Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri

Published: January 20, 2015 doi: 10.3791/52329
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Florey Institute of Neuroscience and Mental Health, The University of Melbourne

Abstract

Beyin veya beyin plastisite 'Uzun süreli değişiklikler hastalık ya da yaralanma aşağıdaki uyarlamalı davranış ve beyin onarımı altında yatan. Ayrıca, bizim çevre ile etkileşimleri beyin plastisite neden olabilir. Giderek, araştırma beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı beyin plastisite teşvik hangi ortamlar belirlemek için çalışıyor. İki çevresel manipülasyonlar açıklanan hangi artırmak veya yetişkin fare orta beyindeki nöronlar tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısını (TH +, dopamin (DA) sentezinde hız kısıtlayıcı enzim) azaltın. İlk eşleştirme erkek ve birlikte sürekli erkeklerde yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar artar 1 hafta için dişi farelerin içermektedir, ancak kadınlarda yaklaşık% 12 oranında orta beyin TH + nöronlar azaltır. İkinci vb çalışan tekerlekleri, oyuncaklar, halatlar, yuvalama malzeme, içeren 'zenginleştirilmiş ortamlarda' (EE) 2 hafta boyunca sürekli konut fareler içermektedir ierkeklerde yaklaşık% 14 oranında orta beyin TH + nöronlar ncreases. Ayrıca, bir protokol eş zamanlı çevre kaynaklı beyin plastisite altında yatan mekanizmaları belirlemek yardımcı olmak için bu çevresel manipülasyonlar sırasında doğrudan orta beyin içine uyuşturucu beslerken için tarif edilmiştir. Örneğin, daha orta beyin TH + nöronların EE-indüksiyon orta beyin nöronlar üzerine sinaptik girdi eşzamanlı ablukası tarafından kaldırılmıştır. Birlikte, bu veriler çevre ile ilgili bilgiler veya 'DA' genlerin ifadesi kapatmak için orta beyin nöronların sinaptik giriş üzerinden geçirilen olduğunu göstermektedir. Böylece, altta yatan mekanizmaların hedef uygun çevresel stimülasyon ya da ilaç, orta beyin DA dengesizliklerin ile ilişkili beyin ve davranış bozuklukları tedavisinde yararlı olabilir (örn Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı).

Introduction

Ortabeyin ventral tegmental alan (VTA) ve substantia nigra pars compactadaki (SNc) nöronların tarafından DArgic sinyal ödül motive bilişsel, duygusal ve motor davranışlar için önemli olduğu düşünülmektedir. Ancak, çok fazla veya çok az orta beyin DA sinyal birçok devre dışı nörolojik bozukluklar çeşitli belirtileri (örneğin Parkinson hastalığı, dikkat eksikliği ve hiperaktivite bozukluğu, şizofreni, ve uyuşturucu bağımlılığı) neden olur. Artırmak veya DA bu belirtileri hafifletmek sinyalizasyon azaltan ilaçlar, ancak onlar da düzensiz sinyal atfedilebilecek yan etkileri ve hedef dışı etkiler üretmek. İlaç etkinliği, aynı zamanda, beynin telafi tepkiler zamanla azalır. Bu bakımdan, bir daha hedefli ve fizyolojik şekilde normal orta beyin DA sinyal geri ve bir tercih yaklaşım artan ya da orta beyin DA nöron sayısını azaltarak gereğidir.

Kanıt sev için biriken edilmiştir(1 gözden) olgun yetişkin hücrelerde metabolize ve ticareti DA ve diğer katekolaminlerin yer alan genlerin ve proteinlerin ifadesi değiştirilebilir olduğunu eral yıl. TH immunonegative (TH-) nöron sayısı karşısında modelini gösterir iken orta beyin, tirozin hidroksilaz immünopozitif sayısı (TH + DA sentezi, oran-sınırlayıcı enzim) nöron sonra, (örneğin, bir artış nörotoksin verilmesini 2,3 aşağıdaki da artar sonra) 3 azalır. Bu daha sonra bazı hücreler tarafından 'DA fenotip' bir kazanç kaybı ile tutarlıdır. TH + ve TH- SNc nöronların sayısı da bu hücrelerin 4,5 elektrik aktivitesini değiştirmeyen farklı tedavilerin ardından eşit fakat ters yönde değiştirmek için gösterilmiştir. Örneğin, 2 hafta boyunca orta beyin içine küçük iletkenlik enfüzyon, kalsiyum ile aktive edilen potasyum (SK) kanalı antagonisti apamin (aynı miktarda) nu TH + ve artar sayısını azaltmaktadırTH- SNc ve mber 4,5 nöronlar. Buna karşılık, SK kanal agonisti 1-EBIO infüzyon TH + sayısını artırır ve (aynı tutarda) TH- SNc nöronlar 4,5 sayısını azaltır. Benzer değişiklikler, afferent girişi 4 hedef olan de dahil olmak üzere SNc nöronal aktivitenin, hedefleme çeşitli uygulamalar aşağıdaki görüldü. Nöronal aktivitenin ve afferent tarafından SNc DArgic nöronların sayısının bu bariz düzenleme ortamı veya davranış SNc nöron sayısını etkileyebilir olasılığını yükseltir. Farklı ortamlara maruz kalan Gerçekten de, yetişkin fareler daha az ya da orta beyin (SNc VTA) TH + nöronlar ve bu ortam ile endüklenen değişikliklerin en azından bir orta beyin 6 sinaptik giriş eşzamanlı ablukası ile ortadan kaldırılamaz sahiptir. (1) çevresel manipülasyonlar ve ilaç infüzyonu nasıl uygulanacağı konusunda daha fazla ayrıntı sağlamak;: Bu iletişim amaçları vardır ve (2) e bizim çekişme destekleyen daha fazla veri sağlamakbütünlüklü afferent yoluyla, orta beyin DA nöron sayısını düzenler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

NOT: Tüm hayvanlar üzerinde deney prosedürleri Nörobilim & Ruh Sağlığı Hayvan Etik Kurulu Florey Enstitüsü tarafından onaylanmış ve Avustralya'nın Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi uygun edildi bilimsel amaçlar için hayvanların bakımı ve kullanımı için uygulama kodu (7. sürümü yayınlandı 2004).

