Modulatie van hippocampally-afhankelijke ruimtelijk werkgeheugen door middel van directe intrahippocampale micro-injectie, begeleid en gevolgd door<em> In vivo</em> Microdialyse voor metabolieten in bewuste, gedragen dieren.
Glucose metabolisme is een nuttige marker voor lokale neurale activiteit, die de basis vormen van de methoden zoals 2-deoxyglucose en functionele magnetische resonantie beeldvorming. Het gebruik van dergelijke methoden in diermodellen vereist anesthesie en dus zowel verandert de hersenen staat en voorkomt gedragsmaatregelen. Een alternatieve methode is het gebruik van in vivo microdialyse om de continue meting van de hersenen extracellulaire concentraties van glucose, lactaat en verwante metabolieten in wakker ongebreidelde dieren nemen. Deze techniek is bijzonder nuttig in combinatie met taken om zich op specifieke hersengebieden en / of acute farmacologische manipulatie, bijvoorbeeld hippocampus metingen tijdens een ruimtelijk werkgeheugen taak (spontane afwisseling) tonen een dip in extracellulair glucose en lactaat stijging die die wijzen op verhoogde glycolyse 1,2 en intrahippocampale toediening van insuline zowel verbetert het geheugen en verhoogt de hippocampus glycollyse 3. Stoffen zoals insuline kan worden geleverd aan de hippocampus via dezelfde microdialyse probe gebruikt om metabolieten te meten. Het gebruik van spontane afwisseling als maat hippocampus functie is ontworpen om beschamen vermijden stressvolle motivators (bijv. voetschok), fixeren, of beloningen (bijvoorbeeld voeding), die zowel taakuitvoering en metabolisme te veranderen, deze taak ook een meten van motorische activiteit die controle mogelijk maakt voor niet-specifieke effecten van de behandeling. Samen deze methoden tot directe meting van de neurochemische en metabole variabelen regelgedrag.
Alle oplossingen in microdialyse onmiddellijk worden gefilterd voor gebruik met behulp van een 0,2 um filter. Na het inbrengen van de sonde in de geleiding canule in acht om te bevestigen dat stroom wordt gehinderd en monstername plaatsvindt. Als de stroom stopt na het inbrengen, de meest waarschijnlijke oorzaak van schade aan de probe membraan veroorzaakt door onvoldoende zorg bij het insteken, en een nieuwe sonde moet worden vervangen.
Zoals hierboven opgemerkt, is een belangrijk voordeel …
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door de NIH / NIDDK (DK077106 om ECM).
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
|||
CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |