Summary
प्रयोगात्मक डेटा के दृश्य के वैज्ञानिक समुदाय के लिए परिणाम पेश करने में एक प्रमुख तत्व बन गया है. बढ़ रहा भ्रूण का जीना समय चूक रिकॉर्डिंग की पीढ़ी जटिल विकास की प्रक्रिया की बेहतर प्रस्तुति और समझ के लिए योगदान देता है. इस प्रोटोकॉल zebrafish में Kaede प्रोटीन की photoconversion के माध्यम से सेल लेबलिंग के लिए एक कदम दर कदम गाइड है.
Abstract
हड्डीवाला palatogenesis कपाल तंत्रिका शिखा (सीएनसी) कोशिकाओं, अभिसरण और चेहरे prominences का विस्तार, और craniofacial कंकाल की परिपक्वता के प्रवास शामिल है जो एक अत्यधिक नृत्य और जटिल विकास की प्रक्रिया है. Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish लाइन उत्पन्न किया गया था: zebrafish तालू के विशिष्ट क्षेत्रों में एक sox10 को कपाल तंत्रिका शिखा के योगदान का अध्ययन करने के लिए. Sox10 जिससे परंपरागत डाई या रिपोर्टर mRNA इंजेक्शन की तुलना में एक अधिक सटीक प्रक्रिया लेबलिंग सेल बनाने, तंत्रिका शिखा को Kaede संवाददाता प्रोटीन की वंश प्रतिबंध प्रदान करता है. Kaede फोटो एक्टिवेशन के बाद हरे से लाल करने के लिए बदल जाता है और यह संभव ठीक कोशिकाओं का पालन करने के लिए बनाता है एक फोटो परिवर्तनीय प्रोटीन होता है. sox10: Kaede ट्रांसजेनिक लाइन जबड़े तत्वों बनाम दाढ़ की हड्डी को जन्म दे और अम्निओट जीवों को चेहरे prominences की अनुरूपता वर्णन है कि सीएनसी सेल आबादी को चित्रित करने के लिए वंश विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. इस प्रोटोकॉल कदम का वर्णनKaede zebrafish भ्रूण: एक sox10 का जीना समय चूक वीडियो उत्पन्न करने के लिए है. सलाखें प्लेट का विकास एक व्यावहारिक उदाहरण के रूप में काम करेगा. इस प्रोटोकॉल ट्रांसजेनिक zebrafish में किसी भी Kaede या इसी तरह photoconvertible संवाददाता प्रोटीन का एक समय चूक confocal रिकॉर्डिंग बनाने के लिए लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, यह zebrafish म्यूटेंट में craniofacial संरचनाओं के सामान्य ही है, लेकिन यह भी असामान्य नहीं विकास पर कब्जा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Introduction
Orofacial clefts 1/700-1 साथ, सबसे अधिक प्रचलित craniofacial विकृति का प्रतिनिधित्व करते हैं, 000 प्रसव 1 को प्रभावित किया. जल्दी embryological craniofacial विकास के विघटन फांक होंठ और तालु (सीएल / पी) के गठन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. सहलाक्षणिक फांक के लिए कारणों में मोटे तौर पर दिखाया गया है, वहीं orofacial clefting की nonsyndromic रूपों के आनुवंशिक और epigenetic ठिकानों अभी भी 2-4 पर्दाफाश करने की आवश्यकता है. इन विकृतियों के एटियलजि और रोगजनन समझने के क्रम में, यह एक सेलुलर आधार पर craniofacial संरचनाओं के विकास को स्पष्ट करने के लिए आवश्यक है.
सभी हड्डीवाला प्रजातियों में कपाल तंत्रिका शिखा कोशिकाओं (CNCC) orofacial संरचनाओं के गठन के लिए योगदान देगा जो ग्रसनी मेहराब, आबाद करने के लिए पृष्ठीय न्यूरल ट्यूब से विस्थापित. जल्दी embryological तंत्रिका शिखा विकास के विघटन सीएल / पी 5-7 सहित craniofacial विरूपताओं के गठन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.