1. Çevre İşlemler

  1. Cinsiyet Eşleştirme
    1. Cinsel olgun (> 8 haftalık), yaştaki erkek ve dişi fareler kullanın.
      NOT: Biz genellikle C57BL / 6 fareler kullanın, ancak bu protokol İsviçre fareleri kullanarak aynı sonuçları vardı. Bu, tipik olarak, n = (n = 4 erkek), n = 2 erkek-erkek çiftler halinde ayrılır, her bir deney için, n = 8 erkek ve n = 8 kadın kullanımı 2 dişi-erkek çiftleri (n = 4 kadın), ve n = 4 erkek-dişi çiftleri (n = 4 erkek ve n = 4 kadın).
    2. Hayvan tutma tesisi, grup içi içine girişte> 3 gün boyunca cinsiyete göre fareler iklime alıştırmak için. Burada ve Throughout cinsiyet eşleştirme, yabancı çevre uyaranlara tutmak (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın.
    3. Rasgele bir erkek-erkek çifti, bir dişi-erkek çifti ya da bir erkek-dişi çifti her bir fare atar. Yiyecek ve su ad libitum giriş ile izole temiz bir kafes (2 fare / kafes) her bir çifti yerleştirin ve sadece 7 gün boyunca sürekli olarak bu şekilde yerleştiren.
      NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır. Erkek ve kadın littermates eşleştirme önlemek için dikkat edin.
  2. Çevre Zenginleştirme
    1. Cinsel olgun (> 8 haftalık), yaştaki erkek ya da dişi farelerin kullanın.
      NOT: Biz genellikle n = 6 / tedavi grubuna ayrıldı her bir deney için n = 18 fare, kullanın.
    2. Grup ev sahipliği özdeş standart içinde yer tutmak hayvan tutma tesis haline girişte (SH) (örn (örneğin ortam sıcaklığı, ışığı: karanlık döngüsü, gıda, su, taşıma ve temizlik) sabit veya tüm farelere eşit dağıtın.
    3. Çevre zenginleştirme başlamak için, rastgele 3 gruba birine her fare atamak: SH; çalışma tekerleği (RW), ya da ortam olarak zenginleştirilmiş (DT) ve bir araya yiyecek ve su ad libitum giriş ile aynı temiz bir kafes içine, farelerin her bir grubu yerleştirin.
      NOT: Tüm gruplar için Burada, büyük sıçan tutan kafesleri, 42 cm uzunluğunda, geniş 27 cm boyutlarında, ve derin 16 cm kullanıldı.
      1. Buna ek olarak, aşağıdaki çevresel her grup için koşulları sağlamak: katta sadece çöp içeren SH (kağıt pelet ya da talaş); RW içeren SH artı 2 çalışan tekerlekler; EE (halatlar, merdivenler, tüneller ve boş kağıt havlu ruloları ve doku kağıt parçaları gibi nesneleri) RW artı oyuncaklar içeren hangi explore, oyun, tırmanma, gizlemek, ve yuva.
      2. 14 gün boyunca sürekli bu şekilde onları ev.
        NOT: Rutin hayvancılık bu dönemde Tamam ama tüm farelere eşit dağıtılmalıdır.
    4. 1 saat / gün (aynı saatte her gün), 5days / hafta yeni oyuncaklar içeren daha geniş bir kafese araya koyarak ek 'süper-zenginleştirme' (SE) tabi EE fareler.
      NOT: Burada, 46 cm genişliğinde 69 cm uzunluğunda ve 40 cm derinliğinde plastik küvet kullanıldı.
      1. Oyuncakların farklı bir dizi her oturum sunarak yenilik koruyun. Temiz oyuncaklar sabunlu su ve kokular kaldırmak için% 80 etanol ile farelere yeniden sunulmak üzere.
      2. Her SE oturumunu takiben, kendi EE kafesine fareler dönün. Kolu SH ve RW fareler bu dönem boyunca (SE kendisi hariç) SE fareler aynı (örneğin kaldırmak ve gelen ve kafesine her SH ve RW fareyi dönüş).

