Summary
अल्ट्रा उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड छोटे जानवरों में कार्डियक असामान्यताएं की जांच के लिए एक शक्तिशाली रहते इमेजिंग उपकरण है. इसके noninvasiveness भ्रूण की शारीरिक स्थिति को बनाए रखने की अनुमति देता है. इस के साथ साथ, हम utero में E18.5 में भ्रूण के दिल की दर को मापने के लिए एम मोड अल्ट्रासाउंड का उपयोग दिखाते हैं.
Abstract
जन्मजात हृदय रोग (सीएचडी) के जन्म के समय मौत का सबसे लगातार noninfectious कारण है. सीएचडी की घटनाओं में 4 से 50/1, 000 जन्मों (बीमारी और चोट क्षेत्रीय अनुमान है, विश्व स्वास्थ्य संगठन, 2004) के आधार पर. अक्सर जीवन की गुणवत्ता में समझौता सर्जरी कि सीएचडी के कारणों को खोजने के महत्व के बारे में हमें याद दिलाता है, हृदय दोष दूर करने के लिए आवश्यक हैं. उत्परिवर्ती माउस मॉडल और लाइव इमेजिंग प्रौद्योगिकी इस रोग के एटियलजि अध्ययन करने के लिए आवश्यक उपकरण बन गए हैं. उन्नत तरीकों भ्रूण में असामान्य दिल की लाइव इमेजिंग की अनुमति हालांकि, बाद के शारीरिक और hemodynamic राज्यों कारण अक्सर शल्य चिकित्सा और / या लंबी प्रक्रिया के लिए समझौता कर रहे हैं. अवेध्य अल्ट्रासाउंड इमेजिंग, हालांकि, शल्य चिकित्सा, जिससे उनके शरीर क्रिया विज्ञान को बनाए रखने, भ्रूण उजागर बिना इस्तेमाल किया जा सकता है. इस के साथ साथ, हम utero में E18.5 में भ्रूण के दिल की दर का आकलन करने के लिए सरल एम मोड अल्ट्रासाउंड का उपयोग करें. असामान्य दिल की दर का पता लगाने के लिए वास्तव में एक अच्छा इंडिका हैइस प्रकार दिल के रोग का टो और दिल की विफलता का कारण हो सकता है कि विकास संबंधी दोषों की पहचान करने के पहले चरण का गठन किया.
Introduction
सीएचडी जन्म 1 में मौत का सबसे आम noninfectious कारण है. एकाधिक सर्जरी अक्सर जिसका जीवन की गुणवत्ता में 1 से समझौता रह सकती है विषयों में संरचनात्मक दोषों को दूर करने के लिए आवश्यक हैं. सीएचडी के साथ बच्चे अक्सर विकास 2,3 पर utero परिणामों में महत्वपूर्ण संकेत है, वे सर्जरी आया नहीं है, भले ही मस्तिष्क संबंधी बीमारियों का विकास. ऐसे में गर्भावस्था के दौरान वायरस या रसायन (शराब) के लिए जोखिम, कारण सीएचडी के रूप में दोनों आनुवांशिक और पर्यावरणीय कारकों. आनुवंशिक योगदानकर्ताओं का अध्ययन कर अपनी प्रारंभिक चरण में अभी भी है, लेकिन तेजी से बढ़ रही है. इन योगदानकर्ताओं की पहचान करने और एक सरल और शक्तिशाली उपकरण के साथ उत्परिवर्ती चूहों phenotyping, दिल के विकास में अपनी भूमिका को समझना बेहद फायदेमंद होगा.
माउस वास्तव में सीएचडी अध्ययन करने के लिए विकल्प के एक पशु मॉडल है, और मानवीय मामलों के सबसे चूहों 4,5 में reproduced किया जा सकता है. नतीजतन, भ्रूण माउस हृदय phenotyping इंक बन गया हैreasingly महत्वपूर्ण मानव सीएचडी के एटियलजि की जांच और पर्याप्त उपकरणों की आवश्यकता के लिए. तय नमूनों पर ऊतकीय पढ़ाई अमूल्य हैं, जीवित पशुओं की वास्तविक समय इमेजिंग दिल के शरीर क्रिया विज्ञान को समझने के लिए महत्वपूर्ण है. वीडियो माइक्रोस्कोपी रहते इमेजिंग प्रदान करता है. हालांकि, यह जिससे उनके शारीरिक और hemodynamic राज्य समझौता किए, भ्रूण बेनकाब करने के लिए laparotomy की आवश्यकता है. हाल ही में, इकोकार्डियोग्राफी क्लिनिक में और साथ ही चूहों में हृदय आकलन के लिए मानक इमेजिंग तकनीक बन गया है.