विज्ञापन मेंzebrafish और स्तनधारी craniofacial विकास (CNCCs मुताबिक़ क्षेत्रों में रहते हैं) के बीच संरचनात्मक समानता के प्रत्यर्पण, जीन विनियामक नेटवर्क अत्यधिक संरक्षित है. यह भी CNCCs zebrafish सीएल / पी. के विकास और आनुवंशिक आधार के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली जीव बनाने, amniote प्रजातियों और zebrafish 8 के बीच एक ही फैशन में विकसित दिखाया गया है कि यह छोटे आकार, तेजी से और पूर्व utero भ्रूण के विकास, और उच्च प्रजनन दर सहित कई फायदे हैं. इसके अलावा, भ्रूण माइक्रोस्कोप 9 के तहत जटिल विकासात्मक घटनाओं का अवलोकन करने के लिए यह उत्तरदायी बनाने, ऑप्टिकली पारदर्शी है. यह प्रवास और कपाल तंत्रिका शिखा कोशिकाओं की भिन्नता के अध्ययन के लिए एक आदर्श पशु मॉडल है.
Kaede ट्रांसजेनिक मॉडल 5: पहले प्रकाशित काम 8, 10, 11, CNCC के प्रवासी पैटर्न पर विस्तार sox10 का उपयोग कर विस्तार से वर्णित किया गया था. Kaede एक फोटो परिवर्तनीय प्रोटीन है कि टीयूफोटो एक्टिवेशन के बाद लाल हरे से RNS और यह संभव ठीक CNCCs का पता लगाने के लिए बनाता है. इस परिवर्तन के दौरान पेप्टाइड रीढ़ रूपांतरण कोशिकाओं को उनके अंतिम गंतव्य से 12 लगाया जा सकता है, जिसका अर्थ है स्थिर है, सुझाव है कि cleaved है. Sox10 के transcriptional नियंत्रण में Kaede के साथ लेबल ट्रांसजेनिक लाइनों amniote तालू और zebrafish की सलाखें प्लेट वाई आकार संलयन सीवन के बीच अनुरूप है ललाटनासास्थिक प्रमुखता (FNP) के साथ और कहा कि द्विपक्षीय दाढ़ prominences (MXP) के विलय से homologously गठन कर रहे हैं कि पता चला प्रजातियों.
अन्य अनुप्रयोगों के अलावा, sox10: Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish मॉडल सामान्य और असामान्य craniofacial संरचनाओं के गठन को दिखाने के लिए विभिन्न विकासात्मक चरणों में zebrafish भ्रूण की वीडियो उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. कोशिकाओं के विशिष्ट समूहों के photoconversion यह संभव उनके विकास को ट्रैक करने के लिए बनाता है. Craniofac के विकास के रहते इमेजिंग बनाने के लिए इस विधि का एक दृष्टिकोण के साथzebrafish में ial संरचनाओं यह आसान नेत्रहीन इस जटिल विकास की प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए कर रही है, शुरू की है.
एक उदाहरण के रूप में Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish: इस प्रोटोकॉल sox10 में सलाखें थाली के सामान्य विकास का उपयोग कर इन वीडियो पैदा करने का अनुभव साझा करने के उद्देश्य से है. इस प्रोटोकॉल आगे zebrafish में कपाल तंत्रिका शिखा कोशिकाओं से व्युत्पन्न किसी भी संरचना का समय चूक वीडियो बनाने के लिए लागू किया जा सकता है.
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Protocol
1. Photoconversion के लिए भ्रूण संग्रह
- शाम को 5 और 18:00 के बीच Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish: sox10 के कम से कम दस जोड़े सेट करें.
- अगली सुबह, डिवाइडर खींच और दोपहर के आसपास अंडे इकट्ठा. पेट्री डिश के लिए स्थानांतरण और 28.5 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में डाल दिया.
- लगभग 24 घंटे के बाद निषेचन में मृत भ्रूण को हटाने के द्वारा पेट्री डिश साफ. प्रकाश क्षेत्र माइक्रोस्कोपी और बढ़ाया हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (EGFP) फिल्टर के साथ किसी भी फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग भ्रूण की 13 विकास मंच की जाँच करें. Kaede इस फिल्टर के माध्यम से दिखाई जाएगी.
- भ्रूण एक अलग पेट्री डिश में 60 HPF स्थानांतरण पाँच चमकीले फ्लोरोसेंट भ्रूण पहुँचने के लिए और यदि आवश्यक हो तो उन्हें dechorionate है.
2. Photoconversion के लिए भ्रूण के बढ़ते
- एक सामान्य फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग भ्रूण माउंट. Confocal खुर्दबीन पर भ्रूण के बढ़ते बेहद चुनौतीपूर्ण है.