  1. Hazırlık
    1. Piyasada mevcut olan steril ozmotik pompalar ve beyin infüzyon kitleri kullanın. implantasyon gün önce, aseptik teknik kullanılarak, her bir pompa dolum (pompalar birlikte verilen talimatlara açıklandığı gibi), steril ilaç veya araç solüsyonu ile tüp ve kanül bağlayarak Başbakan implantlar. Birbirine geç ve 37 ° C'de gece boyunca steril tuzlu su içinde inkübe edilir. Çapraz bulaşmayı önlemek için ayrı ayrı ilaç ve araç-dolu implantlar inkübe.
  2. Cerrahi.
    NOT: deneyci ülkeye bağlı olarak, özel hayvan deneyleri izin veya ödenekleri cerrahi ve ameliyat sonrası deneyler bu tip sürdürmeye gerekmektedir.
    1. Tüm cerrahi ekipman sterilize ve aseptik boyunca teknik kullanır. (Örneğin havada% 1-2 isofluorane kullanarak) bir fare anestezisi ve bir stere yerleştirinotaxic Headframe. Prosedür boyunca anestezi derinliğini kontrol edin ve gerekirse daha fazla anestezi yönetmek (zararlı pençe tutam bacak çekilmesi örneğin yokluğu yeterli anestezi göstergesidir). Emin olun gözler yağlayıcı göz merhemi ile kuruma karşı korumalıdır ve farenin vücut ısısı prosedürü boyunca normal kalmasını edilir.
    2. Cm kafatasının arka kenarına posterior 2 gözü arasında ve bitirme başlayarak deri yoluyla orta hat kesi yapmak. Rahat pompayı ve kanül (bağlantı tüpü bitiminde bükük olmamalı) implante bir kez bağlantı tüpü sığacak kadar büyük bir subkutan 'cep' oluşturmak için uzak fare arka aşağı yatan fasya cilt teşrih künt. Kafatasının dorsal yerinden fasya temizlemek kazıyın.
    3. , Yaklaşık 1.5 mm çapında diş çapak kullanarak uygun stereotaksik u koordinatları kafatası içine detayantil kemik ince, esnek bir tabaka kalır. Peel uzakta ince forseps kullanarak bu katman (bu diş çapak ile yatan dura mater ve beyin zarar önler). Emin olun kafatası herhangi bir kan ve kemik parçalarının temizlenmesi ve olduğunu başka kanıyor.
    4. Bir kanül sahibi tarafından düzenlenen kanül ile, farenin sırtını örten deri altı 'cebine' içine pompa ve bağlantı tüpü yerleştirin. Sonraki uygun stereotaksik koordinatlarda ve beynin yüzeyinde kanül ucu yerleştirin. Dikkatle beyin içine kanül düşük ama gerekli derinlik kısa yaklaşık 1 mm durdurun.
      NOT: Kalan derinliği diş akrilik ilk katman uygulanması aşağıdaki müzakere edilecektir.
    5. Kafatasının yüzeyi temiz ve kuru olduğundan emin olun tekrar, daha sonra diş akrilik küçük bir hacim hazırlamak ve th etrafında kafatası yoluyla çapak-deliğe dahil, kafatası tüm maruz alanın üzerine düzeltmek için bir kürdan kullanınE kanül. Akrilik sertleşir önce, kanül hedef haline kalan derinliğini ucu düşük.
    6. Yerinde kanül düzeltmek için, kanül beyaz plastik desteği üzerinde yanı sıra, diş akrilik başka küçük hacimli hazırlayın ve ilk aşkın bu katmanı. Gerektiğinde akrilik ilave tabakalar ile tekrarlayın.
    7. Akrilik sertleştikten sonra, dikkatle kanül tutucusunu çıkarın ve bir bütan alev ile ısıtılan bir neşter bıçak kullanarak beyaz plastik çıkarılabilir kanül sekmesini kesti. Son olarak, tüm implant üzerinde kapalı cilt sütür.
  3. Hayvanların Post-cerrahi Tedavi
    1. Cilt marjları antiseptik merhem sürün ve fare bir anti-inflamatuar yönetmek (örn Meloksikam, 3 mg / kg sc). , Çerçeve fareyi çıkarın ısı lambası altında yerleştirin, ve bilinç kavuşur kadar gözlemlemek. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir fare iade etmeyin.
      NOT: Uzmcinsiyet eşleştirme ve çevre zenginleştirme gibi erimental manipülasyonlar başlatılan veya erken ameliyat ertesi gün devam edilebilir.
    2. Kendi vücut ağırlığı, günlük genel davranış ve görünüm izleyin. Topikal antiseptik merhem cerrahi kesiler etrafında enfeksiyon belirtileri (örn şişlik, kızarıklık, irin) davranın. Gerektiğinde sistemik analjezikler ve / veya antibiyotik ile herhangi bir belirti hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık (>% 10 vücut ağırlığı, sosyal geri çekilme, damat eksikliği örneğin kaybı, "kabartmak", hareket disfonksiyon, nöbetler) davranın.
    3. >% 15 kilo kaybı ya da hastalık, ağrı, stres veya rahatsızlık belirtileri iyileştirici tedavi 1 hafta içinde olmayan geri kazanılabilir ise fareler Euthanize.

3. Beyin Doku Hazırlama, İşleme İmmunohistokimyasal ve Stereoloji

  1. Serpilme
    1. Hemen çevre / ilaç manipülasyonlar takip, çalışma için beyin hazırlamak.
    2. İlk (örneğin 100 mg / kg ip sodyum pentobarbiton) fareler öldürmek için anestezik aşırı dozda yönetmek. Bir kez anestezi ancak kalp yenerek durur önce, sırtında fare yatıyordu ve kravat ya da her iki ön ayakları aşağı pin.
    3. Bir neşter kullanılarak toraks sonra karın boşluğuna sadece göğüs kafesinin altındaki kas yoluyla insizyon örten cilt kesip. Göğüs kafesi kılıç şeklinde süreci bir kelepçe yerleştirin ve diyaframı açığa karaciğer yukarı ve uzağa göğüs kafesi kaldırın.
    4. Diyafram yoluyla ve yanal göğüs kafesi geri akciğerler ve kalbi maruz başının üzerinde katlanabilir kadar büyük makas kullanarak her iki tarafta kaburga kesti. İnce makas bir çıkış kan nokta ve perfüze çözümleri gibi sağ atrium küçük bir kesi yapmak kullanarak, daha sonra sol grupların sol ventrikül tabanı kesticle ve sol ventrikül, sol atrium aracılığıyla bir kanül yerleştirin ve aort içine.
    5. Heparinize sıcak (37 ° C) pompa sonra yerinde kanül Kelepçe ve sağ atrium çıkan çözelti kadar damar yoluyla 0.1 M fosfat tamponlu fizyolojik tuzlu su (PBS) kan tamamen ücretsizdir. Tüm fare de sabit kadar sonra, damar yoluyla soğuk (4 ° C) sabitleştirici solüsyonu (PBS gibi% 4 paraformaldehid) pompa. Beyin lavabolar kadar 2-3 gün süreyle% 30 sakaroz ile PBS beyin ve yer çıkarın.
      Not: Doku hazırlanması için daha başka türlü ilgili laboratuarda uzmanlık bağlı olarak tatbik edilebilir.
  2. Serbest yüzen kriyokesitler hazırlanması
    1. Ilgi beyin bölgeleri ile seri bölümleri kesin ve PBS bu toplamak.
      NOT: Bir sirostat kullanılarak 40 mikron kalınlığında kesitler kesti. Doku kesit diğer tipleri correspondi uzmanlık bağlı olarak uygulanabilecekng laboratuvar.
  3. İmmünohistokimya
    1. Ilgi proteinlerin için standart immunohistokimyasal gerçekleştirin. 48 saat süre ile 4 ° C'de (400 1) sonra, poliklonal biyotinlenmiş keçi anti-poliklonal tavşan anti-TH ile, daha sonra 30 dakika için immüno-reaksiyona girme oda sıcaklığında PBS içinde% 5 normal keçi serumu ve% 0.3 Triton X-100 bölümleri inkübe 2 saat süre ile, oda sıcaklığında: -rabbit (1.000 1).
    2. 18-20 dakika boyunca oda sıcaklığında ve daha sonra, kobalt ve nikel yoğun diamino-benzidin (0.5 mg / ml) 'de, 1 saat boyunca oda sıcaklığında;: Daha sonra, avidin peroksidazı (1: 500) inkübe diamino-benzidin inkübasyon son 3-5 dakika boyunca Chromagen çökelmesini katalize etmek üzere hidrojen peroksit (% 0.01) ilave edin. Önce, sonra ve yukarıdaki adımların her biri arasında PBS bölümleri 10 dakika süreyle üç kez her yıkayın.
    3. Daha sonra, hava onları kurutun, jelatinize mikroskop slaytlar üzerinde Nissl leke (nötr kırmızı) bölümleri monte, alkol, berrak (X-3B) ve lamel içinde kurutmak.
  4. Tarafsız stereolojik yöntemlerle TH + ve TH- SNc (ve VTA ve LC) nöronların toplam sayısını tahmin edin. Stereologist alınan tedaviye kör olduğundan emin olun. Soma çapı <5 mikron bazında glia Dışlama ve görünür bir çekirdeğin yalnızca bu hücreleri saymak.
  5. TH + hücreleri ve Paxinos ve Watson 7 beyin atlası göre anatomik noktalar / sınırları mekansal konumlara göre SNC (ve VTA ve LC) tanımlayın. (X = 100 mm, y = VTA ve LC 100 mm x = y 140 mikron = SNc için 140 mikron) düzenli önceden belirlenmiş aralıklarla sayma çerçevesinde TH + hücreler (55 x 55 mm = 3025 mm 2) Sayım Her Dördüncü bölümde her çekirdeğin boyunca.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Bu çevresel manipülasyonlara maruz Yetişkin fareler orta beyin numaralarını (SNc ve VTA), ancak LC değiştirmiştir, TH + nöronlar, EE artı pikrotoksin veya bicuculline ya eşzamanlı orta beyin infüzyon (GABA A reseptör antagonistleri) ve EE-indüksiyon ortadan kaldıran daha SNc TH + nöronlar. Bu veriler, daha önce 6 yayınlandı. Mevcut veriler bir önceki çalışmanın bir parçası olarak gerçekleştirilen tekrarlanan deneylerde derlendi, ama başka bir yerde yayınlanmamış olması.