माउस भ्रूण इकोकार्डियोग्राफी मानक नैदानिक अल्ट्रासाउंड प्रणालियों के साथ ही अति उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड सिस्टम का उपयोग किया जाता है. बाद के 30 मेगाहर्ट्ज या दो आयामी छवियों पैदा करते हैं और जल्दी भ्रूण चरणों के मूल्यांकन की अनुमति है कि उच्च आवृत्ति transducers प्रदान करते हैं. इन transducers, हालांकि, पर्याप्त इमेजिंग विमानों और प्राप्त करने के मौलिक दिल देहात निर्धारित करने के लिए पर्याप्त है, जो एक अपेक्षाकृत गरीब प्रवेश गहराई (~ 13 मिमी), हैऐसे दिल दर, पाद लंबा और प्रकुंचन और पट और दीवार मोटाई पर छोड़ दिया और सही निलय आंतरिक व्यास, laparotomy प्रदर्शन के बिना के रूप में rameters,.
हमारे अध्ययन में, हम भ्रूण दिन E18.5 पर माउस भ्रूण के दिल की दर का आकलन करने के लिए एक अति उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली का इस्तेमाल किया है. हम 12.7 मिमी की फोकल लंबाई के साथ भ्रूण का आकार, दी आदर्श है जो 20 मिमी x 20 मिमी, के एक क्षेत्र दृष्टिकोण प्रदान करता है कि एक 30 मेगाहर्टज ट्रांसड्यूसर चुना है. हालांकि, एक उच्च आवृत्ति ट्रांसड्यूसर पहले विकास के चरणों का विश्लेषण करने के लिए चुना जा सकता है. चयनित एम मोड 1,000 फ्रेम / सेकंड की एक उच्च अस्थायी समाधान के लिए प्रस्ताव धन्यवाद में ऊतकों के दृश्य की अनुमति देता. पूरी प्रक्रिया सरल है और भ्रूण की शारीरिक और hemodynamic राज्यों के किसी भी गड़बड़ी से बचने के लिए जल्दी से जल्दी के रूप में किया जाना चाहिए. लगभग 8 भ्रूण का विश्लेषण लगभग 1 घंटे की आवश्यकता है.
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Protocol
इस प्रोटोकॉल में दिखाया गया है सभी प्रक्रियाओं IRCM पशु की देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है.
1. अल्ट्रासाउंड सिस्टम और स्टेशन तैयारी
- अल्ट्रासाउंड इमेजिंग प्रणाली शुरू और निर्माता के अनुदेश (चित्रा 1) के अनुसार scanhead के साथ ही शरीर क्रिया विज्ञान नियंत्रक इकाई कनेक्ट. कार्डिएक माप कार्यक्रम और 30 मेगाहर्ट्ज ट्रांसड्यूसर से मेल खाती है कि scanhead चुनें.
- विआयनीकृत जल के साथ scanhead की nosepiece भरें. वे इमेजिंग संकल्प के साथ हस्तक्षेप के रूप में हवा के बुलबुले से बचें. इमेजिंग मंच के पास इसके धारक पर संभाल पक्ष अप (चित्रा 1 ए) के साथ scanhead रखें.
- इमेजिंग मंच और कार्य क्षेत्र कीटाणुरहित.
- बुलबुले के गठन से बचने और 37 डिग्री सेल्सियस (चित्रा 1 बी) के लिए अपनी prewarming कंटेनर सेट में उल्टा यह जगह पूरी तरह से अल्ट्रासाउंड जेल की बोतल भरें.
- ऑक्सी के स्तर को सत्यापित करेंजनरल और isoflurane और संज्ञाहरण के लिए ट्यूबिंग प्रणाली. ~ 8 भ्रूण के साथ एक प्रयोग लगभग 15-20 एल ऑक्सीजन का प्रयोग करेंगे.
- नेत्र बाम, लोमनाशक क्रीम और इमेजिंग मंच (चित्रा 1 बी) के पास इलेक्ट्रोड जेल की बोतलें रखें.