- स्टैंड का उपयोगएआरडी E3 पानी या निम्नलिखित नुस्खा उपयोग कर ताजा E3 तैयार:
1x E3L बनाने के लिए निम्नलिखित जोड़ने आसुत जल DH 2 हे की एक प्रति लीटर निम्नलिखित करें:
0.292 ग्राम 5.0 मिमी NaCl
0.013 ग्राम 0.17mM KCl
0.044 ग्राम 0.33mM 2 CaCl (desiccant, 96%, ACS अभिकर्मक)
0.081 जी .33 मिमी MgSO 4 (anhydrated)
वैकल्पिक: एक कवकनाशी और हलचल के रूप में 1X E3 को 0.05% methylene नीले के 200 μl जोड़ें.
मध्यम 1 सप्ताह के लिए कमरे के तापमान पर रहता है. - मानक tricaine का प्रयोग करें या निम्नलिखित नुस्खा उपयोग कर tricaine तैयार:
0.2% की 5 L के लिए निम्नलिखित सामग्री मिश्रण tricaine:
45 मिलीलीटर Tris-सीएल (1M pH9.5)
5 एलएच 2 हे
10 ग्राम tricaine - 46.25 मिलीलीटर E3 के लिए 3.75 मिलीलीटर 0.2% tricaine जोड़कर, 'फिल्म का रस' (50 मिलीलीटर E3, 0.015% tricaine समाधान) तैयार करें.
- एक 50 मिलीलीटर कांच फ्लास्क में 46.35 मिलीग्राम कम पिघलने बिंदु (एलएमपी) agarose के साथ 46.25 मिलीलीटर E3 पानी के मिश्रण से agarose तैयार और microwaving द्वारा ठोस कणों को भंग. फिर जोड़ेंAgarose और उपयोग जब तक 50 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में agarose के साथ ग्लास कुप्पी डालने के लिए 3.73 मिलीलीटर 0.2% tricaine.
3. तैयारी और भ्रूण के बढ़ते
- चैम्बर स्लाइड करने के लिए कदम 1.1.2 और हस्तांतरण भ्रूण में बनाया E3/0.015% tricaine समाधान के साथ भ्रूण anesthetize.
- कागज ऊतक और भ्रूण पर agarose डाल के साथ सभी अतिरिक्त E3 लेना.
- स्थिति भ्रूण पूरी तरह से microloader सुझावों के साथ पृष्ठीय. पूरे भ्रूण agarose के शीर्ष पर नाव, लेकिन पूरे शरीर को नीचे धक्का नहीं करता है सुनिश्चित करें. चेंबर पूरी तरह से तरल पदार्थ से भर जाता है तो जब तक agarose एम्बेडेड भ्रूण से अधिक E3/0.015% tricaine समाधान डालना.
4. Confocal खुर्दबीन पर सॉफ्टवेयर सेटिंग्स का समायोजन
- भ्रूण ध्यान केंद्रित के लिए, 20X हवा immersible उद्देश्य (पिनहोल आकार 20 संख्यात्मक एपर्चर 0.75) का प्रयोग करें. तब माइक्रोस्कोप पर L100 प्रकाश बटन दबाएँ और सॉफ्टवेयर में चैनलों का चयन करें. माउस को देखने ओपन / अधिग्रहण controls/A1settings और CLICConfocal सेटअप बटन k. अगला 'ऑटो' पर क्लिक करें और फिर विंडो बंद करने से पहले निम्न चैनलों का चयन करें:
Ch1: DAPI चैनल 403.4 एनएम (350-410 एनएम के बीच तरंग लंबाई में इस्तेमाल किया जा सकता है)
CH2: 488.0 एनएम
CH3: 561.9 एनएम
5. Photoconversion
- CH1 और 3 को बंद करें और हटाने गूंथ बटन और स्कैनिंग क्लिक करने से पहले Ch2 पर बारी.
- Photoconversion, के लिए ब्याज की कोशिकाओं पर ध्यान दिया जो है 1frame/sec और उच्च वोल्टेज (एचवी) 200 के साथ शुरू करने और फिर फ्रेम / सेकंड में ऊपर जा रहा है और तदनुसार के आसपास 1/32 फ्रेम / सेक और एचवी तक पहुँचने तक एचवी कम करके किया सर्वश्रेष्ठ 100-120, पृष्ठभूमि शोर पर निर्भर करता है.
