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गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग / TNBS कोलाइटिस मॉडल: सूजन आंत्र रोग में इनसाइट्स और आहार वसा का प्रभाव प्रदान

Published: February 27, 2014 doi: 10.3791/51297
Automatic Translation
*1, *1, 1, 1, 1, 1, 1
1Division of Gastroenterology, BC Children's Hospital
* These authors contributed equally

Summary

गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग / TNBS प्रेरित कोलाइटिस एक वैकल्पिक और सूजन आंत्र रोग के pathobiology अध्ययन करने के लिए सस्ता तरीका प्रदान करता है. इस पत्र में चर्चा प्रोटोकॉल चूहों और चूहों में कोलाइटिस प्रेरित करने के लिए गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के सफल आवेदन की रूपरेखा और एक अच्छी तरह से होस्ट की मध्यस्थता आंतों प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है.

Abstract

Crohn रोग और ulcerative बृहदांत्रशोथ सहित सूजन आंत्र रोग (IBD), लंबे समय से एक आनुवंशिक आधार के साथ संबद्ध किया गया है, और अधिक हाल ही में माइक्रोबियल और पर्यावरण एजेंटों के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की मेजबानी की है. Dinitrobenzene सल्फोनिक एसिड (गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग) प्रेरित कोलाइटिस एक ऐसे तनाव और आहार, संभावित उपचारों के प्रभाव, और अंतर्निहित तंत्र आंतों में सूजन और mucosal चोट के रूप में आईबीडी एसोसिएटेड पर्यावरण चलाता है के रोगजनन अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. इस पत्र में, हम चूहों में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रेरित कोलाइटिस को colonic mucosal सूजन प्रतिक्रिया पर आहार N-3 और एन -6 फैटी एसिड के प्रभाव की जांच की. सभी चूहों [कुसुम तेल (एसओ), कैनोला तेल (सीओ), या मछली के तेल (एफओ)] तीन सप्ताह के लिए पहले प्रदर्शन के लिए गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग intrarectal के लिए फैटी एसिड के विभिन्न प्रकार के अपवाद के साथ समान आहार खिलाया गया. Intrarectal इथेनॉल दी नियंत्रण चूहों गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग का इलाज चूहों, जबकि खिलाया लिपिड आहार सभी लॉस, 5 दिन अध्ययन से अधिक वजन बढ़ने जारी रखाएफओ और सीओ खिलाया चूहों 48 घंटा और 72 घंटे के द्वारा ऐसा खिलाया चूहों से महत्वपूर्ण वजन घटाने का प्रदर्शन के साथ टी वजन. वजन 72 घंटे बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के बाद फिर से शुरू, और 5 दिनों के बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग द्वारा, एफओ समूह एसओ या सीओ समूहों की तुलना में एक उच्च शरीर के वजन था. Colonic 5 वर्गों दिनों के बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग उपचार केन्द्र छालों, तहखाना विनाश, जाम सेल रिक्तीकरण, और आहार समूहों के बीच गंभीरता में भिन्न है कि दोनों तीव्र और जीर्ण सूजन कोशिकाओं के mucosal घुसपैठ दिखाया एकत्र की. अतः खिलाया समूह के सह द्वारा पीछा सबसे गंभीर क्षति दिखाया, और के लिए ऊतक चोट के mildest डिग्री से पता चला है कि समूहों खिलाया. इसी तरह, colonic myeloperoxidase (MPO) गतिविधि, न्युट्रोफिल गतिविधि के एक मार्कर एफओ खिलाया चूहों काफी कम MPO गतिविधि होने के साथ, ताकि सह खिलाया चूहों द्वारा पीछा में काफी अधिक था. IBD के रोगजनन में आहार के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए, इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित के रूप में ये परिणाम, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रेरित कोलाइटिस के उपयोग के प्रदर्शन.

Introduction

भड़काऊ आंत्र रोग (IBD) दस्त, वजन घटाने, और पेट में दर्द के लक्षण, जिसके परिणामस्वरूप जठरांत्र (सैनिक) पथ में पुरानी relapsing सूजन की विशेषता है. अल्सरेटिव कोलाइटिस (यू) और Crohn रोग (सीडी) IBD के दो प्रमुख रूप हैं, और सैनिक पथ के भीतर सूजन के स्थान के आधार पर प्रतिष्ठित किया जा सकता. यू सी के रोगियों में सूजन आम तौर पर मलाशय शामिल है और केवल सतही म्यूकोसा को प्रभावित करने के लिए एक चर हद के लिए पेट के ऊपर समीप से फैली हुई है. यह मुख्य रूप से लघ्वान्त्र और अंधान्त्र को प्रभावित करता है, हालांकि इसके विपरीत, सीडी, सैनिक पथ के किसी भी हिस्से को प्रभावित कर सकते हैं. Transmural सूजन अक्सर granulomas के साथ जुड़े और (fistulizing) रोग stricturing (fibrostenotic) और / या मर्मज्ञ के लिए अग्रणी के रूप में सीडी अक्सर प्रकट होता है. IBD के एटियलजि मायावी रहता है, यह अच्छी तरह से आईबीडी मेजबानों के बीच प्रतिरक्षा प्रणाली, आनुवंशिक संवेदनशीलता और जिम्मेदारी बातचीत शामिल है, multifactorial है कि स्वीकार कर लिया हैपर्यावरण और सूक्ष्म कारकों को SES.

