A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.
עכברים משמשים לעתים קרובות כתורמים להשתלת לב ומקבלי במחקרים של אימונולוגיה השתלה בשל מגוון הרחב של עכברים הטרנסגניים וחומרים כימיים זמינים. קושי מוצג בשל גודלו הקטן של בעלי החיים ואת האתגרים טכניים רבים של המיקרו המעורב בהשתלת לב. בפרט, שיעור גבוה של כשל טכני מוקדם לאחר ההשתלה עלול להיגרם כתוצאה ממותו של נמען ולסיבוכים שלאחר ניתוח כגון שיתוק גפיים האחורי או לב אינו פועם. הנה, את הטכניקה השלמה להשתלת לב עכבר heterotopic הוא הוכיח, הכולל קצירת לב התורם וההשתלה הבאה שלה לעכבר נמען. לב התורם שנקטפו מייד לאחר בזלוף אתרו עם מי מלח קר heparinized וחיתוך רוחב של אב העורקים עולים ועורק ריאה. פעולת הנמען כרוכה הכנה של אב העורקים בבטן ונחות וריד נבוב (IVC), ואחריוהשקה קצה לצד של אב העורקים תורם עם אב עורקי הנמען באמצעות microsuture הריצה 10-0 אחת והשקה דומה של עורק הריאה התורם עם הנמען IVC. לאחר הניתוח של בעלי החיים מוזרקים עם 0.6 מיליליטר תת עורי מלח רגיל ואפשרו להתאושש על כרית חימום 37 מעלות צלזיוס. התוצאות מ227 השתלות לב עכבר מסוכמות עם שיעור הצלחה ב48 שעות של 86.8%. של כשלי 13.2% בתוך 48 שעות, 5 (2.2%) שיתוק האחורי איבר, 10 (4.4%) חווה היה לב אינו פועם בשל להרכיב פציעה ו / או פקקת איסכמי, בעוד 15 (6.6%) מתו בתוך 48 שעות .
מודלים של בעלי החיים של השתלת איברים יכולים לספק מידע רב ערך לשיפור טיפול בחולי השתלה קליניים. מודלים עכבר הם שימושיים במיוחד עבור לומד את המנגנון החיסונית של דחיית השתלת איברים או קבלה בשל מגוון הרחב של עכברים וחומרים כימיים מסוימים לעכברים שאינם זמינים למודלים של בעלי חיים אחרים 1-3 מהונדסים גנטי. אתגר עם מודלים עכבר של השתלה הוא בגודל הקטן של התורמים ומקבלי הדורשים מיומנות טכנית רבה כדי להשיג תוצאות משביעות רצון.
טכניקה תוארה לראשונה להשתלת heterotopic לבבות בחולדות 4 אשר הותאמה לאחר מכן להשתלת לב בעכבר על ידי קורי ואח' 5. טכניקה זו כרוכה בהכנת הנמען טרם מבצע התורם ולא טפטוף של הלב התורם, אשר שניהם עשויים לסכן את ההישרדות של לב או לא המושתליםהוא הנמען. ההליך כבר בשימוש נרחב כפי שתואר במקור כדי לבחון את המנגנונים של דחיית שתל וסובלנות 6-8. אחרים יש להתאים את ההליך המקורי עכברוש לב ההשתלה של אונו ולינדסי להשתלת לב בעכברי 9,10. לאחרונה, טכניקה פורסמה לעכבר השתלת לב שהתגברה על חלק מהבעיות הקשורות לשיטה של קורי et 11 אל. הפרוטוקול מתואר כאן משלב השינויים שלנו, המבוססים על השיטה של מוטרם et 12 אל, הכוללים: בזלוף אתרו עם מלח heparinized קר מייד לאחר פתיחת בית החזה וביצוע פעולת התורם לפני ניתוח הנמען כדי למזער את זמן פעולה של נמען. בנוסף, אנו משתמשים במלחציים קטנים atraumatic כלי במקום 6-0 עניבות משי. למרות שיש לי מלחציים כלי החסרון של לקיחה יותר מקום הם יותר קל לשלוט מאשר קשרים, שלא צריכה להיות הדוק או רפוי מדיוהם פחות פשוטים כדי להסיר ממלחציים. השיטה שלנו משתמשת בתפר ריצה אחת להשקת כלי שיט, אם כי בלמידה הראשונית בשלבים חלופיים הוא להשתמש בתפרים להישאר בהפרוקסימלית ופינות דיסטלי כדי להבטיח שוויון של תפרים וכך patency של ההשקה.
השתלת לב עכבר היא שיטה microsurgical מאתגרת שדורשת מיומנות כירורגית רבה להורים. ההיבט המאתגר ביותר הוא בקוטר הקטן של הכלים. בנוסף, יש צורך להגביל את זמן פעולת נמען ודימום. הטכניקה להשתלת לב עכבר תוארה לראשונה על ידי קורי et al. ב1973 ולאחר מכן על ידי מוטרם et 12 אל…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי המועצה הלאומית לבריאות והמחקר רפואי (NHMRC) של אוסטרליה פרויקט גרנט 1,029,205, על ידי קרן Microsearch של אוסטרליה, ועל ידי קרן המחקר הרפואי Myee קודרינגטון.
Operating microscope | Leica, Heerbrugg, Switzerland | M651 | 10x – 25x magnification |
Anesthetic machine | Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia | Vett3 | Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air |
Operating board | Hardware store or office supplier | Dense cork or synthetic capable of taking pins | |
Heparinised saline (5 U/ml, 4oC) | Pfizer, USA | FW25 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice |
Normal saline (37oC) | AstraZeneca Pty Ltd, Australia | 4538 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on warm pad |
Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl | Ethicon, Inc. NJ, USA | 2870G/J421H | |
Buprenorphine (0.05mg/kg in 0.1ml saline) | Reckitt Benckiser, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
Ampcillin (5mg/kg in 0.1 ml saline) | Aspen, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
Gel Foam | Pharmacia & Upjohn Co. USA | 801289304 | Cut into small pieces |
High temperature cautery device | Medtronic, USA | 8444000 | |
Microsurgery instruments: | Shanghai Medical Instruments Co. Ltd., | ||
micro-needleholders | Shanghai, China | WT2020 | |
micro scissors | " " " | WT1020 | |
micro-forceps (straight tip) | " " " | WA3010 | |
micro-forceps (curved tip) | " " " | WA3020 | |
micro-mosquito clamps (1 pair) | " " " | W40350 | |
micro-vessel atraumatic clamps (1 pair) | " " " | W40130/W40150 | |
Heating Pad/Right Temp | Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790 |