- भ्रूण ध्यान में है, जब स्क्रीन के ठीक किनारे पर देखने के लिए हरी रिम ले लो और यह photoconversion और माउस के साथ सही क्लिक के लिए ब्याज की क्षेत्र फिट बैठता है तो यह छोटे बनाने. Photoconversion अपरिवर्तनीय है क्योंकि छोटे बेहतर है.
- 200 के लिए 1 और एचवी को फ्रेम / सेक मुड़ें और मारास्कैन. Photoconversion के क्षेत्र के एक में तेजी से बढ़ी छवि अब दिख रहा है.
- Ch1 (403.4 एनएम) पर बदल कर Photoconvert कोशिकाओं. GFP चैनल के माध्यम से देखा के रूप में हरी Kaede लगभग अनुपस्थित है जब तक क्षेत्र के आकार पर निर्भर करता है, कहीं भी 5-60 सेकंड से photoconverting लेजर को बेनकाब.
- हरी Kaede संकेत लगभग अनुपस्थित है, Ch1 बंद कर देते हैं. CH2 और 3 पर मुड़ें. फिर A1 क्षेत्र स्कैन मैदान पर खिड़की पर ठीक क्लिक करें और वांछित कोशिकाओं photoconverted गया है की जाँच करने के लिए 'मूल आकार में वापसी' मारा.
6. एक Z-ढेर बनाना
- मेनू पट्टी में आइकन 'कब्जा जेड श्रृंखला' खोजें और इसे शुरू करने से पहले जेड ढेर के ऊपरी और निचले सीमा तय की. Luts के सेट करें.
7. सॉफ्टवेयर सेटिंग्स समय चूक
- A1Simple जीयूआई बॉक्स पर जाएँ और निम्नलिखित सेटिंग्स टिकटिक:
1/32 फ्रेम / सेक
आकार 1024
औसत 4 या 8X एक पाश में लिया जाना है कि जेड के ढेर की संख्या पर निर्भर करता है - जाने के लिए:देखें / अधिग्रहण नियंत्रण / एनडी अनुक्रम अधिग्रहण और निर्धारित समय सीमा (8 30min), निरंतर क्लिक करें और जेड ढेर पर क्लिक करें. परीक्षण के रूप में पहले सीमा निर्धारित है और फिल्म शुरू करते हैं.
- दिन भर E3/0.015% tricaine समाधान कक्ष स्लाइड जोड़ने रखें. रात में, पूरी तरह से चैम्बर भरें. यही कारण है कि अगली सुबह तक चलेगा.
- अगली सुबह, E3/0.015% tricaine समाधान फिर से भरना और भ्रूण अभी भी जिंदा है या नहीं. प्रतिदीप्ति की हानि मौत इंगित करता है. दिन भर में केवल एक बार और चेक जारी.
- संरचना बनाने समाप्त हो गया है, या भ्रूण की मौत हो गई है, जब फिल्म खत्म.
8. बाद उत्पादन प्रसंस्करण
- उपकरण पट्टी पर 'शो अधिकतम तीव्रता प्रक्षेपण' पर क्लिक करें, तो सही छवि पर क्लिक करें और नया दस्तावेज़ बनाएँ. वीडियो अब सर्वोत्तम संभव गुणवत्ता में दिख रहा है. जरूरत नहीं है कि फ्रेम को हटाने और LUTs समायोजित करने के लिए पर जाओ. अंत में. AVI के रूप में बचाने के लिए. इस प्रारूप के लिए Windows ठीक हो जाएगा. मैक डाउनलोड सॉफ्टवेयर टी के लिएओ. mov या. wmv के साथ परिवर्तित.
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Representative Results
Sox10 में: Kaede ट्रांसजेनिक लाइन, प्रवासी और बाद प्रवासी CNCCs fluorescently हरी लेबल रहे हैं. हरी फ्लोरोसेंट Kaede के साथ लेबल CNCC कोशिकाओं अंतर्जात sox10 mRNA अभिव्यक्ति 5 पुनरावृत्ति.
अन्य अनुप्रयोगों के अलावा, इस पशु मॉडल बेहतर CNCC निर्भर craniofacial संरचनाओं के विकास की कल्पना करने के लिए प्रयोग किया जाता था. विशिष्ट संरचनाओं और भी craniofacial विरूपताओं की वैकृत विकास, विशेष रूप से फांक होंठ और तालु के सामान्य विकास पर कब्जा कर लिया गया है. विभिन्न विकासात्मक समय बिंदुओं पर zebrafish का जीना समय चूक वीडियो की एक श्रृंखला तैयार की गई है.