तिथि करने के लिए, IBD के विभिन्न मॉडलों यूसी और सीडी की विशेषता विभिन्न, नैदानिक ​​ऊतकीय और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है कि प्रदर्शन का प्रस्ताव किया गया है. सबसे अधिक इस्तेमाल मॉडल आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों (आईएल -2, आईएल -10, SAMP / Yit), संक्रमण प्रेरित मॉडल (Citrobacter rodentium, साल्मोनेला), दत्तक हस्तांतरण मॉडल (CD45 + आरबी उच्च, SCID चूहों में CD62L + सेल हस्तांतरण) शामिल हैं और रासायनिक प्रेरित कोलाइटिस मॉडल (Dextran सोडियम सल्फेट (डीएसएस), Trinitrobenzene सल्फोनिक एसिड (TNBS), और Dinitrobenzene सल्फोनिक एसिड (गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग)). उनके कम लागत और बीमारी के तेजी से शुरू होने के कारण, रासायनिक मॉडल IBD के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने के लिए अमूल्य विचार कर रहे हैं. सूचीबद्ध रासायनिक कोलाइटिस मॉडलों में से प्रत्येक IBD के लिए उनके, नैदानिक ​​प्रतिरक्षाविज्ञानी और histopathological प्रासंगिकता के कुछ पहलुओं में लाभ के रूप में भी सीमाएं हैं. इस के बारे कोली को प्रेरित करने के लिए नियोजित सबसे आम रासायनिक विधियों में से एक हैकृन्तकों 1 में आज़ादी. 3-10% DSS (मेगावाट: 42 केडीए) के प्रशासन चूहों के पीने के पानी में 7-10 दिनों के लिए लक्षण और वजन घटाने, खून से दस्त, colonic छोटा करने, mucosal छालों और न्युट्रोफिल घुसपैठ सहित कोलाइटिस के लक्षण पैदा कर सकते हैं. इस मॉडल को दवा स्क्रीनिंग अध्ययन, साथ ही उपकला उत्थान, mucosal समस्थिति पर सहज उन्मुक्ति के प्रभाव, और आंतों dysplasia और ग्रंथिकर्कटता विकास को बढ़ावा देने में सूजन की भूमिका के तंत्र की खोज के लिए विशेष रूप से उपयोगी है. कुछ डिग्री, हद में विभिन्नता में जिसके परिणामस्वरूप विभिन्न जानवरों की सुविधाओं में कोलाइटिस प्रेरित करने की जरूरत है इस के बारे में एकाग्रता, साथ ही चूहों से असंगत पानी तेज में परिवर्तन और इस के बारे करने के लिए इस प्रकार असंगत जोखिम सहित DSS मॉडल को कमियां,, और वहाँ रहे हैं लेकिन पेट में mucosal चोट और छालों का वितरण. इन सभी सुविधाओं के परिणाम की विविधता के लिए नेतृत्व और पढ़ाई fr भर में परिणामों की तुलना करने की क्षमता की सीमाओम विभिन्न अनुसंधान समूहों.

DSS मॉडल के लिए एक वैकल्पिक कोलाइटिस की hapten प्रेरित गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग या TNBS मॉडल है. इस मॉडल mucosal एजेंट गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग या इथेनॉल के अलग सांद्रता में पतला TNBS, सुग्राही बनाने की गुदा टपकाना कार्यरत हैं. इथेनॉल के प्रशासन लामिना propria में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग या TNBS के प्रवेश को अनुमति देने के लिए colonic mucosal बाधा को तोड़ने के लिए एक शर्त है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग / TNBS तो जिससे सहज मेजबान और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया ट्रिगर, immunogenic बनने के लिए स्थानीयकृत colonic और पेट सूक्ष्म प्रोटीन haptenize जाएगा. सामान्य में, इस मॉडल गंभीर और कभी कभी खूनी दस्त, वजन घटाने और आंतों की दीवारों उमड़ना हालांकि लक्षण इस्तेमाल किया कृंतक के प्रकार, साथ ही समय, खुराक और गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग को जोखिम या में इस्तेमाल किया TNBS की डिग्री के आधार पर भिन्न साथ जुड़ा हुआ है अध्ययन. चूहों और चूहों के बीच महत्वपूर्ण भेद कम खरीद और बोर्ड के लिए लागत, साथ ही लोव के लाभ के साथ, ध्यान दिया जाना चाहिएvivo में उपचार के प्रति पशु की लागत कम करने के लिए आर शरीर द्रव्यमान. यह और अधिक नाजुक और संवेदनशील पशुओं जल्दी से एक मानवीय समापन बिंदु तक पहुंच सकता है जहां चूहों में कोलाइटिस से अधिक तेजी से और गंभीर बेशक, के खिलाफ निर्धारित किया जाना चाहिए.

आंतों में सूजन शुरू में वृद्धि हुई उपकला पारगम्यता, म्यूकोसा में माइक्रोबियल प्रवेश, मेजबान प्रोटीन की haptenization, क्षतिग्रस्त म्यूकोसा में neutrophils, मैक्रोफेज और Th1 टी lymphocytes की घुसपैठ में जिसके परिणामस्वरूप यह सब करने के लिए अग्रणी, आंतों उपकला कोशिकाओं के लिए इथेनॉल प्रेरित नुकसान से परिणाम है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग को इसकी तुलना में, TNBS जैसे सोडियम और पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड के रूप अड्डों के साथ संपर्क पर विस्फोट का खतरा पैदा कर सकते हैं कि इसकी अत्यधिक ऑक्सीडेटिव गुण की वजह से एक खतरनाक रासायनिक रूप में माना जाता है. इसलिए गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग वर्तमान में कोलाइटिस प्रेरित करने के लिए TNBS से अधिक रसायन के एक पसंदीदा विकल्प के रूप में माना जाता है. कृन्तकों में, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस follo के अध्ययन करने के लिए सबसे सुविधाजनक तरीके से एक के रूप में माना जाता हैविंग आईबीडी बीमारी के संशोधक जुड़े:

  1. अवसाद और कोलाइटिस के पुनर्सक्रियन: यह IBD रोगियों में तनाव, चिंता और अवसाद अक्सर रोग पतन के साथ जुड़े रहे हैं दिखाया गया है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस चूहों में कोलाइटिस के पुनर्सक्रियन पर अवसाद और उसके परिणामों की भूमिका का अध्ययन करने के लिए एक उपयुक्त मॉडल है. विधि आम तौर पर 6-8 सप्ताह के लिए चूहों को छोड़ कर कोलाइटिस का संकल्प द्वारा पीछा गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग द्वारा कोलाइटिस की प्रारंभिक प्रेरण, शामिल है. चूहे तो गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग 2 के एक subcolitic खुराक के साथ चुनौती के माध्यम से कोलाइटिस के पुनर्सक्रियन के लिए उन्हें परीक्षण के बाद अवसाद के लिए प्रेरित करने के लिए इस तरह के Reserpine के रूप में अवसाद के कारण एजेंटों के साथ या घ्राण bulbectomy द्वारा प्रशासित रहे हैं.
  2. तनाव और कोलाइटिस के पुनर्सक्रियन: तनाव IBD के रोगजनन से जोड़ा गया है कि एक अन्य आम पर्यावरणीय कारक है. पुराने तनाव और कृंतक में यूसी और सीडी के लक्षणों की शुरुआत के बीच एक मजबूत सहयोग से पता चलता है कि सबूत के एक बढ़ती शरीर हैमानव और nonhuman primates 3 ​​में के रूप में भी है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस चूहों और चूहों दोनों में कोलाइटिस के तनाव से जुड़े पुनर्सक्रियन अध्ययन करने के लिए एक अच्छा मॉडल है. विधि आमतौर पर अवसाद के स्थान पर छोड़कर अवसाद के लिए उपरोक्त के रूप में एक समान फैशन में कार्यरत है, जानवरों में इस तरह के ध्वनि और संयम तनाव 4 के रूप में तनाव को उजागर कर रहे हैं.
  3. तंत्रिकाजन्य सूजन: अध्ययन का एक नंबर पशु मॉडल से और IBD के साथ रोगियों से ऊतक के नमूने के रूप में देखा आंतों का तंत्रिका तंत्र (सत्ता) संरचना और समारोह में क्षणिक या स्थायी परिवर्तन या तो वर्णन किया है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग सत्ता 5 पर सूजन के प्रभाव का पता लगाने के लिए और noradrenergic और cholinergic तंत्रिका रास्ते 6 दोनों का अध्ययन करने के लिए एक अच्छा मॉडल है.
  4. चोट की मरम्मत तंत्र: IBD के रोगजनन के दौरान, ऐसे प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS), नाइट्रिक ऑक्साइड (सं), कहनेवाला आसंजन अणु 3 (ICAM-3), और पी selectin के रूप में मेजबान व्युत्पन्न चोट मध्यस्थों सभी पी दिखाया गया हैआंतों उपकला विघटन में एक भूमिका देना. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग इन मध्यस्थों के ऊपर विनियमन के साथ ही चुनिंदा दवाओं या inhibitors 7,8 का उपयोग द्वारा विनियमित रहे हैं कि मरम्मत तंत्र के कारण चोटों का अध्ययन करने के लिए एक शानदार मॉडल है.
  5. Transmural सूजन: गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के उपर्युक्त अनुप्रयोगों के अलावा, मॉडल भी पेट की transmural सूजन, सीडी के साथ रोगियों में पाया एक शास्त्रीय सुविधा का अध्ययन करने के लिए लागू किया जा सकता है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग और TNBS प्रेरित कोलाइटिस दोनों टी सेल निर्भर प्रतिरक्षा तंत्र का अध्ययन करने के लिए इन मॉडलों को विशेष रूप से उपयोगी बनाने colonic mucosa में, लिम्फोसाइटों के महत्वपूर्ण घुसपैठ के साथ जुड़े रहे हैं.

DSS मॉडल के साथ तुलना में, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग और TNBS प्रेरित कोलाइटिस के फायदे कम लागत, कोलाइटिस का तेजी से विकास (आमतौर पर प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य छालों और सूजन को दिखाने के लिए 1-3 दिन की आवश्यकता है) और बाहर पेट के लिए संगत स्थानीयकृत क्षति शामिल हैं. हालांकि कमियां एक के लिए एक आवश्यकता हैतकनीकी विशेषज्ञता, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग / TNBS खुराक के अधिक उपयोग, और मलाशय के प्रशासन के लिए संज्ञाहरण के लिए जरूरत से अधिक से अधिक स्तर.

इस पद्धति पत्र में हम (एसओ) वनस्पति तेलों कुसुम तेल का प्रयोग चूहों में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रेरित कोलाइटिस को colonic mucosal प्रतिक्रिया फेरबदल पर N-6 और एन -3 पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड की अलग सांद्रता के प्रभाव का अध्ययन किया और कनोला तेल (सीओ) , और मछली के तेल (एफओ). यह n-6 और n-3 फैटी एसिड कोशिका झिल्ली phosopholipids 9 की एसाइल moieties के रूप में उनकी भूमिका के माध्यम से आंतों की सूजन की बीमारी के महत्वपूर्ण मध्यस्थों हैं कि दिखाया गया है. N-6 फैटी एसिड की proinflammatory क्षमता के विपरीत, उच्च पर्याप्त सेवन पर एन -3 फैटी एसिड संभावित प्रबल विरोधी भड़काऊ एजेंट हैं. n-3 फैटी एसिड के विरोधी भड़काऊ कार्रवाई proinfl के परिवर्तन के माध्यम से परोक्ष रूप से arachidonic एसिड चयापचय और बाधा, एक eicosanoid सब्सट्रेट के रूप में arachidonic एसिड के प्रतिस्थापन के माध्यम से सीधे मध्यस्थता कर रहे हैंammatory जीन अभिव्यक्ति और संकेतन सेल. n-3 फैटी एसिड भी, Resolvins के लिए विरोधी भड़काऊ मध्यस्थों के एक परिवार के जन्म दे. N-3 फैटी एसिड की उच्च मात्रा proinflammatory eicosanoids, साइटोकिन्स, chemokines, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों और आसंजन अणुओं की अभिव्यक्ति के उत्पादन में कमी के साथ जुड़ा हुआ है. इस अध्ययन में चूहों के साथ, फैटी एसिड को छोड़कर सभी पोषक तत्वों में समान यथेच्छ आहार खिलाया गया वसा, 20% तो, 20% सीओ, या 18% मछली के तेल प्लस 2% कुसुम तेल (एफओ) 10-11 से एक प्रतिशत ऊर्जा के रूप में . दैनिक ऊर्जा का एक प्रतिशत के रूप में, तो आहार <0.06% α-लिनोलेनिक एसिड (ALA) और कोई eicosapentaenoic एसिड (ईपीए) या docosahexaenoic एसिड (डीएचए) के साथ, 15% लिनोलेनिक एसिड (ला) प्रदान की, सीओ आहार 4.2 था % ला और 1.9% ALA कोई EPA या DHA के साथ, और के लिए आहार 1.4% EPA, 4.9% DHA, 0.32% ला, और 0.12% ALA प्रदान की. तीन हफ्ते लिपिड आहार की दीक्षा के बाद, चूहों intrarectal गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग या 50% इथेनॉल दिलाई और 5 दिन बाद बलिदान किया गया. inflammatory प्रतिक्रिया वजन घटाने, ऊतकीय क्षति स्कोर और ऊतक myeloperoxidase गतिविधि के मूल्यांकन द्वारा मूल्यांकन किया गया था.

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Protocol

पशु विषयों को शामिल प्रक्रियाओं ब्रिटिश कोलंबिया विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा उल्लिखित जानवरों की देखभाल के दिशा निर्देशों का पालन करें.

प्रतिनिधि परिणाम Sprague-Dawley चूहों से प्रस्तुत किया जाएगा, जबकि इस प्रोटोकॉल में वर्णित प्रक्रियाओं, चूहों और चूहों दोनों के लिए वर्णित किया जाएगा.

1. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग और Intrarectal प्रशासन की तैयारी

  1. चूहों में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की गुदा टपकाना के लिए, हौसले से 50% इथेनॉल के DNBS/250 μl की 15-30 मिलीग्राम तैयार करते हैं. चूहों के लिए, 50% इथेनॉल के DNBS/100 μl की 2-6 मिलीग्राम तैयार करते हैं. नोट: प्रत्येक सुविधा पर प्रशासित करने के लिए सटीक गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग एकाग्रता का अनुकूलन. पुरुष Sprague-Dawley चूहों, और C57BL 6 / चूहों, हालांकि अन्य माउस और चूहा उपभेदों इस्तेमाल किया जा सकता है गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस के शामिल होने के लिए पसंद कर रहे हैं. नियंत्रण समूहों हालांकि एक, ओमी सकते इथेनॉल के प्रभाव को देखते हुए हल्के या अनुपस्थित रहे हैं के रूप में केवल 50% इथेनॉल के साथ इलाज चूहों और चूहों का इस्तेमाल किया जा सकता हैएक अध्ययन में 12 के लिए इस समूह के शामिल किए जाने के लिए टी.
  2. अपने अंत को बांधा (चूहों - - चूहों या पीई 50 पीई-90) एक पॉलीथीन कैथेटर है कि एक 19 जी सुई के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज देते हैं.
  3. हल्के से एक हीटिंग पैड पर चूहा या माउस विश्राम anesthetize (नाक शंकु के माध्यम से 1.5% isoflurane प्रशासन द्वारा जैसे, पशुओं अभी भी झपकी और निगलने सजगता है और नियमित रूप से श्वसन प्रदर्शन करना चाहिए). बाहर सुखाने आंखों से बचने के लिए अपनी आंखों को आंसू जेल लागू करें.
  4. धीरे बाहर का बृहदान्त्र में मौजूद हो सकता है कि किसी भी मल को दूर करने के लिए पशु के पीछे के अंत करने के लिए उंगलियों के साथ दबाव लागू होते हैं.
  5. धीरे चूहों के लिए चूहों, या 3-4 सेमी के लिए गुदा के लगभग 8 सेमी समीपस्थ तक पहुँचने कैथेटर के साथ, intrarectally कैथेटर डालने. आसान प्रविष्टि की अनुमति, चिकना कैथेटर डालने जबकि समाधान की एक छोटी राशि इंजेक्षन. नोट: कैथेटर डालने जबकि किसी भी प्रतिरोध महसूस किया जाता है, तो इस का छिद्र को जन्म दे सकती है के रूप में सम्मिलित करने के लिए जारी नहीं हैआंतों की दीवारों. कैथेटर निकालें और फिर आगे बढ़ने के रूप में पेट के स्नेहन, धीरे पुन: डालने का प्रयास.
  6. धीरे धीरे 250 (चूहों) या 100 (चूहों) गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के μl, या नियंत्रण के लिए एक बराबर मात्रा या 50% इथेनॉल इंजेक्षन. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग इंजेक्शन लगाने के बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के नुकसान से बचने के लिए 90 सेकंड के लिए पशु सिर नीचे की स्थिति.
  7. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रशासन के बाद, पहले सप्ताह के दौरान निर्जलीकरण को रोकने के लिए 0.2% खारा में जानवरों 8% sucrose पानी खिलाओ.
  8. ध्यान से वजन घटाने और प्रयोग की अवधि के लिए निर्जलीकरण या संकट के संकेत के लिए दैनिक निगरानी के साथ, पशुओं का पालन. नोट: वजन घटाने के तेजी से स्वीकार्य अधिकतम वजन घटाने के CCAC सिफारिशों दृष्टिकोण हो सकता है. यह ज्यादातर निर्जलीकरण से व्युत्पन्न के बाद से, वजन घटाने निर्जलीकरण को सीमित करने के Lactated घंटी समाधान के प्रशासन के लिए एक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए. उचित रूप में स्वास्थ्य के मुद्दों पर सुविधा पशु चिकित्सक से परामर्श करने के लिए सुनिश्चित करें.

2. सहटिश्यूज llecting और गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग को चुनौती चूहे में histological क्षति का आकलन

  1. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के साथ चुनौती के बाद वांछित समय बिंदु पर, पर्याप्त ऑक्सीजन के साथ पूरक एक संवेदनाहारी कक्ष में isoflurane के साथ overdosing द्वारा जानवरों euthanize. कोई बढ़ती है या छाती के गिरते देखा है जब तक पशु पालन और कोई स्पष्ट दिल की धड़कन है. पुष्टि पशु सही ढंग से ग्रीवा अव्यवस्था के बाद पैर की अंगुली चुटकी या कॉर्निया की दिल को छू लेने के लिए एक प्रतिक्रिया, के अभाव द्वारा euthanized किया गया है.
  2. उदर गुहा खोलें और पूरे बड़ी आंत को हटा दें. अनुलंबीय आंत खोलें; macroscopic mucosal अल्सर चूहों में पेट (चूहों में 2-3 सेमी) के बाहर का अंत से लगभग 5-6 सेमी समीपस्थ मनाया जाना चाहिए. नोट: अगर वांछित बड़ी आंत को हटाने के बाद, macroscopic नुकसान के स्कोर का आकलन करें. नियंत्रण जानवरों से संरचनात्मक स्थान इसी से पेट के क्षेत्रों लीजिए. नोट: macroscopic नुकसान स्कोर के लिए ऊतक स्कोरिंग व्यक्तियों चाहिएउपचार समूहों की पहचान करने के लिए अंधा हो. गंभीरता और छालों की हद (0-10), अभाव या दस्त की उपस्थिति (0 या 1), adhesions (0, 1, या 2) और अधिक से अधिक colonic दीवार मोटाई के लिए स्कोर के साथ अभिव्यक्त किया है: निम्नलिखित या इसी तरह के मानदंड का उपयोग ऊतक वर्गों स्कोर मिलीमीटर 11 में.
  3. 0.5 सेमी वर्गों अधिक से अधिक macroscopic नुकसान की साइट के लिए समीपस्थ लीजिए. स्नैप बाद myeloperoxidase (MPO) गतिविधि (न्युट्रोफिल घुसपैठ का एक उपाय) का आकलन, और ऊतकीय विश्लेषण के लिए 10% तटस्थ बफर formalin में अन्य अनुभाग स्थान के लिए तरल नाइट्रोजन में एक 0.5 सेमी अनुभाग फ्रीज. नोट: myeloperoxidase परख के लिए 1 महीने के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है के लिए जमे हुए ऊतकों स्नैप.
  4. 2.3 कदम में ऊतकीय विश्लेषण के लिए एकत्र ऊतकों रातोंरात formalin में ठीक है, और फिर 70% इथेनॉल के साथ धोने के लिए अनुमति दें. आयल में ऊतकों शामिल करें और इच्छित मोटाई (3-5 मीटर), ऊतकीय स्कोरिंग के लिए hemotoxylin और eosin (एचई) के साथ दाग को काटा. दो पर्यवेक्षकों प्रत्येक समूह के लिए ऊतकीय क्षति स्कोर को निर्धारित करने के लिए एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत प्रत्येक जानवर से कम से कम तीन ऊतक वर्गों स्कोर है. नोट: ऊतकीय क्षति स्कोर के लिए ऊतक स्कोरिंग व्यक्तियों को उपचार समूहों की पहचान करने के लिए अंधा हो जाना चाहिए. भड़काऊ सेल घुसपैठ की हद (0 = अनुपस्थित, 3 = transmural), mucosal वास्तुकला का नुकसान (0 = अनुपस्थित, 3 = गंभीर), उपस्थिति या तहखाना फोड़े का अभाव (0-1): निम्नलिखित या इसी तरह के मानदंड का उपयोग ऊतक वर्गों स्कोर , और जाम सेल रिक्तीकरण (0-3). इन अंकों में 11 की राशि के रूप में ऊतकीय क्षति स्कोर निर्धारित करते हैं.

3. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग पर Myeloperoxidase (MPO) परख प्रदर्शन चुनौती आंतों के ऊतकों

  1. 2.3 कदम में प्राप्त 0.5 सेमी colonic क्षेत्रों में परख MPO गतिविधि. MPO homogenization बफर में ऊतकों एक 50 मिलीग्राम पेट के segme देने के लिए (50 मिमी पोटेशियम फॉस्फेट बफर में 0.5% hexadecyltrimethyl-अमोनियम ब्रोमाइड (पीएच 6.0)) homogenizehomogenization बफर निलंबन की NT / एमएल.
  2. एक्स छ 10,000 पर 2 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 1 मिलीलीटर भागों और अपकेंद्रित्र में homogenized समाधान विभाज्य.
  3. O-dianisidinedihydrochloride की 0.167 मिलीग्राम / एमएल और एक क्युवेट में 0.0005% हाइड्रोजन पेरोक्साइड युक्त 2.9 मिलीलीटर 50 मिमी फॉस्फेट बफर (6.0 पीएच) के साथ प्रत्येक विभाज्य के 100 μl मिलाएं.
  4. 460 एनएम पर एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग absorbance की दर को मापने. नोट: MPO गतिविधि कमरे के तापमान पर 2 एच ओ एच 2 ओ 2 में से 1 μmol / मिनट अपमानजनक एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया गया है और ऊतक के मिलीग्राम प्रति इकाइयों में व्यक्त किया जाता है.

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Representative Results

गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के साथ चूहों (Sprague-Dawley) या चूहों (C57BL / 6) की चुनौती को आम तौर पर कभी कभी मल में रक्त वर्तमान के साथ, क्षणिक वजन घटाने और दस्त में परिणाम है. हालांकि, इस तरह के जेनेटिक्स, आहार और आंतों microbiota जैसे कारकों गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रेरित कोलाइटिस के लिए संवेदनशीलता को संशोधित कर सकते हैं. इसलिए, जानवरों प्रयोगों में शामिल स्थानीय रूप से व्युत्पन्न या एक पशु आपूर्तिकर्ता से में आदेश दिया है, या तो एक ही संस्थान से होना चाहिए. सभी जानवरों को ध्यान से वजन घटाने और कोलाइटिस के दौरान सामना करना पड़ा संकट के लक्षण की डिग्री के लिए निगरानी की जानी चाहिए.

कुसुम तेल, कनोला तेल, और मछली के तेल गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस के परिणामस्वरूप गंभीरता पर मूल्यांकन किया गया: आंकड़े 1-4 में प्रस्तुत परिणामों तीन आहार तेलों का प्रभाव एक प्रयोग है जिसमें प्रतिनिधित्व करते हैं. समूहों के बीच सांख्यिकीय मतभेद एक डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग कर, पद अस्थायी Tukey के परीक्षण के बाद एनोवा का उपयोग कर निर्धारित किया गया है. <0.05 के एपी मूल्य consi थामहत्वपूर्ण dered.

गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग (50% इथेनॉल के μl 20 मिलीग्राम DNBS/250) के साथ intrarectal चुनौती के बाद, महत्वपूर्ण वजन घटाने अतः (पी <0.05) के साथ पूरक चूहों में एफओ और सीओ के साथ पूरक चूहों में और 72 घंटे से 48 घंटे से मनाया गया. अधिकतम वजन घटाने के सीओ के साथ पूरक चूहों में और इतने एफओ के साथ पूरक चूहों में और 72 घंटे से 48 घंटे में देखा जाता है. वजन 72 घंटे के बाद फिर से शुरू किया है, और इसलिए 5 दिनों के बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग, एफओ और समूहों आधारभूत मूल्यों के लिए इसी तरह शरीर के वजन दिखा. आहार के साथ पूरक और intrarectal इथेनॉल के साथ चुनौती दी नियंत्रण चूहों 5 दिन अध्ययन की अवधि में वजन बढ़ाने के लिए जारी है.

गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की वजह से आंतों को नुकसान, बड़े पैमाने पर हालांकि अधिक से अधिक नुकसान का क्षेत्र आम तौर पर चूहों में पेट के बाहर का 6 सेमी तक ही सीमित नहीं है, और चूहों में बाहर का 3 सेमी हो सकता है. Macroscopically इस colonic दीवार उमड़ना, mucosal छालों, और जिले के कभार आसंजन के रूप में देखा जा सकता हैऐसे मूत्राशय के रूप में आसन्न अंगों को अल बृहदान्त्र,. अल्सर, प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ (मुख्य रूप से neutrophils और लिम्फोसाइटों), पुटकशोथ, बलगम कमी, और सूजन के गठन के लिए अग्रणी कुछ क्षेत्रों में करीब ऊतकीय मूल्यांकन, व्यापक उपकला चोट, मनाया जाता है पर. सूजन और ऊतकों को नुकसान की इन ऊतकीय संकेत गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के साथ चुनौती पर सभी तीन आहार तेल पूरक समूहों में स्पष्ट कर रहे हैं हालांकि मछली के तेल समूह में चूहों का प्रदर्शन, जबकि सबसे गंभीर क्षति, कैनोला तेल समूह द्वारा पीछा कुसुम तेल समूह में देखा जाता है न्यूनतम उपकला चोट और mucosa में सूजन कोशिकाओं की एक सीमित घुसपैठ (चित्रा 2).