- कि अवरक्त गर्मी दीपक कार्यों का सत्यापन करें. प्रशिक्षण के दौरान, गर्मी स्तर, दीपक की स्थिति और निरंतर शरीर का तापमान और दिल की दर बनाए रखने के लिए चूहों को दीपक की दूरी निर्धारित किया है.
नोट: सिस्टम और सामग्री के समुचित तैयारी के लिए महत्वपूर्ण है. लंबी प्रक्रिया के रूप में लंबे संज्ञाहरण हृदय गति, रक्तचाप और रक्त oxygenation स्तर को कम करके हृदय समारोह depresses भ्रूण की शारीरिक और hemodynamic विशेषताओं को प्रभावित कर सकता है. (C57BL / 6 में औसत कूड़े आकार) ~ 8 भ्रूण के लिए प्रसंस्करण समय लगभग 1 घंटा होना चाहिए. अन्य माउस उपभेदों संभवतः एक बड़ा महिला के आकार के साथ, भ्रूण के एक उच्च संख्या उपलब्ध करा सकता है. प्रशिक्षण processi अनुकूलन करने के लिए आवश्यक हैएनजी समय.
2. माउस तैयारी
- यह nonresponsive हो जाता है जब तक ऑक्सीजन में 2% isoflurane की निरंतर आपूर्ति (200 मिलीग्राम / मिनट) के साथ एक कक्ष में गर्भवती महिला anesthetize.
- ऑक्सीजन में 1.5% isoflurane (200 मिलीग्राम / मिनट) के सतत साँस लेना के लिए ट्यूबिंग समायोजित, और टेप (2A चित्रा) के साथ साँस लेना ट्यूब को ठीक, एक लापरवाह स्थिति में इमेजिंग मंच पर माउस रखें. पर्याप्त संज्ञाहरण माउस के आराम मुद्रा और पूंछ और पैर के अंगूठे चुटकी करने के लिए किसी भी प्रतिक्रिया की अनुपस्थिति से प्रक्रिया के दौरान पुष्टि की जानी चाहिए.
- केवल electrocardiography के लिए (दाहिना पैर और भी नेतृत्व द्वितीय स्थिति बुलाया बाईं हिंद पैर, सामने) ऊपर छोड़ दिया और सही नीचे इलेक्ट्रोड पैड पर जगह इलेक्ट्रोड जेल. लीड द्वितीय स्थिति दिल की दर निर्धारित करने के लिए जटिल बेहतर परिभाषित ईमानदार सकारात्मक पी लहर और क्यूआर प्रदान करता है. टेप (2A चित्रा) का उपयोग करते हुए प्रत्येक पैड के लिए चार पंजे सुरक्षित. आँखों का सूखापन को रोकने के लिए, 1 बूंद से लागूहर आंख में नेत्र बाम.
- एक बाल क्लिपर के साथ मूत्राशय को छाती से पेट दाढ़ी. फिर 2 मिनट के लिए लोमनाशक क्रीम लागू करते हैं और ध्यान से किसी भी शेष बालों को हटाने के लिए धुंध और / या कपास झाड़ू के साथ बंद पोंछे. निपल्स कटौती करने के लिए नहीं सावधान रहना होगा.
- शरीर के तापमान पर नजर रखने के लिए महिला के मलाशय में इलेक्ट्रोड जेल के साथ prelubricated थर्मामीटर डालें (मंच के ऊपर रखा एक अवरक्त गर्मी दीपक का समायोजन करके 37 ± 0.5 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाना चाहिए). हार्ट दर 450 ± 50 धड़कता / मिनट (BPM) होना चाहिए. तापमान और दिल की दर दोनों फिजियोलॉजी नियंत्रक इकाई (चित्रा 1 बी) पर प्रदर्शित कर रहे हैं.
नोट: लंबे anesthetization, बालों के झड़ने और अल्ट्रासोनिक जेल (prewarmed हालांकि) महिला की हृदय गति को प्रभावित कर सकता है, जो हाइपोथर्मिया हो सकता है. शरीर का तापमान 36.5 डिग्री सेल्सियस नीचे चला जाता है, प्रक्रिया बंद करो और तापमान और दिल की दर को समायोजित करने के लिए हीटिंग दीपक की स्थिति को संशोधित. BEF कुछ मिनट रुकोफिर आगे बढ़ने अयस्क.