Özellikle, yetişkin dişi fareler ile eşleştirilmiş olan yetişkin erkek fareler daha TH + sahip kadınlarda (Şekil 1 ile eşleştirilmiş dişilerden daha az TH + SNc ve VTA nöronlarını sahip erkekler ile eşleştirilmiş kadın ise SNc ve VTA (orta beyin) erkek ile eşleştirilmiş erkeklerden daha nöronlar, 6). Buna bir başka örnek, fo TH + SNc erkek nöronların ve dişi farelerin GD sayısı ortalama ± hemen gösterir, Şekil 1 'de burada temin edilmektedirllowing cinsiyet eşleştirme. 7 gün boyunca kadın ile eşleştirilmiş Erkekler erkek (Şekil 1 iki mavi sütun) ile eşleştirilmiş erkeklere göre yaklaşık% 12 daha fazla TH + SNc nöronlar var. Buna karşılık, erkek ile eşleştirilmiş kadın kadın (Şekil 1 iki kırmızı sütun) ile eşleştirilmiş dişilerden daha yaklaşık% 12 daha az TH + SNc nöronlar var.

TH + SNc VTA nöronların sayısı da EE (6, Şekil 2) tabi yetişkin erkek farelerde artar ve daha SNc TH + nöronların EE indüksiyon orta beyin GABA A reseptörleri (6 Şekil 3) aynı anda blokaj kaldırılmıştır. Buna bir başka örnek, araç infüzyon EE araç infüzyon (Şekil 2'de sola iki sütun) ile SH göre yaklaşık% 14 daha fazla TH + SNc nöronları neden Şekil 2, burada temin edilmektedir. Bununla birlikte, EE GABA A reseptör antagonisti infüzyonu (10 uM pikrotoksin ya da 5 ya da1; tamamen bu artış (Şekil 2 sağ iki sütun) yürürlükten kaldırılmıştır M bicuculline). Bu veri infüzyon kanül SNc taraf vardır, ve 6 bildirilmiştir ipsilateral SNc gözlenen etkilerin neredeyse aynıdır, unutmayın.

Şekil 1,
Şekil 1:. SNc TH + nöronların sayısı cinsiyet eşleştirme etkileri hemen altındaki erişkin fareler (3.1) perfüze edildi cinsiyet eşleştirme (protokol 1.1), 7 gün sonra, bunların orta beyin bölümlere ayrılmıştır (3.2), kesitler TH (tirosin hidroksilaz işlenmiştir DA sentez enzimi sınırlayıcı oranı) immünohistokimyası (3.3) ve TH + SNc nöronların sayısı) stereology (3.4 kullanılarak tahmin edilmiştir. Erkek fare (n = n = 2 erkek-erkek çiftlerinden 4 erkek fare, açık mavi sütun ile eşleştirilmiş erkek farelerde SNc TH + nöron GD sayısı ortalama ± burada çizilen) UMN, kadınlarda (eşleştirilmiş erkek çocukların n = 6 erkek-dişi çiftleri, koyu mavi sütun), kadınlarda (eşleştirilmiş kadın 6 erkek fareler n = n = 4 kadın-erkek çiftler, açık kırmızı sütun), ve 8 dişi fareler Erkeklerde (n = n 6 dişi farelerde = 6 erkek-dişi çiftleri, koyu kırmızı sütun) ile eşleştirilmiş kadın. Karşı cinse eşleştirme erkeklerde SNc TH + nöronların sayısında bir artış değil kadınlarda SNc TH + nöronların sayısında bir azalmaya neden (p <0.001 Tek yönlü ANOVA; * p <0.05 Tukey ikili çoklu karşılaştırmalar).