ऊतकीय नुकसान में मतभेद समूहों के बीच एक बेहतर तुलना के लिए अनुमति देने के लिए मात्रा निर्धारित किया जा सकता है. ऊतकीय क्षति का आकलन किया मानदंड भड़काऊ सेल घुसपैठ, mucosal वास्तुकला की हानि, जाम सेल रिक्तीकरण, और cryp की उपस्थिति की हद तक शामिलटी फोड़े. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग कोलाइटिस दौरान तीन आहार तेल समूहों के लिए ऊतकीय क्षति के स्कोर 3 चित्र में दिखाया गया. मछली के तेल समूह क्षति की कम से कम राशि दिखाने जबकि चित्रा 2 में एच ई दाग वर्गों में देखा जाता है, कुसुम तेल पूरक समूह, कैनोला तेल समूह द्वारा पीछा क्षति की सबसे बड़ी सीमा है.

विशेष रूप से neutrophils की भड़काऊ सेल घुसपैठ की हद तक, आगे एक myeloperoxidase (MPO) गतिविधि परख प्रदर्शन द्वारा जांच की जा सकती. यह न्युट्रोफिल granulocytes और माइलॉयड वंश की अन्य कोशिकाओं की कणिकाओं में एक एंजाइम है के रूप में MPO, सूजन के एक मार्कर माना जाता है. 5 दिन के बाद गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग जोखिम में चूहे कोलन में MPO गतिविधि का आकलन सभी तीन समूहों में गतिविधि में वृद्धि हुई है (चित्रा 4) से पता चलता है. सबसे कम MPO गतिविधि में देखा जाता है, जबकि सबसे बड़ी MPO गतिविधि, कैनोला तेल समूह द्वारा पीछा कुसुम तेल समूह में मनाया जाता हैचित्रा 3 में मूल्यांकन ऊतकीय क्षति स्कोर करने के लिए इसी मछली के तेल समूह,.

चित्रा 1
चित्रा 1. 50% इथेनॉल (नियंत्रण) या तो, सीओ, या एफओ खिलाया वयस्क महिला Sprague-Dawley चूहों में dinitrobenzene सल्फोनिक एसिड (गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग) (250-500 ग्राम) की intrarectal प्रशासन के बाद शरीर के वजन में परिवर्तन (आधारभूत का%). चूहों हैं फिर सुबह 5 इलाज के बाद जब तक दिन 1 से शरीर के वजन के नुकसान के लिए नजर रखी. शरीर के वजन का प्रतिशत घटाने की गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग इलाज के बाद दिन के खिलाफ साजिश रची है. मान ± SEM के साधन हैं, एन = 5 / समूह. समकक्षों इलाज गैर गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग से तुलना करने पर 3 दिन पर चूहों के सभी तीन समूहों हस्ताक्षर किया था, जबकि सीओ और एफओ के साथ खिलाया चूहों के रूप में शुरुआती दिन 1 पोस्ट गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग उपचार के रूप में अपने शुरुआती शरीर के वजन में एक महत्वपूर्ण कमी थीआधारभूत वजन (पी <0.01) को nificant वजन घटाने के सापेक्ष. सभी कोलाइटिस समूहों वजन एफओ में आधारभूत की ओर लौटने और इतना तंग आ समूहों के साथ, 72 घंटा के बाद वजन प्रदर्शित करता है. इथेनॉल नियंत्रण समूहों में चूहों 5 दिन अध्ययन की अवधि में वजन प्रदर्शित करता है. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 2

चित्रा 2. 5 दिनों intrarectal 50% इथेनॉल के प्रशासन (सीटीएल) या वयस्क मादा चूहों के लिए गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के बाद प्रतिनिधि एच एंड ई दाग पेट के ऊतक वर्गों के histological उपस्थिति एसओ, सीओ, या एफओ खिलाया. ऊतक 10% formalin में एकत्र की है और एक न्यूनतम के लिए ठीक करने के लिए अनुमति दी गई है 24 घंटा के ऊतक सेक्शनिंग द्वारा पीछा किया और वह धुंधला हो जाना.चूहों से ऊतक वर्गों इतना तंग आ गया और सीओ उपकला चोट की बदलती डिग्री के साथ उपकला अखंडता की महत्वपूर्ण विघटन का प्रदर्शन, तहखाना तो साथ देखा अधिक चिह्नित परिवर्तन के साथ, अल्सर के गठन और transmural प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ बाहर ड्रॉप. सीओ खिलाया चूहों में, उपकला उत्थान और बहाली का सबूत देखा है. इसके विपरीत, चूहों एफओ उपकला अखंडता को बनाए रखा खिलाया और लामिना propria तक ही सीमित भड़काऊ कोशिकाओं की सीमित घुसपैठ की थी. (एम म्यूकोसा, एस.एम. उप mucosa और यू छालों; मूल बढ़ाई 100X; पैमाने पर पट्टी: 100 माइक्रोन). बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 3
चित्रा 3. Colonic ऊतकों के histological क्षति स्कोर 5 दिनों एक50% इथेनॉल (स्पष्ट बार) या गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग वयस्क मादा चूहों के लिए ठोस (बार) की fter intrarectal प्रशासन एसओ, सीओ, या एफओ खिलाया. ऊतक वर्गों ऊतकीय पर आधारित एक निर्धारित मानदंडों का उपयोग, उपचार के लिए अंधा एक अनुभवी अन्वेषक, से रन बनाए हैं नुकसान. इस अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया मापदंड में शामिल हैं: भड़काऊ सेल घुसपैठ (0 = अनुपस्थित, 3 = transmural), mucosal अखंडता की हानि (0 = अनुपस्थित, 3 = गंभीर), तहखाना फोड़ा गठन (0 = अनुपस्थित, 1 = वर्तमान) जाम सेल रिक्तीकरण (0 = अनुपस्थित, 3 = उच्च). ऊतकीय क्षति स्कोर प्रत्येक जानवर से तीन ऊतक वर्गों की एक न्यूनतम स्कोरिंग द्वारा प्राप्त अंक की राशि के रूप में निर्धारित किया जाता है. एसओ और सीओ खिलाया चूहों की तुलना में जब परिणाम स्पष्ट रूप से एफओ खिलाया चूहों में एक कम ऊतकीय क्षति प्रदर्शित करता है. मान ± SEM के साधन हैं, एन = 5 / समूह. संबंधित इथेनॉल नियंत्रण के साथ तुलना में, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रशासन क्षति स्कोर (पी <0.05) में एक महत्वपूर्ण वृद्धि के साथ जुड़ा हुआ है, विभिन्न प्रतीकों के साथ समूहों बृहदांत्रशोथ रहे हैं काफी अलग (पी <;. 0.01) बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 4
चित्रा 4. 5 दिन में 50% इथेनॉल एसओ, सीओ, या एफओ खिलाया वयस्क मादा चूहों के लिए (स्पष्ट बार) या गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग (ठोस बार) की intrarectal प्रशासन के बाद colonic ऊतकों में MPO गतिविधि. सूजन colonic ऊतकों तरल नाइट्रोजन में जमे हुए और myeloperoxidase गतिविधि के लिए assayed तस्वीर हैं , granulocyte घुसपैठ के एक सूचकांक के रूप में. Colitic चूहों एसओ और कंपनी मान ± SEM के साधन हैं की तुलना में एफओ शो कम MPO गतिविधि खिलाया, एन = 5 / समूह. संबंधित इथेनॉल नियंत्रण के साथ तुलना में, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रशासन MPO गतिविधि (पी <0.001) में एक महत्वपूर्ण वृद्धि के साथ जुड़ा हुआ है, विभिन्न प्रतीकों के साथ समूहों बृहदांत्रशोथ significantl हैं(पी <0.05) विभिन्न वाई. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

