, 가능성이 가장 높은 원인은 삽입에 충분한 치료로 인한 프로브 막에 손상이며, 새로운 프로브 대체해야합니다.
위에서 언급으로,이 방법에 장점이 깨…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH / NIDDK (ECM에 DK077106)에 의해 지원되었다.
Materials
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
|||
| CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
| Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
| Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |
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Cite This Article
McNay, E. C., Sandusky, L. A., Pearson-Leary, J. Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing. J. Vis. Exp. (71), e4451, doi:10.3791/4451 (2013).