Şekil 2,
Şekil 2: orta beyin GABA ile çevre zenginleştirme Etkileri SNc TH + nöronların sayısı bir reseptör blokajı hemen aracın ya eşzamanlı infüzyon, GABA A reseptör antagonisti s çevre zenginleştirme (protokol 1.2) 14 gün sonra.icrotoxin (10 uM) ya da yetişkin erkek fareler perfüze edildi sol orta beyin GABA A reseptör antagonisti olarak, bicuculline (5 uM) (protokol 2) (3.1), bunların orta beyin bölümlere ayrılmıştır (3.2), bölümler (tirosin hidroksilaz işlenmiştir TH, DA sentez) immünhistokimyasal (3.3) hız kısıtlayıcı enzim ve sağ TH + nöronların sayısı (karşı) SNc) stereology (3.4 kullanılarak tahmin edilmiştir. (SH) araç infüzyon (n = 6, açık mavi sütun), çevre zenginleştirilmiş (EE) ile erkek fareler ev sahipliği standart SNc TH + nöronların GD sayısı ortalama ± burada çizilen (n = 6, ilk koyu mavi araç infüzyon ile erkekler sütun), EE, bicuculline infüzyonu (n = 6, üçüncü koyu mavi kolon) ile pikrotoksin infüzyonu (n = 6, ikinci koyu mavi sütun) ve EE erkek olan erkek. EE SNc TH + nöronların sayısında bir artışa neden, ama bu <0.001 Tek yönlü ANOVA karşı orta beyin içine pikrotoksin veya bicuculline infüzyon yoluyla (p kaldırıldı; * P <0.001 Tukey ikili çoklu karşılaştırmalar).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Çevre manipülasyonlar

Bu çevresel manipülasyonlar (cinsiyet eşleştirme ve çevresel zenginleştirme) tasarım arkasındaki motivasyon ortamına olup olmadığını belirlemek için, ve / veya çevre tarafından istendiğinde davranış, orta beyin DA nöronların sayısında değişiklikler ile ilişkilidir. Odak ortamları sağlanması ve orta beyin DA sinyal meşgul muhtemel davranışları uyarıcı nedenle oldu. Bu karşı cinse dahil eşleştirme, ve,, oyun keşfetmek tırmanmaya gizlemek için jantlar, halatlar, merdivenler, tüneller ve nesneleri çalışan ve yuva erişimi içeren çevresel zenginleştirme. Bu ortamlarda her ikisi de orta beyin DA nöronal deşarj akut artar ve DA salınımı ile ilişkili olan ödül motive bilişsel, duygusal ve motor davranışları, teşvik etmek gerektiğini (örneğin 8). Bizim hipotezi onlar da orta beyin DA sinyalizasyon br uzun ömürlü değişikliklerle ilişkili edildiorta beyin DA nöronların sayısında değişiklikler hakkında gerektiğini. Burada ve başka yerlerde 6, kanıtlar bunun gerçekten de böyle olduğunu sunulmuştur.

Araştırmalarımız bir çekirdek ilkel ve temel ödül-motive davranış (yani çiftleşme) içermesi nedeniyle cinsiyet eşleştirme protokolü (1.1) kullanmaya başladı. Ayrıca, üreme, çift-bağ ve sosyal davranışlar (oksitosin, vazopressin ve hipotalamus 9 kortikotropin salgılatıcı hormon hücrelerin yoğunluğu gibi değişiklikler) benzer diğer nörokimyasal sistemlerindeki değişiklikler uyardığı bilinmektedir. Nitekim, karşı cinse sürekli eşleştirme 7 gün sonra, biz kadın yaklaşık% 10 daha az TH + orta beyin nöronları [Not var ise erkekler yaklaşık% 10 daha fazla TH + orta beyin nöronları var 6 Burada ve başka yerlerde göstermek: Bu etkiler SNC içermektedir (Bu çalışma ve 6) ve VTA 6 değil, TH] noradrenalin sentez yardımcı locus coeruleus 6.Bu yetişkin beyninde orta beyin DA nöron sayısı sabit olmadığı düşüncesini destekler, ancak değişiklikler çevre, davranış, ya da çevre / davranış etkileşimleri bağlı. Diğer kanıtlar DA nöron veya dejenerasyon aksine bu değişiklikler, kaybolmamış orta beyin nöronların TH geni ve protein ifadesindeki değişiklikler hakkında getirdiği savunuyor. (1) yetişkin fare orta beyindeki nöron DA ya hiç 10-14, ya da bir hafta 15,16 yaklaşık 500 yeni SNc DA nöronların eklenmesi için hesap edebilirsiniz çok daha düşük hızlarda gerçekleşir. (2) orta beyin nöronlarının elektriksel aktivitesi hedef çeşitli ilaçların 2 hafta infüzyonları takip SNc nöronların sayısında bir değişiklik miktarının çalışmalar sahip sürekli net bir değişiklik ile sonuçlanır + ve TH- Th hücreleri (yine yaklaşık olarak% 10) eşit fakat karşıt bir değişiklik gözlenmedi Toplam hücre sayısı 4,5. Bu, yukarıda TH protein seviyelerinin düzenlenmesinde veya aşağıda immünhistokimyasal det ile tutarlıdırBuna ek ya da nöron çıkarma olmaksızın ectable seviyeleri. (3) pek çok çalışma, birkaç saat 17-23 bir zaman ölçeği üzerindeki hücreler içinde TH geni ve protein ekspresyonu aktivite bağımlı değişiklikler bildirilmiştir ve aynı orta beyin 4 bildirilmiştir.

Soru ve böylece günümüze kadar gelen orta beyin nöronları TH geni ve protein ifadesi değişiklikleri altında yatan mekanizmalar ne çıkar. Olasılıklar burada ve daha önce 6 bildirilen eşleştirme aşağıdaki iyi cinsiyete özgü değişiklikler (erkeklerde artış ve kadınlarda azalır) gibi, erkeklerde ve kadınlarda TH + orta beyin nöron sayısında temel farklılıklar hem temelini olabilir seks steroidler içerir. Bir başka olasılık TH ifade aktivite bağımlı düzenlemedir. SNc ve VTA nöronlar (DA olmayan DA ikisi) striatum, hipotalamus, subtalamik çekirdek ağırlıklı olarak sinaptik girdi almak, frontal korteks 24. Cinsiyet eşleştirme, bu girdilerin bağlamındaSensorimotor davranışı, koku duyusunun, feromonlar, stres, metabolizma, üreme ya da düzenlenir olabilir. Ifade TH aktivitesi bağımlı regülasyonu gen ve protein ifadesini etkileyen kalsiyum veya nöropeptid sinyaller aracılığıyla aracılık edilebilir (örneğin 1).