एक उदाहरण के रूप में, 60 HPF पर भ्रूण बनती trabeculae, सलाखें प्लेट फार्म को मिले हैं, जिस पर एक मंच से चयन किया गया. सलाखें थाली में कोशिकाओं के सबसे पूर्वकाल भाग के लाल लेबलिंग में जिसके परिणामस्वरूप एकतरफा लक्षित photoconversion प्रदर्शन किया गया था. सबसे पहले, सामान्य विस्तार और वें के गठनई सलाखें प्लेट जंगली प्रकार Tuebingen zebrafish (चित्रा 1 और 1 वीडियो देखें) में मनाया गया. सलाखें थाली के सामान्य विकास की समझ के साथ, इस जंगली प्रकार संदर्भ तो सामान्य जीन अभिव्यक्ति परेशान किया गया है जहां भ्रूण में CNCCs के प्रवास तुलना करने के लिए लागू किया गया था.
एक specc1lb morpholino पछाड़ना zebrafish भ्रूण एक प्रतिनिधि उदाहरण के रूप में चुना गया था. SPECC1L दुर्लभ लेकिन गंभीर परोक्ष चेहरे फांक के विकास में फंसा पहला जीन है. सलाखें थाली में द्विपक्षीय चेहरे clefting में zebrafish परिणामों में SPECC1L Homolog specc1lb की morpholino आधारित पछाड़ना. Specc1lb antisense morpholino इंजेक्शन के साथ किया गया था कि 60 HPF भ्रूण में भ्रूण का चयन किया गया और सलाखें प्लेट कोशिकाओं के सबसे पूर्वकाल भाग एकतरफा photoconverted गया था. सलाखें थाली के सामान्य विकास, मंझला सलाखें प्लेट कोशिकाओं के बीच विलय की विफलता के विपरीतऔर पार्श्व सलाखें प्लेट कोशिकाओं मनाया जा सकता है. इस पार्श्व नाक प्रक्रिया और दाढ़ की प्रमुखता के बीच विलय की विफलता (वीडियो 2 देखें) होता है, जहां मानव में ObFC विकास, के रोगजनन जैसा दिखता है.
चित्रा 1. Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish: sox10:. 60 HPF sox10 की Kaede photoconversion ए वेंट्रल देखें. संरचना चित्र में हरी लेबल और इसी असली जीना छवि सलाखें थाली जैसा दिखता है. Confocal खुर्दबीन के नीचे (403.4 एनएम) यूवी प्रकाश के संपर्क के बाद, फ्लोरोसेंट प्रोटीन Kaede हरे से लाल करने के लिए photoconverted है. बी पैनल बी में दिखाया गया है कोशिकाओं का पालन किया जा सकता है photoconverted.
मूवी 1. समय व्यतीत हो वीडियो 60 HPF चरण wildtype Tuebingen zebrafish भ्रूण.सलाखें थाली का सामान्य गठन. उदर देखें. 60-72 HPF शुरू करने के लिए हर 30 मिनट. रिकॉर्ड फिल्म देखने के लिए यहां क्लिक करें .
मूवी 2. समय व्यतीत हो वीडियो 60 HPF चरण specc1lb morpholino इंजेक्शन भ्रूण. मंझला सलाखें प्लेट कोशिकाओं और पार्श्व सलाखें प्लेट कोशिकाओं के बीच विलय की विफलता मनाया जा सकता है. उदर देखें. 60-72 HPF शुरू करने के लिए हर 30 मिनट. रिकॉर्ड फिल्म देखने के लिए यहां क्लिक करें .
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Discussion
यहाँ zebrafish मॉडल में craniofacial विकास के दृश्य के लिए एक नई विधि दिखाया गया है. sox10: Kaede ट्रांसजेनिक zebrafish लाइन सफलतापूर्वक विस्तार से CNCC के प्रवासी पैटर्न का वर्णन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है एक मॉडल जीव 5 के रूप में इस्तेमाल किया जाता है.
