A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.
وغالبا ما تستخدم الفئران كما المانحين والمتلقين زرع القلب في دراسات علم المناعة زرع نظرا لمجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا والكواشف المتوفرة. ويرد صعوبة نظرا لصغر حجم الحيوان والتحديات التقنية المجهرية كبير من المتورطين في زرع القلب. على وجه الخصوص، نسبة عالية من عطل فني في وقت مبكر بعد زرع قد تنجم عن وفاة المستفيد ومضاعفات ما بعد الجراحة مثل الشلل أطرافه الخلفية أو القلب غير الضرب. هنا، ويتجلى تقنية كاملة لزرع قلب منتبذ الماوس، التي تنطوي على حصاد قلب المانحة وزرع لاحقا في الماوس المتلقي. يتم حصاد قلب المانحة التالية على الفور نضح في الموقع مع heparinized المالحة الباردة وtransection من الأبهر الصاعد والشريان الرئوي. العملية المتلقي ينطوي إعداد الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي (IVC)، تليهامفاغرة نهاية إلى جانب الشريان الأورطي مع الشريان الأورطي المانحة المتلقي باستخدام واحد على التوالي 10-0 خيط مجهري ومفاغرة مماثلة من الشريان الرئوي المانحة مع المتلقي IVC. بعد العملية يتم حقن الحيوان مع 0.6 مل تحت الجلد العادي المالحة وسمح لاسترداد على 37 درجة مئوية وسادة التدفئة. وتتلخص النتائج من 227 عملية زرع قلب فأر مع نسبة نجاح في 48 ساعة من 86.8٪. 13.2٪ الإخفاقات في غضون 48 ساعة، 5 (2.2٪) من ذوي الخبرة الشلل أطرافهم هند، 10 (4.4٪) كان له قلب غير الضرب، بسبب الكسب غير المشروع الإصابة الدماغية و / أو تخثر الدم، في حين توفي 15 (6.6٪) في غضون 48 ساعة .
يمكن أن النماذج الحيوانية من زرع الأعضاء تقديم معلومات قيمة لتحسين علاج مرضى زرع السريرية. نماذج الماوس مفيدة بشكل خاص لدراسة آلية المناعة من رفض زرع الأعضاء أو القبول نظرا لمجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا والكواشف محددة بالنسبة للفئران التي لا تتوفر لغيرها من النماذج الحيوانية 1-3. وهناك تحد مع نماذج الماوس من زرع هو حجم صغير من المانحين والمستفيدين والتي تتطلب مهارة فنية كبيرة لتحقيق نتائج مرضية.
وقد وصفت وهناك تقنية الأولى لزرع منتبذ القلوب في الفئران 4 التي تم تكييفها لاحقا لزرع القلب الماوس عن طريق كوري وآخرون 5. تشارك هذه التقنية إعداد المتلقي قبل العملية المانحة وليس نضح القلب المانحة، وكلاهما من المرجح أن يضر بقاء القلب المزروع أو رانه المتلقي. وقد استخدم على نطاق واسع الإجراء كما هو موضح في الأصل لدراسة آليات رفض الزرع والتسامح 6-8. وقد تكيفت الآخرين الفئران القلب الإجراء زرع الأصلي أونو وليندسي لزرع القلب في الفئران 9،10. مؤخرا، تم نشر تقنية لزرع القلب الماوس التي تغلبت على بعض المشاكل المرتبطة مع أسلوب كوري وآخرون 11. وصف بروتوكول هنا يتضمن تعديلات لدينا، على أساس طريقة موترام وآخرون 12، والتي تشمل: نضح في الموقع مع heparinized المالحة الباردة مباشرة بعد بضع الصدر وتنفيذ العملية المانحة قبل العملية المتلقي لتقليل وقت العملية المتلقي. بالإضافة إلى ذلك، ونحن نستخدم المشابك السفينة ارضحي صغيرة بدلا من 6-0 ربطات العنق الحريرية. على الرغم من أن المشابك السفينة لديها عيب من اتخاذ المزيد من المساحة التي هي أسهل للسيطرة من العلاقات، والتي ينبغي أن لا تكون ضيقة جدا أو فضفاضةوتكون أقل وضوحا لإزالة من المشابك. يستخدم أسلوب لدينا خياطة تشغيل واحد لسفينة مفاغرة، وإن كان في مراحل التعلم الأولية بديل هو استخدام الغرز البقاء في الداني والقاصي زوايا لضمان التوزيع المتساوي من الغرز، وبالتالي المباح من مفاغرة.
الماوس زرع القلب هي طريقة صعبة المجهرية التي تتطلب مهارة جراحية كبيرة لسيده. الجانب الأكثر تحديا هو قطر صغيرة من السفن. بالإضافة إلى ذلك، فمن الضروري للحد من المستلم وقت العملية والنزيف. وقد وصفت هذه التقنية لزرع القلب الماوس أول من كوري وآخرون. في عام 1973 وبعد ذل?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية (NHMRC) في أستراليا منح المشروع 1029205، من قبل مؤسسة Microsearch من أستراليا، ومؤسسة Myee كودرينغتون البحوث الطبية.
Operating microscope | Leica, Heerbrugg, Switzerland | M651 | 10x – 25x magnification |
Anesthetic machine | Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia | Vett3 | Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air |
Operating board | Hardware store or office supplier | Dense cork or synthetic capable of taking pins | |
Heparinised saline (5 U/ml, 4oC) | Pfizer, USA | FW25 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice |
Normal saline (37oC) | AstraZeneca Pty Ltd, Australia | 4538 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on warm pad |
Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl | Ethicon, Inc. NJ, USA | 2870G/J421H | |
Buprenorphine (0.05mg/kg in 0.1ml saline) | Reckitt Benckiser, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
Ampcillin (5mg/kg in 0.1 ml saline) | Aspen, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
Gel Foam | Pharmacia & Upjohn Co. USA | 801289304 | Cut into small pieces |
High temperature cautery device | Medtronic, USA | 8444000 | |
Microsurgery instruments: | Shanghai Medical Instruments Co. Ltd., | ||
micro-needleholders | Shanghai, China | WT2020 | |
micro scissors | " " " | WT1020 | |
micro-forceps (straight tip) | " " " | WA3010 | |
micro-forceps (curved tip) | " " " | WA3020 | |
micro-mosquito clamps (1 pair) | " " " | W40350 | |
micro-vessel atraumatic clamps (1 pair) | " " " | W40130/W40150 | |
Heating Pad/Right Temp | Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790 |