3. भ्रूण पहचान
- धीरे भ्रूण का पता लगाने के लिए नग्न पेट पर नीचे प्रेस. धीरे धीरे और हल्के से पेट की सतह के नीचे एक परत में भ्रूण की सबसे अधिक है उन्हें बाहर फैल गया. प्रत्येक गर्भाशय सींग में, थैलियों रैखिक एक दूसरे से जुड़े हैं. प्रसार जब इस आदेश का सम्मान करें.
- मार्क उनके पूर्वकाल / पीछे और पृष्ठीय / वेंट्रल निर्देश के साथ एक स्थायी मार्कर के साथ महिला की नग्न पेट पर प्रत्येक भ्रूण. उन्मुखीकरण जानने के बाद जांच के साथ दिल लगाने की सुविधा होगी. (चित्रा 2B क्रमशः 1, 2, 3 ... और 1 ', 2', 3 '...) गर्भाशय ग्रीवा से शुरू संख्या सही में भ्रूण और छोड़ दिया सींग.
नोट: (i) अत्यधिक बल के साथ भ्रूण को फैलने से रोकने. (चित्रा -2) उन्हें ट्रैक करने के लिए कागज के एक टुकड़े पर अपने स्थानों स्केच. (Ii) C57BL 6 / महिलाओं कूड़े प्रति ~ 8 भ्रूण है. हालांकि, प्रत्येक कूड़े में 0-2 भ्रूण कर रहे हैं lउनके इमेजिंग असंभव बना रही है, दूसरों के नीचे ocated. विश्लेषण से इन भ्रूण को बाहर करें और यदि आवश्यक हो तो अधिक litters का आकलन करें.
4. हृदय की दर मापन
- नग्न पेट पर prewarmed अल्ट्रासाउंड जेल की एक छोटी राशि जगह और यह समान रूप से फैला. बुलबुला गठन से बचने. छवि को विशिष्ट क्षेत्र पर जेल की एक बड़ी राशि (~ 5 एमएल) जोड़ें.
- मोटी परत जेल (10 मिमी) के साथ संपर्क में जांच पकड़ो और दिल की धड़कन की तलाश करते हुए धीरे - धीरे त्वचा की ओर जांच चाल. दिल की धड़कन स्क्रीन पर कल्पना की है, एक बार इमेजिंग विमान (चित्रा 2 डी) में अपने सबसे बड़े आकार में दोनों निलय है की जांच के कोण समायोजित करें.
- छवि प्राप्त करने के लिए शुरू. प्रकोष्ठ स्टेशन पर आराम के साथ देखने स्क्रीन (चित्रा 2 डी) पर एक जीवित छवि प्राप्त करने के लिए अल्ट्रासाउंड जेल पर transducer रखें. शीर्ष पर transducer के रिज को बनाए रखने और scanhead उन्मुखीकरण पर क्लिक(छवि की बाईं शीर्ष कोने में) एन मार्कर स्क्रीन पर कल्पित हाथ आंदोलन और क्षेत्र का समन्वय अनुमति देते हैं.
- ग्रीवा से शुरू, स्क्रीन पर दिल की धड़कन कल्पना करने के लिए (क्रमशः सही है या छोड़ दिया गर्भाशय सींग में 1 या 1 ',) चिह्नित निकटतम भ्रूण के लिए कदम. फोकल गहराई तय हो गई है, क्योंकि धीरे वांछित छवि विमान प्राप्त करने के लिए जेल के साथ संपर्क खोने के बिना ऊपर / नीचे और बग़ल में जांच के लिए कदम.
- बेहतर डाटा अधिग्रहण के लिए केन्द्र क्षेत्र का प्रतिनिधित्व पीले धराशायी लाइन द्वारा इंगित क्षेत्र के भीतर स्क्रीन के केंद्र में दिल की धड़कन स्थिति.
- लाइव रिकॉर्डिंग मोल. स्काउट छवि प्राप्त और (चित्रा 3) रिकॉर्डिंग फिर से शुरू. स्थिर रिकॉर्डिंग के 10 सेकंड की एक न्यूनतम प्राप्त हो जाने के बाद, रिकॉर्डिंग बंद करो और बचाने के लिए.
- अगले भ्रूण के लिए आगे बढ़ें.