पिछले अध्ययनों की कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए इस तरह की आंख के रूप में सकल स्थलों का इस्तेमाल किया है और Kaede mRNA इंजेक्शन, photoconversion assays या photoconversion 10, 11, 14, 15 के लिए बंदी fluorescein dextran पर भरोसा किया है सॉक्स:. 10 Kaede ट्रांसजेनिक लाइन इन की तुलना में कई फायदे हैं तरीकों. तंत्रिका शिखा कोशिकाओं पहले से ही Kaede और एक बहुत विशेष वितरण के अनुरूप के साथ लेबल के साथ, भाग्य मानचित्रण के लिए क्षेत्रों की स्थापना के लिए और अधिक सटीक स्थलों इस्तेमाल किया जा सकता है. , इसके अलावा, होने Kaede प्रोटीन sox10 प्रमोटर के नियंत्रण में endogenously व्यक्त केवल तंत्रिका शिखा कोशिकाओं photoconverted सुनिश्चित करता है कि और कहा कि केवल derivates एक बाद में मंच पर लेबल किया जाएगा डेसंभावित पृष्ठभूमि 5 बढ़ती.
इस तकनीक के साथ, zebrafish में craniofacial संरचना व्युत्पन्न किसी भी तंत्रिका शिखा सेल के गठन को सफलतापूर्वक दिखाया जा सकता है. सामान्य जंगली प्रकार zebrafish भ्रूण का विकास किया जा सकता है और इस जंगली प्रकार संदर्भ सामान्य जीन अभिव्यक्ति परेशान किया गया है जहां भ्रूण की तुलना में किया जा सकता है.
संभावित संशोधनों दृश्य के दौरान भ्रूण को ठीक करने के लिए एक अलग कंटेनर का उपयोग शामिल है. यह एक पेट्री डिश, या किसी भी अन्य पारदर्शी ट्रे हो सकता है.
इमेजिंग सफल नहीं होता है, इस वजह से सॉफ्टवेयर सेटिंग्स में गलतियों की संभावना है. लाइव समय व्यतीत शुरू करने से पहले ध्यान से खुर्दबीन के उपयोगकर्ताओं मैनुअल पढ़ें.
इमेजिंग है, यह भ्रूण की सही विमान पर ध्यान केंद्रित करने और ठीक Z-ढेर सीमा निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण है. इसके अलावा, इस तरह के फ्रेम / सेक, औसत और luts के रूप में छवि गुणवत्ता के मानकों का सबसे अच्छा वा में स्थापित किया जाना हैउच्च गुणवत्ता परिणाम प्राप्त करने के क्रम में संभव वाई.
इस तकनीक का एक संभावित सीमा के आसपास के ऊतक भी पराबैंगनी प्रकाश के संपर्क में है, क्योंकि यह एक एकल कोशिका के आधार पर लेबल कोशिकाओं को तकनीकी रूप से चुनौती दे रहा है कि, है. सेल प्रसार तेजी से होता है, तो इसके अलावा, लाल, लेबलिंग कोशिका विभाजन के बाद कमजोर पड़ने के माध्यम से खो दिया है.
इसके अलावा, Kaede tetrameric है और अन्य प्रोटीन के लिए जुड़े हुए जब समुच्चय के रूप में करने की प्रवृत्ति है. इस लाइव सेल इमेजिंग में सबसे फ्यूजन अनुप्रयोगों में इसके उपयोग की सीमा.
लाइव समय चूक इमेजिंग वैज्ञानिक समुदाय और एक व्यापक दर्शकों के लिए जटिल विकासात्मक प्रयोगात्मक डेटा और अधिक सुलभ बनाने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है.
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Disclosures
लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.
Acknowledgments
लेखकों कृपया zebrafish sox10 प्रमोटर अभिकर्मक साझा करने के लिए रॉबर्ट Kelsh धन्यवाद.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sox10:kaede transgenic zebrafish line | MGH | Available via the Liao lab | |
| Petri dishes 100x15 mm | BD Falcon | 351029 | |
| Petri dishes 35 mmx10 mm | BD Falcon | 351008 | |
| Ultrapure Low melting point (LMP) Agarose | Invitrogen | 15517022 | |
| Lab Tek 2 Chamber SlideSystem | LabTek | 154453 | |
| Microloaders 200/pk | Fisher | E5242956003 | |
| Nikon A1R Si Confocal Ti series | Nikon | No Catalog number | |
| NIS Elements Software AR3.2 64-bit | Nikon | No Catalog number |
References
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