इस प्रोटोकॉल में वर्णित गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग मॉडल IBD के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है कि एक मूल्यवान सस्ती, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य कोलाइटिस मॉडल है. चूहों या चूहों को intrarectally प्रशासित, गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग polymorphonuclear कोशिकाओं के transmural घुसपैठ और प्रमुख NF-κB निर्भर Th1 सक्रियण सहित अपनी विभिन्न ऊतकीय सुविधाओं के मामले में मानव Crohn रोग जैसी, पेट में सूजन और ऊतकों को चोट का एक बड़ा डिग्री लाती है.

यह मॉडल इस तरह के तनाव, अवसाद, और आहार, साथ ही आंतों का तंत्रिका तंत्र की भागीदारी, चोट की मरम्मत तंत्र, transmural सूजन, और preclinical चिकित्सा के रूप में आईबीडी पर प्रभावित करने के लिए सोचा था कि विभिन्न कारकों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग मॉडल भी चूहों और चूहों में TNBS प्रेरित सूजन के लिए एक उपयुक्त विकल्प है और इस तरह इस के बारे में कोलाइटिस की अन्य आमतौर पर कार्यरत रासायनिक मॉडलों के लिए एक कम महंगा विकल्प प्रदान करता है. इस पी में उल्लिखित चरणोंrotocol एक सफलतापूर्वक इस मॉडल को निष्पादित करने की अनुमति देगा.

कोलाइटिस 13-16 के अन्य प्रयोगात्मक मॉडल के अनुरूप, वर्तमान अध्ययन, EPA और DHA के उच्च सेवन से पहले attenuates करने और गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग प्रदर्शन के बाद भस्म जहां आंत्र mucosal प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर आहार वसा के चर प्रभाव को पुष्ट करते हुए कम से कम n के साथ ए आर ए के अधिक सेवन -3 फैटी एसिड कोलाइटिस exacerbates. इस अध्ययन में मनाया आहार एन -3 फैटी एसिड के लाभदायक प्रभाव हिस्से में प्रभावी रूप से कम ऊतक फॉस्फोलिपिड ए आर ए ला से ए आर ए के संश्लेषण बाधा और EPA और DHA के साथ ए आर ए की जगह से दोनों n-3 फैटी एसिड के कारण हैं. यह परिवर्तन एक कम proinflammatory वातावरण की ओर जारी है और बाद में eicosanoid संश्लेषण के लिए उपलब्ध फैटी एसिड सब्सट्रेट पाली. इसके विपरीत, एन -6 फैटी एसिड की उच्च मात्रा mucosal प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ा कि proinflammatory मध्यस्थों के बाद संश्लेषण के साथ एक उच्च colonic ए आर ए के साथ जुड़ा हुआ है. Keepin मेंCitrobacter rodentium प्रेरित कोलाइटिस में हमारे हाल ही के अध्ययन के साथ जी, चूहों कुसुम तेल से कम ए आर ए के साथ कैनोला तेल खिलाया, लेकिन N-3 ALA और कोई EPA या DHA के साथ एक मध्यवर्ती भड़काऊ प्रतिक्रिया 16 था.

गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग मॉडल के सफल कार्यान्वयन पर प्रभावित कर सकता है कि कई महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं. विभिन्न अध्ययनों से लेकर गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की अलग सांद्रता का इस्तेमाल किया है 3-6 मिग्रा / माउस या कोलाइटिस की स्थापना के लिए 15-30 मिलीग्राम / चूहे से. इष्टतम खुराक एक जानवरों की सुविधा से दूसरे से भिन्न हो सकते हैं, क्योंकि व्यक्ति जांचकर्ताओं ने अपने अध्ययन के लिए गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की खुराक का अनुकूलन करने के लिए इसलिए, यह महत्वपूर्ण है. यह गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की एकाग्रता एक अन्वेषक (: कुछ उपभेदों गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग के लिए प्रतिरोधी अधिक अतिसंवेदनशील और दूसरों को हो सकता है पूर्व) का उपयोग किया जाता है कि जानवर के प्रकार और प्रजातियों के अनुसार अलग होगा ध्यान दें कि यह भी महत्वपूर्ण है. ध्यान इस जानवरों की तेजी मौत resu पैदा कर सकता है के रूप में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की एकाग्रता बहुत अधिक नहीं है कि यह सुनिश्चित करने के लिए लिया जाना चाहिएआंत्र वेध और पूति से lting. इस मॉडल का उपयोग करने के लिए एक और महत्वपूर्ण कदम पशु के बाहर का बृहदान्त्र में intrarectal कैथेटर प्रविष्टि के लिए उपयुक्त विधि का विकास कर रहा है. पेट में मल की उपस्थिति टपकाना दौरान कैथेटर की पर्याप्त प्रविष्टि रोक सकता है. इससे बचने के लिए, धीरे बाहर का बृहदान्त्र / मलाशय में किसी भी मल को दूर करने के लिए हल्के से anaesthetized चूहों के गुदा के पीछे के अंत पर दबाव डालते हैं. यह प्लीहा वंक (अनुप्रस्थ और उतरते पेट के बीच एक तेज मोड़) 7 तक चूहों में 6-8 सेमी की एक अधिकतम करने के लिए बढ़ाया जा सकता है, हालांकि यह कैथेटर गुदा से लगभग 3-4 सेमी डालने के लिए सिफारिश की है. यह कैथेटर की आसान प्रविष्टि की अनुमति होगी छोटी मात्रा में गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग / इथेनॉल इंजेक्शन द्वारा कैथेटर चिकनाई, टपकाना प्रक्रिया के दौरान उस नोट करना महत्वपूर्ण है. गुदा के बाहर गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग की प्रतिगामी भाटा से बचने के लिए, यह वैकल्पिक रूप से 90 सेकंड के लिए एक सिर नीचे की स्थिति में पशुओं को पकड़ या के लिए महत्वपूर्ण हैचूहों Trendelenburg स्थिति (पैर 15-30 डिग्री से सिर से अधिक रखा जाता है जहां एक लापरवाह स्थिति) में 15 मिनट के लिए रखा जा सकता है.