- सभी भ्रूण रिकॉर्डिंग की सूची देखने के लिए कुंजीपटल पर, प्रेस "ब्राउज" विश्लेषण कर रहे हैं एक बार. प्रत्येक दर्ज एम मोड ट्रेसी प्लेएनजी और औसत हृदय की दर (3B चित्रा) प्राप्त करने के लिए आसन्न चोटियों (समय / प्रवाह चक्र) के बीच अंतर रखने के कई मापन (ट्रेसिंग के अनुसार कम से कम 5) प्रदर्शन करते हैं.
नोट: कुछ प्रोटोकॉल झटकों से बचने के लिए scanhead के लिए एक स्थिर स्टैंड का उपयोग कर सुझाव देते हैं. हालांकि, यह पार्श्व भ्रूण के अवलोकन के लिए मुश्किल बना रही है, विश्लेषण के कोण restrains. स्टैंड प्रत्येक भ्रूण के लिए समायोजित किया जाना है के रूप में यह भी विश्लेषण धीमा. स्टेशन पर प्रकोष्ठ निपटाने जबकि scanhead होल्डिंग कुशलतापूर्वक झटकों को कम करता है. 5-10 गर्भवती महिलाओं के साथ ट्रेनिंग परिणाम अनुकूलन करने के लिए सिफारिश की है.
5. जीनोटाइपिंग
- स्वच्छ शल्य कैंची और संदंश का प्रयोग, अनुलंबीय त्वचा और पेट की मांसपेशी परत काटकर अलग कर देना. प्रत्येक गर्भाशय सींग में थैलियों का पता लगाएँ और संख्या मैच. ऊपर प्रयोग किया जाता है ताकि भ्रूण को बेनकाब करने की जर्दी थैली खुले में कटौती. एक रैखिक व्यवस्था में नहीं है, तो एक टुकड़े पर भ्रूण पदों का स्केचत्वचा पर निशान नहीं रह दिखाई दे रहे हैं एक बार कागज की अनिवार्य हो जाएगा.
- जीनोमिक डीएनए बहुत कुशलता से भ्रूण पूंछ से निकाला जाता है के रूप में जीनोटाइपिंग के लिए तेल का केवल ~ 4 मिमी काटें.
नोट: (i) के शल्य प्रक्रिया इमेजिंग कक्ष से एक अलग स्थान में प्रदर्शन किया जा सकता है. हालांकि, यह माउस ले जाने और गिने भ्रूण का ट्रैक रखने के लिए इमेजिंग मंच पर शल्य प्रक्रिया है महत्वपूर्ण नहीं है. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया का अनुकूलन करने के लिए जानवरों की सुविधा प्रबंधक से सलाह लें. भ्रूण इमेजिंग के बाद जीनोटाइपिंग के लिए निकाल दिया है (द्वितीय) गर्भवती महिला तेजी से होने के कारण खून की कमी के लिए मर जाता है. हमारे पशु की देखभाल समिति की सिफारिश के अनुसार, पूंछ में कटौती के बाद, भ्रूण हाइपोथर्मिया से संज्ञाहरण के लिए बर्फ पर 3 मिनट रखा जाता है और फिर कैंची से decapitated.
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Representative Results
उपरोक्त विधि utero में E18.5 पर माउस भ्रूण के दिल की दर पर endothelial कोशिकाओं में उपस्थिति या सेरीन प्रोटीज furin के अभाव के प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. Furin बुनियादी अवशेषों के बाद proprotein convertases (पीसी) है कि फोड़ना प्रोटीन व्यापारियों के परिवार का है. Furin और उसके substrates स्रावी प्रोटीन होते हैं और दरार Golgi उपकरण, endosomes में या कोशिका की सतह पर हो सकता है. Furin की कुंजी substrates TGFb, और दिल के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं कि ऐसी हड्डी morphogenetic प्रोटीन (BMPs) के रूप में TGFb तरह कारकों में शामिल हैं. पीसी परिवार के अन्य सदस्यों को भी इन विट्रो दरार 6 से furin के विशिष्ट substrates सक्रिय कर सकते हैं. विकास के दौरान furin के प्रमुख और अद्वितीय भूमिका भ्रूण दिन 11 7 पर furin की कमी भ्रूण के शुरुआती मौत इसका सबूत है.