Orta beyin DA nöronların sayısı cinsiyet eşleştirme etkilerinin altında yatan aktivite bağımlı mekanizmalar biz seks steroid ve belki de diğer hormonların potansiyel etkisine karşı çevre zenginleştirme protokolü (1.2), daha iyi kontroller istihdam karşı (cinsiyet steroid ayırt yardımcı olmak için örneğin feromonlar, stres, üreme) ve afferent odaklı nöronal aktivitenin potansiyel etkisi için. Burada ilgili faktör farklı gruplar cinsiyet açısından (her erkek), hormonlar, sosyal statü ve stres çok daha benzer olduğunu. Sosyal statü ve stres hala (gruplar arasında farklılık olsa da, örneğin bir daha baskın ve saldırgan erkekbir grup), bu her zaman aynı gruba (örneğin EE) ve EE etkileri artık birden çok kez 6 çoğaltılmış olacağını olası değildir. EE, orta beyin TH + nöronların artış büyüklüğü cinsiyet eşleştirme protokolü aynı idi (Şekil 1 ve 2 bu çalışmada erkek karşılaştırın ve 1 & 2 6'da Rakamlar). Ayrıca, çevre zenginleştirme tarafından uyarılan SNc TH + nöronlarda EE kaynaklı artış tamamen orta beyin DA bütün afferent yaklaşık% 70 sağlayan orta beyin GABA A reseptörleri (Şekil 2 Bu çalışmada ve 6 Şekil 3), eşzamanlı abluka tarafından kaldırıldı 25 nöronlar. Birlikte, bu veriler afferent-odaklı sinirsel aktivite hormonlar gibi orta beyin DA nöronların sayısı üzerinden en az güçlü bir etkisi olduğunu göstermektedir.

Facto çevre içine daha fazla fikirorta beyin TH + nöronların sayısı düzenleyen rs RW ve EE etkilerini karşılaştırarak geliyor. EE daha çeşitli olsa, böyle bir etkinlik benzer miktarda içermektedir (yani çeşitli oyuncaklar ama değişmeden 14 gün boyunca), artı yeni oyuncaklara devam eden maruz oysa RW, iyi öğrendim veya sıradan motor aktivite (tekerlekler üzerinde çalışan) içerir SE bileşen (1.2.4). Bizim daha önce yayınlanmış veriler 6 ortaya ya hiç ya da SH farelere kıyasla RW SNc ve VTA TH + nöronların küçük artışlar, ancak EE (+ SE) farelerde çok daha büyük artışlar. Bu tek başına sıradan fiziksel aktivite daha Ortabeyin DA nöronların sayısının daha güçlü düzenleyiciler gibi duyusal stimülasyon, biliş, yenilik ve / veya öğrenme ve hafıza vurgulamaktadır.

EE Alzheimer, Huntington ve Parkinson hastalığı 26 beyin bozuklukları, çeşitli hayvan modellerinde beyin onarım terapötik etkilere neden ve geliştirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. naBu tür çevresel manipülasyon Ture onlar, ancak dikkat çekicidir ve daha önce yapılmış 27 tartıştık EE protokollerinin önemli yönleri vardır ('standart ev sahipliği şartlarını gibi) laboratuarlar arasında yaygın farklılık olduğunu. Duyusal stimülasyon, bilişsel aktivite ve fiziksel egzersiz seviyelerini arttırmak amacıyla EE, çevre yenilik ve standart konut göre karmaşıklığı artmıştır sağlar. EE deney tasarlama, bir hayvan duyusal ve bilişsel yetenekleri ve kendi içgüdüsel sürücüler dahil etolojik faktörleri dikkate almak gerekiyor. Fareler (ve sıçanlar) insanlarda ama mükemmel somatosensory ve koku keskinliği aşağı görme yetenekleri ile, gece olduğundan, zenginleştirme nesneleri deney hayvanlarının doğal içgüdüleri ve kapasitelerini yansıtmalıdır. Bu nedenle, bu fareler özellikle belirgin olabilir nesnelerin yenilik, şekil, doku ve koku. Kemirgenlerden Moti göreli gücü değerlendirmelerçiğnenebilir nesneler dahil fırsat temel olarak, türe tipik davranışları 28,29 egzersiz izin vermek için zenginleştirme nesneler çeşitli lerden önerilmesine. yuvalama malzeme sağlanması, böylece duyusal, bilişsel ve motor faaliyetleri 30,31 için fırsat sağlayarak, içgüdüsel kağıt veya karton herhangi bir nesne gözyaşı zenginleştirme protokolü ve farelerin temel bileşeni olarak kabul edilir. Bu, nesnelerin eşdeğer yenilik ve karmaşıklığı EE grubu içindeki varyans en aza indirmek için, ve çevre parametrelerinin benzer bir kontrol SH grubu için dikkat edilmelidir, sağlanan çok sayıda enerji verimliliği kafesleri ile bir deney de önemlidir. İdeal olarak, kafes başına farelerin sayısı EE ve SH grupları (sosyal grup büyüklüğünün etkisi özellikle araştırılmaktadır sürece) arasında aynı olmalıdır ve hayır 'gıda davranır' gruplar arasında herhangi bir diyet farklılıklar gibi, EE kullanılması gerektiğini olabilir şaşırtmak tEE 12 artırır bilişsel aktivite ve fiziksel egzersizin etkilerinin de yorumlanması. Diğer önemli hususlar zenginleştirilmiş çevreye maruz kalma süresi ve zenginleştirme başlayacağı yaşı vardır. Genlerin farklı sunum-zenginleştirilmiş bir ortamda 32, sadece 3 saat sonra gösterilmiş olmasına rağmen, maruz kalma süresinin uzunluğu 33,34 meydana yapısal ve işlevsel değişiklikler gerekli olabilir. Ayrıca, zenginleştirme kaynaklı plastisite doğum sonrası kritik gelişimsel dönemler 35 sırasında gelişmiş olabilir.