टिश्यूज अन्वेषक के हितों पर और अध्ययन तीव्र या जीर्ण सूजन पर ध्यान केंद्रित कर रहा है कि क्या आधार पर चयनित समय बिंदुओं पर एकत्र किया जा सकता है. इसके अलावा, ऊतकों भी आंतों सत्ता और सहज और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि, यह ऊतकों को ठीक से जांचा जाता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है. यह उचित निर्धारण सुनिश्चित करने के लिए छोटी मात्रा शीशियों के लिए विरोध के रूप में एक 5 मिलीलीटर की शीशियों में 10% formalin के एक पर्याप्त मात्रा में ऊतकों को इकट्ठा करने की सिफारिश की है. नमूने के उचित निर्धारण histopathological क्षति और दृश्य अणु लक्ष्य के ऊतकों में एच ई द्वारा और immunostaining, क्रमशः दोनों का अध्ययन करने के लिए एक चाबी है. ऊतकों के histological स्कोरिंग टी द्वारा निर्धारित तय मापदंड का उपयोग, प्रयोगात्मक शर्तों को अंधा कर रहे हैं, जो अनुभवी व्यक्तियों द्वारा किया जाना चाहिएवह व्यक्ति अन्वेषक 11,17. Myeloperoxidase (MPO) जठरांत्र ऊतकों 11 में सूजन, ऊतक चोट और न्युट्रोफिल घुसपैठ का एक अच्छा मार्कर के रूप में कार्य करता है. MPO assays के प्रदर्शन करने के लिए, यह तरल नाइट्रोजन में और विश्लेषण के दिन पर ऊतकों फ्रीज तस्वीर करने के लिए सुझाव दिया है, यह सबसे अच्छा और सबसे सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए हौसले से तैयार buffers और समाधान के साथ काम करने के लिए सिफारिश की है. यह मॉडल भी आंत घुसपैठ कि भड़काऊ कोशिकाओं, भड़काऊ कोशिकाओं और सक्रियण और अन्य proinflammatory ऊतक चोट में शामिल मध्यस्थों के साथ ही नियमन करने में शामिल मध्यस्थों की रिहाई में शामिल विभिन्न रास्ते में से chemotaxis और स्थानांतरगमन में शामिल तंत्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है भड़काऊ प्रतिक्रिया और ऊतकों की मरम्मत में.

वर्तमान में इस तरह के TNF-α के रूप में एक proinflammatory साइटोकाइन immunosuppressive दवाओं का उपयोग कर या लक्ष्य के साथ देखा नैदानिक ​​नुकसान investig प्रोत्साहित करना चाहिएators IBD के साथ रोगियों के प्रबंधन को बेहतर चिकित्सीय रणनीति विकसित करने के लिए. इस तरह के गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग मॉडल के रूप में मॉडल, जांचकर्ताओं संभावित नए उपचार लक्ष्य की पहचान करने और उपन्यास भड़काऊ रास्ते और उपन्यास के उपचारों के उपयोग के माध्यम से सूजन को नियंत्रित करने के लिए रणनीतियों में सुधार / विकास, IBD के रोगजनन के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने के लिए अनुमति देता है.

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Disclosures

लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.

Acknowledgments

इस काम के प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल () NSERC और Crohn है और कनाडा की बृहदांत्रशोथ फाउंडेशन (CCFC) से के.जे. ऑपरेटिंग अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. वीएम एक CFRI फैलोशिप और जीबी स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा के लिए (CIHR) से स्नातक छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित है. BAV आंतों और यकृत रोग बाल चिकित्सा गैस्ट्रोएंटरोलॉजी और के.जे. में बाल चिकित्सा IBD अनुसंधान और कनाडा अनुसंधान चेयर फाउंडेशन (बच्चा) के अध्यक्ष बच्चे और बच्चे और परिवार अनुसंधान संस्थान (CFRI) Clinician वैज्ञानिकों पुरस्कार कार्यक्रम द्वारा समर्थित एक वरिष्ठ Clinician वैज्ञानिक है के साथ एक बच्चे है , ब्रिटिश कोलंबिया विश्वविद्यालय.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 ml Syringe BD Biosciences 309659  
19 G Needle BD Biosciences 305187  
Polyethylene tubing PE-50 BD Biosciences 427517 for intrarectal administration in mice
Polyethylene tubing PE-90 BD Biosciences 427519 for intrarectal administration in rat
DNBS MP Bio 150959  
Tear gel Novartis 63601662596  
10% Formalin Fisher 5F93-4  
Warming pad Kent Scientific TPZ-0510  
Ethanol Fisher A-962.4  
Hexadecyltrimethyl-ammonium bromide Sigma-Aldrich H5882  
Potassium phosphate buffer solution Sigma-Aldrich 79628-  
o-Dianisidine dihydrochloride Sigma-Aldrich D3252  
30% H2O2 Sigma-Aldrich 31642 hydrogen peroxide
Spectrophotometer BioRad Benchmarker Plus  
Light Microscope Zeiss Axio Image.Z1  
Data analysis software program  GraphPad Software GraphPad Prism Software Version 4.00 www.graphpad.com

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References

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चिकित्सा अंक 84 रासायनिक कोलाइटिस सूजन आंत्र रोग इंट्रा गुदा प्रशासन आंतों में सूजन transmural सूजन myeloperoxidase गतिविधि
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Morampudi, V., Bhinder, G., Wu, X.,… More

Morampudi, V., Bhinder, G., Wu, X., Dai, C., Sham, H. P., Vallance, B. A., Jacobson, K. DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat. J. Vis. Exp. (84), e51297, doi:10.3791/51297 (2014).

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