Insulina Microiniezione ippocampale e<em> In vivo</emMicrodialisi> Durante il test di memoria spaziale
Summary
Modulazione di hippocampally-dipendente memoria spaziale di lavoro diretto microiniezione intrahippocampal, accompagnato e seguito da<em> In vivo</emMicrodialisi> per i metaboliti in animali coscienti che si comportano.
Abstract
Il metabolismo del glucosio è un marker utile per la locale attività neurale, che costituiscono la base di metodi come 2-desossiglucosio e la risonanza magnetica funzionale. Tuttavia, l'uso di tali metodi in modelli animali richiede l'anestesia e, quindi, sia altera lo stato del cervello e impedisce misure comportamentali. Un metodo alternativo è l'uso di microdialisi in vivo per prendere la misura continua delle concentrazioni nel liquido extracellulare del cervello di metaboliti del glucosio, lattato, e relativi in Svegliatevi, animali sfrenato. Questa tecnica è particolarmente utile quando combinato con compiti destinate a ricorrere specifiche regioni cerebrali acute e / o manipolazione farmacologica, ad esempio, le misure ippocampali durante un compito di memoria di lavoro spaziale (alternanza spontanea) mostrano un tuffo in glucosio extracellulare e aumento della lattato che sono indicativo di 1,2 glicolisi maggiore, e somministrazione di insulina intrahippocampal sia migliora la memoria e aumenta glicole ippocampalelisi 3. Sostanze come l'insulina può essere consegnato ippocampo tramite la sonda microdialisi stesso utilizzato per misurare metaboliti. L'uso di alternanza spontanea come una misura della funzione ippocampale è stato progettato per evitare di confondere motivatori stressanti (ad esempio footshock), ritenuta, o ricompense alimentari (ad esempio), ciascuno dei quali può alterare sia le prestazioni delle applicazioni e il metabolismo; questa attività fornisce anche un misurare dell'attività motoria che consente il controllo di effetti non specifici del trattamento. Combinati, questi metodi permettono la misurazione diretta delle variabili neurochimiche e metaboliche che regolano il comportamento.
Protocol
Representative Results
Discussion
Tutte le soluzioni utilizzate in microdialisi deve essere filtrata immediatamente prima dell'uso, utilizzando un filtro di 0,2 micron. Dopo l'inserimento della sonda nella cannula guida, osservare per confermare che il flusso è libero e la raccolta del campione è in corso. Se il flusso si interrompe dopo l'inserimento, la causa più probabile è un danno alla membrana della sonda causata da insufficiente attenzione all'inserimento, e una sonda fresca deve essere sostituito.
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Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato dal NIH / NIDDK (DK077106 per ECM).
Materials
The majority of reagents are standard laboratory grade and can be obtained from a supplier of choice. Similarly, equipment such as syringe pumps and tubing can be used from any of several manufacturers. Specific items used here for which details are important include: |
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| CMA 12 microdialysis probes | CMA/ Microdialysis | CMA-12-XXX | These are available in various membrane lengths and cutoffs, indicated by specific codes in the ‘XXX.’ |
| Human insulin (Humulin) | Eli Lilly | N/a | |
| Liquid swivel | Instech | 375/D/22QM | This specific swivel has very low torque and internal volume, as well as a nonreactive quartz lining. |
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