İlaç infüzyon için ozmotik pompa ve beyin infüzyon kanül implantlar

ozmotik pompa ve kanül implant doğrudan beyne ilaçların verilmesi için çok etkilidir. Tecrübesi ile, implant cerrahisi fare başına yaklaşık 1 saat sürer. Yalnız Diş akrilik genişletilmiş süre (Not yerinde kanül düzeltmek için yeterli: Biz o 28 güne kadar gittiTher deneyler); örneğin kemik vidaları gibi ek bağlantı donanımı için bir ihtiyaç vardır. Bu bağlantıları çok fazla stres koymadan maksimum baş ve boyun fleksiyonu için izin pompa ve kanül bağlantı borusunun gevşeklik bol sağlamak için önemlidir. Bu, özellikle, böylece implantın esnekliği azaltan pompa etrafında bağ dokusu büyüme yerde demir edebilirsiniz uzun vadeli infüzyon için böyledir. Mümkünse, fareler de tek yer, çizilmemesi çekerek ya da ısırma yoluyla implant zarar housemates önlemek için ameliyat şunlardır. İlacın dozu, büyük ölçüde pompaya miktarının ilave edilen miktarına göre tespit edilir. Bununla birlikte, bu açıdan dikkat da pompa akış hızından, 37 ° C 'de, ilacın kimyasal stabilite ve beyin boyunca kanül ilacın difüzyon oranına dikkat edilmelidir. Şu anda bizim satıcı pompaları 0.15 ul / saat akış hızında kadar 6 hafta boyunca infüzyon muhafaza edebilir; hızlıest mevcut akış hızı 10 ul / saat ama sadece 1 hafta süren bir. Daha uzun infüzyon süreleri (implante edilmiş bir kanül bozmadan örneğin), bağlantı borusunun arka tam pompalarla tükenmiş pompa yerine az miktardaki ek ameliyatları gerçekleştirerek elde edilebilir. Bir kanül ucu difüzyon (% 0.9 NaCl içinde% 1 metilen mavisi, MW 320), metilen mavisinin uzaysal boyutunu da mediyolateral yönü boyunca sola SNc ortasından üzerinde 0.3 mm orta beyin lateral kenarına uzanacak şekilde ölçülmüştür implante sadece mediolaterally orta hat boyunca ve orta beyinin tüm dorsoventral ölçüde boyunca (infüzyon 2 hafta sonra). Bu çok daha yaygın SNc gibi küçük bir çekirdeğin daha, ve ilacın yayılması vb onun MW, kimyasal kararlılık, tamponlama, üzerinde Nitekim, bir mevcut verilerden çıkarabiliriz bağlı büyük (veya daha küçük) olabilir (Şekil 2) bu pikrotoksin ve bicuculline hem biyolojik olarak aktif konsantrasyon derecesinden de karşı SNC ulaştıEklentiler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isofluorane Baxter Healthcare Pty Ltd, Baxter Drive, NSW 2146, Australia AHN3640
ALZET Osmotic pump 1002 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0004317
ALZET Brain infusion kit 1 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0004760
ALZET cannula holder 1 DURECT Corporation, PO Box 530 Cupertino, CA 95015-0530 0008860
Vertex Monomer Self-curing (dental acrylic solvent) Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands n/a
Vertex Self Curing (dental acrylic powder) Vertex Dental, Postbus 10, 3700 AA ZEIST, The Netherlands n/a
METACAM (Meloxicam) Troy Laboratories, 98 long Street, smithfield NSW 2164 Australia L10100
Sodium Pentobarbitone Lethabarb, Virbac, Milperra, NSW, Australia 571177
Normal goat serum chemicon-temecula, CA S26-Litre
Triton X-100 Merck Millipore Headquarters , 290 Concord road, Billerica, MA 01821 1.08603.1000
Polyclonal rabbit anti-tyrosine hydroxylase Merck Millipore Headquarters , 290 Concord road, Billerica, MA 01821 AB152
Polyclonal biotinylated goat anti-rabbit Dako Australia Pty. Ltd., Suite 4, Level 4, 56 Berry street, North Sydney, NSW, Australia 2060 EO432
Avidin peroxidase Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU A3151-1mg
Diamino-benzidine Sigma-aldrich, Castle Hill, NSW 1765 AU D-5637
Stereo Investigator MicroBrightField Bioscience, 185 Allen Brook Lane, Suite 101, Williston, VT 05495 n/a