Furin की कमी भ्रूण द्वारा प्रदर्शित दोष के कई का एक महत्वपूर्ण कार्य का सुझाव दिया है क्योंकिfurin endothelial कोशिकाओं में, एंजाइम की भूमिका endothelial सेल विशिष्ट पीटा (Ecko) चूहों में जांच की गई थी. furin जीन 8 की सशर्त flox alleles ले कि furin flox / flox चूहों में एक transgene ले जाने furin flox / + चूहों के साथ पार कर रहे थे Cre recombinase की अभिव्यक्ति endothelial सेल विशिष्ट Tie2 प्रमोटर 9 से प्रेरित है. Endothelial कोशिकाओं में, Cre संकेत पेप्टाइड और prosegment का हिस्सा encodes, और इस तरह निष्क्रिय furin alleles उत्पन्न करता है जो furin जीन की एक्सॉन 2 पार्श्व कि दो loxP साइटों recombines. Ecko नवजात शिशुओं endothelial सेल व्यापारियों के प्रसंस्करण में furin की अनिवार्य भूमिका की पुष्टि, जन्म के फौरन बाद मर जाते हैं.
E18.5 में भ्रूण में हृदय दरों के गर्भ विश्लेषण में कि समयुग्मक, लेकिन नहीं विषमयुग्मजी, क्षिप्रहृदयता से पीड़ित Ecko भ्रूण (ऊंचा दिल की दर दिखाया, चित्रा 4 10 प्रकाशित किया गया था.
चित्रा 1. सिस्टम सेट अप का अवलोकन. उसके डिब्बे में scanhead साथ (ए) अल्ट्रा उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड प्रणाली दिखाया गया है. (बी) स्टेशन एक संवेदनाहारी प्रणाली, शरीर क्रिया विज्ञान नियंत्रक इकाई और सामग्री शामिल है. Clic बड़ी छवि को देखने के लिए कश्मीर.
चित्रा 2. माउस की स्थापना की. (ए) गर्भवती माउस isoflurane आपूर्ति के साथ लापरवाह स्थिति में रखा जाता है और टेप के साथ मंच पर रोक लगाई गई है. (बी) के पेट में बालों को हटाने के बाद, भ्रूण के स्थान पर पेट पर चिह्नित किया जाता है या (सी) एक कागज पर sketched. (डी) वांछित इमेजिंग विमान अल्ट्रासाउंड जेल के साथ संपर्क में रहता है कि scanhead ले जाकर प्राप्त की है. प्रकोष्ठ सुरक्षित झटकों से बचने के लिए स्टेशन पर रखा गया है. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .
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चित्रा 3. दिल की दर के प्रतिनिधि मूल्यांकन. (ए) E18.5 पर एक भ्रूण दिल की एक दो आयामी इकोकार्डियोग्राफी छवि पीले धराशायी लाइन पर केन्द्रित फोकल क्षेत्र के भीतर यह स्थिति से प्राप्त हुई थी. दो निलय तीर द्वारा संकेत कर रहे हैं. एल.वी., निलय छोड़ दिया, आर.वी., सही वेंट्रिकल. (बी) हृदय दर एम मोड का पता लगाने में आसन्न प्रवाह चक्र के बीच दोहराया माप से गणना की है. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 4. दिल की दर के प्रतिनिधि डेटा विश्लेषण. Utero इकोकार्डियोग्राफी में E18.5 पर 9 WT और 7 Ecko भ्रूण दिल की (एम मोड) एक 30 मेगाहर्ट्ज ट्रांसड्यूसर उपयोग किया गया था. इन भ्रूण डब्ल्यूपहले 3 स्वतंत्र litters में प्राप्त की. पी <0.0005 (***) एक दो पूंछ विद्यार्थी t-परीक्षण और सलाखों के द्वारा निर्धारित किया गया था मतलब + SEM का प्रतिनिधित्व करते हैं. गुम्मट, transgene नकारात्मक furin flox / + या furin flox / flox चूहों;. Ecko, furin flox / flox टीजी (Tie2-रचनात्मक) + / 0 चूहों बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .
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Discussion
एम मोड इकोकार्डियोग्राफी माउस भ्रूण की गर्भ दिल की दर में मापने के लिए एक प्रभावी और आसान तरीका है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ट्रांसड्यूसर छोटे दिलों की धड़कन कल्पना करने के लिए पर्याप्त संकल्प प्रदान करते हैं. इस प्रकार, वे ऐसे नाड़ी माप के रूप में अन्य तरीकों की तुलना में, एक बेहद सटीक दिल की दर माप की अनुमति, और उच्च संकल्प वीडियो माइक्रोस्कोपी स्थानापन्न कर सकते हैं. हालांकि, मौजूदा उपकरणों भ्रूण की प्रत्येक कल्पना करने के लिए एक कठिन प्रक्रिया है, जिसका अर्थ सभी भ्रूण का एक साथ विश्लेषण की अनुमति नहीं है. इसके अलावा, देखने के अपेक्षाकृत संकीर्ण क्षेत्र और क्षेत्र (2 डी छवि) की गहराई का अभाव ही प्रशिक्षित हाथों से हासिल एक मैनुअल समायोजन की आवश्यकता होती है. दरअसल, एक उचित प्रशिक्षण बहुत इस विधि की क्षमता को अधिकतम कर सकते हैं.
भ्रूण दिल की दर (E18.5) की विवो माप में पिछले विधियों से अलग, यह करता है, के रूप में एक noninvasive रहते इमेजिंग द्वारा दिल समारोह के एक मनोवैज्ञानिक मूल्यांकन प्रदान करता हैlaparotomy की आवश्यकता नहीं. इसके बजाय, गर्भवती महिला के पेट पर भ्रूण की स्थिति अंकन एक उचित ट्रैकिंग सुनिश्चित करता है और उनकी शारीरिक स्थिति को बरकरार रखता है. इस प्रकार, प्रक्रिया ऐसी गणना टोमोग्राफी और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के रूप में अन्य इमेजिंग प्रौद्योगिकी के प्रमुख कमजोरी पर काबू. कम से कम पिछले नहीं बल्कि, इस विधि से कम महंगा है.
इस विधि में कुछ महत्वपूर्ण कदम हीटिंग दीपक की स्थिति का समायोजन और भ्रूण की शारीरिक स्थिति को बनाए रखने और विश्वसनीय डेटा प्राप्त करने के लिए isoflurane की एक उचित दर उत्पन्न करके स्थिर गर्भवती माउस के शरीर का तापमान और दिल की दर रखने में शामिल हैं. एक सुसंगत तरीके से और कम से कम संभव समय में कार्यवाही आवश्यक है. इसलिए, प्रक्रिया सरल रखने और पूर्व कार्यवाही करने का अभ्यास अत्यधिक की सिफारिश की है.
अंत में, एम मोड इकोकार्डियोग्राफी गर्भ में भ्रूण दिल की दर का आकलन करने के लिए एक प्रभावी तरीका है. Abnorमॉल दिल दरों हृदय रोग का संकेत कर रहे हैं और वर्णित विधि माउस मॉडल में दिल की विफलता के लिए अग्रणी विकास संबंधी दोषों के लिए स्क्रीन, विशेषज्ञों, साथ ही nonspecialists अनुमति देगा.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम आंकड़े 1 और 2 में दिखाया तस्वीरें लेने के लिए इकोकार्डियोग्राफी और एन Chamberland में प्रशिक्षण के लिए मानॉन Laprise धन्यवाद. इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान अनुदान एमओपी 44363 संस्थान कनाडा और कनाडा के अध्यक्ष 950-216684 द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane | Pharmaceutical Partners of Canada Inc. | CP0406v2 | 1-chloro-2,2,2-trifluoroethyl difluoromethyl ether |
| Ultrasound gel | Parker Laboratories Inc. | Aquasonic Clear | |
| Electrode gel | Parker Laboratories Inc. | Spectra 360 | |
| Ophthalmic gel | Novartis | Tear-Gel | |
| Depilatory cream | Church Dwight Co., Inc. | Nair | |
| Hair clipper | |||
| Gauze/cotton swap | Q-tips | ||
| Permanent marker | |||
| High-Resolution In vivo Ultrasound Imaging System | Visual Sonics | Vevo770 | |
| 30 MHz Transducer | Visual Sonics | RMV707B | |
| Imaging platform and physiology controller unit | Visual Sonics | ||
| Anesthetic System | Cyprane North America Inc. | 312462 | |
| Infrared heating lamp |
References
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- Miller, S. P., et al. Abnormal brain development in newborns with congenital heart disease. N. Engl. J. Med. 357, 1928-1938 (2007).
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