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Aumann, T., Horne, M. Activity-dependent regulation of the dopamine phenotype in substantia nigra neurons. Journal of neurochemistry. 121, 497-515 (2012).
  2. Sauer, H., Oertel, W. H. Progressive degeneration of nigrostriatal dopamine neurons following intrastriatal terminal lesions with 6-hydroxydopamine: a combined retrograde tracing and immunocytochemical study in the rat. Neuroscience. 59, 401-415 (1994).
  3. Stanic, D., Finkelstein, D. I., Bourke, D. W., Drago, J., Horne, M. K. Timecourse of striatal re-innervation following lesions of dopaminergic SNpc neurons of the rat. The European journal of neuroscience. 18, 1175-1188 (2003).
  4. Aumann, T. D., et al. Neuronal activity regulates expression of tyrosine hydroxylase in adult mouse substantia nigra pars compacta neurons. Journal of neurochemistry. 116, 646-658 (2011).
  5. Aumann, T. D., et al. SK channel function regulates the dopamine phenotype of neurons in the substantia nigra pars compacta. Experimental neurology. 213, 419-430 (2008).
  6. Aumann, T. D., Tomas, D., Horne, M. K. Environmental and behavioral modulation of the number of substantia nigra dopamine neurons in adult mice. Brain and behavior. 3, 617-625 (2013).
  7. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The mouse brain in stereotaxic coordinates. , 2nd, Academic Press. (2001).
  8. Schultz, W. Behavioral dopamine signals. Trends in neurosciences. 30, 203-210 (2007).
  9. Sun, P., Smith, A. S., Lei, K., Liu, Y., Wang, Z. Breaking bonds in male prairie vole: long-term effects on emotional and social behavior, physiology, and neurochemistry. Behavioural brain research. 265, 22-31 (2014).
  10. Aponso, P. M., Faull, R. L., Connor, B. Increased progenitor cell proliferation and astrogenesis in the partial progressive 6-hydroxydopamine model of Parkinson's disease. Neuroscience. 151, 1142-1153 (2008).
  11. Frielingsdorf, H., Schwarz, K., Brundin, P., Mohapel, P. No evidence for new dopaminergic neurons in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 10177-10182 (2004).
  12. Lie, D. C., et al. The adult substantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 6639-6649 (2002).
  13. Chen, Y., Ai, Y., Slevin, J. R., Maley, B. E., Gash, D. M. Progenitor proliferation in the adult hippocampus and substantia nigra induced by glial cell line-derived neurotrophic factor. Experimental neurology. 196, 87-95 (2005).
  14. Yoshimi, K., et al. Possibility for neurogenesis in substantia nigra of parkinsonian brain. Ann Neurol. 58, 31-40 (2005).
  15. Shan, X., et al. Enhanced de novo neurogenesis and dopaminergic neurogenesis in the substantia nigra of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced Parkinson's disease-like mice. Stem Cells. 24, 1280-1287 (2006).
  16. Zhao, M., et al. Evidence for neurogenesis in the adult mammalian substantia nigra. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 7925-7930 (2003).
  17. Baker, H., Kawano, T., Margolis, F. L., Joh, T. H. Transneuronal regulation of tyrosine hydroxylase expression in olfactory bulb of mouse and rat. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 3, 69-78 (1983).
  18. Black, I. B., Chikaraishi, D. M., Lewis, E. J. Trans-synaptic increase in RNA coding for tyrosine hydroxylase in a rat sympathetic ganglion. Brain research. 339, 151-153 (1985).
  19. Zigmond, R. E., Chalazonitis, A., Joh, T. Preganglionic nerve stimulation increases the amount of tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 20, 61-65 (1980).
  20. Biguet, N. F., Rittenhouse, A. R., Mallet, J., Zigmond, R. E. Preganglionic nerve stimulation increases mRNA levels for tyrosine hydroxylase in the rat superior cervical ganglion. Neuroscience letters. 104, 189-194 (1989).
  21. Richard, F., et al. Modulation of tyrosine hydroxylase gene expression in rat brain and adrenals by exposure to cold. Journal of neuroscience research. 20, 32-37 (1988).
  22. Schalling, M., Stieg, P. E., Lindquist, C., Goldstein, M., Hokfelt, T. Rapid increase in enzyme and peptide mRNA in sympathetic ganglia after electrical stimulation in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 86, 4302-4305 (1989).
  23. Liaw, J. J., He, J. R., Barraclough, C. A. Temporal changes in tyrosine hydroxylase mRNA levels in A1, A2 and locus ceruleus neurons following electrical stimulation of A1 noradrenergic neurons. Brain research. Molecular brain research. 13, 171-174 (1992).
  24. Watabe-Uchida, M., Zhu, L., Ogawa, S. K., Vamanrao, A., Uchida, N. Whole-brain mapping of direct inputs to midbrain dopamine neurons. Neuron. 74, 858-873 (2012).
  25. Tepper, J. M., Lee, C. R. GABAergic control of substantia nigra dopaminergic neurons. Progress in brain research. 160, 189-208 (2007).
  26. Hannan, A. J. Environmental enrichment and brain repair: harnessing the therapeutic effects of cognitive stimulation and physical activity to enhance experience-dependent plasticity. Neuropathology and applied neurobiology. 40, 13-25 (2014).
  27. Nithianantharajah, J., Hannan, A. J. Enriched environments, experience-dependent plasticity and disorders of the nervous system. Nature reviews. Neuroscience. 7, 697-709 (2006).
  28. Chmiel, D. J., Noonan, M. Preference of laboratory rats for potentially enriching stimulus objects. Laboratory animals. 30, 97-101 (1996).
  29. Hanmer, L. A., Riddell, P. M., Williams, C. M. Using a runway paradigm to assess the relative strength of rats' motivations for enrichment objects. Behavior research methods. 42, 517-524 (2010).
  30. Burrows, E. L., McOmish, C. E., Hannan, A. J. Gene-environment interactions and construct validity in preclinical models of psychiatric disorders. Progress in neuro-psychopharmacology & biological psychiatry. 35, 1376-1382 (2011).
  31. Van de Weerd, H. A., Van Loo, P. L. P., Van Zutphen, L. F. M., Koolhaas, J. M., Baumans, V. Strength of preference for nesting material as environmental enrichment for laboratory mice. Applied Animal Behaviour Science. 55, 369-382 (1998).
  32. Rampon, C., et al. Effects of environmental enrichment on gene expression in the brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 12880-12884 (2000).
  33. Eckert, M. J., Abraham, W. C. Effects of environmental enrichment exposure on synaptic transmission and plasticity in the hippocampus. Current topics in behavioral neurosciences. 15, 165-187 (2013).
  34. Sztainberg, Y., Chen, A. An environmental enrichment model for mice. Nature protocols. 5, 1535-1539 (2010).
  35. Sale, A., Berardi, N., Maffei, L. Environment and brain plasticity: towards an endogenous pharmacotherapy. Physiological reviews. 94, 189-234 (2014).

Tags

Nörobilim Sayı 95 Davranış orta beyin tirozin hidroksilaz dopamin plastisite siyah madde pars compacta
Yetişkin Farelerde Orta beyin dopamin Nöronlar Sayısının Çevre Modülleri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tomas, D., Prijanto, A. H., Burrows, … More

Tomas, D., Prijanto, A. H., Burrows, E. L., Hannan, A. J., Horne, M. K., Aumann, T. D. Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice. J. Vis. Exp. (95), e52329, doi:10.3791/52329 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter