Summary
Chronisch geïnstrumenteerd niet-verdoofde foetale schapen model wordt toegepast om menselijke foetale ontwikkeling in gezondheid en ziekte te bestuderen, omdat het toestaat chirurgische plaatsing en onderhoud van catheters en elektroden herhaalde bloedafname, stof injectie, opname van bio-elektrische activiteit en in vivo imaging. We beschrijven de vereiste om dit model vast te stellen procedures.
Introduction
Een verscheidenheid van dierlijke modellen bestaan voor de studie van normale en gecompromitteerd zwangerschappen, waaronder knaagdieren, primaten en huishoudelijke herkauwers. 1,2,3,4,5 Chronisch geïnstrumenteerde zwangere schapen is uitgebreid gebruikt voor 50 jaar een model van foetale ontwikkeling en reacties mens op pathofysiologische stimuli zoals lipopolysaccharide (LPS). 10/06 De laesies na blootstelling aan LPS nabootsen wat wordt gezien bij prematuren met periventriculaire leukomalacia, die als gevolg van vergelijkbaar rijpingsprocessen profiel van beide soorten. 11, 12
Andere zwangerschapscomplicaties hebben ook onderzocht in detail, zoals de ontdekking dat prenatale glucocorticoïden bevorderen longontwikkeling 13-15 en inzicht in de impact van Dysmaturiteit (IUGR) op de foetus 16,17.
Het uitgebreide gebruik van foetaal schapen model vanwege de uniqUE ontvankelijkheid van de niet-verdoofde foetaal schapen om de chirurgische plaatsing en onderhoud van catheters en elektroden, waardoor herhaalde bloedafname opnemen van bio-elektrische activiteit, de toepassing van elektrische stimulatie en in vivo beeldvorming van de hersenen. 18 Telemetrie is ook mogelijk, hoewel minder gebruikte maar vanwege de hogere verfijning te zetten als de aanvankelijke en onderhoudskosten. 19
Bovendien is de foetale schapen model is zeer veelzijdig vele variaties van instrumentatie zijn mogelijk afhankelijk van de maten van belang. Zo is het mogelijk voor opnemen dagen tot weken multivariate signalen in real time als foetale ademhalingsbewegingen elektrische hersenactiviteit, cardiovasculaire reacties, elektrocardiogram, doorbloeding een reeks organen gebruik stroming probes of microbolletjes, etc. Dankzij Deze veelzijdigheid, hebben een breed scala van studies uitgevoerd met inbegrip van de ontwikkeling van de Cardiovascular systeem 20,21, hypothalamus-hypofyse-bijnier (HPA) as 22, ontwikkeling van de hersenen ontwikkeling van 23 en slaap staten in het bijzonder 24, de effecten van hypoxie / asfyxie 25, therapeutische hypothermie 26, ontsteking 6-11, een combinatie van beide 27, glucocorticoïden 28,29, anti-depressiva 30, bronchopulmonale dysplasie (BPD) 31,32, foetale programmering 33,34,35,36,37,38,39 of de ontwikkeling van nieuwe foetale bewaking modaliteiten voor en tijdens de bevalling om maar een paar gebieden van onderzoek. 40,41,42,43
Het algemene doel van de gepresenteerde methode is om basisimplementatie dit veelzijdige model tonen. Het maakt vaststelling diverse acute en chronische experimentele protocollen bestuderen foetale fysiologie en pathofysiologie op de integratieve, orgaan, cellulair en moleculair niveau.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dierverzorging volgde de richtlijnen van de Canadese Raad van Animal Care en de goedkeuring door de Universiteit van Montreal Raad over Animal Care (protocol # 10-Rech-1560). Gedetailleerde informatie inzake materialen en methoden is te vinden in tabel 1.
1. Anesthesie
- Plaats een single-lumen katheter in een halsader.
- Sedate de ooi behulp acepromazine (Atravet 10 mg / ml) 2 mg intraveneus ongeveer 30 minuten voor de inductie van anesthesie om stress in verband met de procedure die op zijn beurt vermindert cortisol verminderen.
- Dien diazepam (diazepam 5 mg / ml) 20 mg, ketamine (Ketalar 100 mg / ml) 4-5 mg / kg propofol (Propofol 10 mg / ml) 0,5 tot 1 mg / kg intraveneus algemene anesthesie.
- Plaats een luchtweg uitwisseling katheter in de luchtpijp met behulp van een laryngoscoop met een Wisconsin lameltype (Extra-lange 350 mm linkshandige Blade) om te helpen met de intubatie. Schuif het silicium endotracheale buis (9 tot 12 mm binnendiameter) van de luchtwegen uitwisseling katheter en in de luchtpijp. Deze techniek vergemakkelijkt het proces intubatie. Opblazen van de manchet van de endotracheale tube zorgvuldig te druk geïnduceerde ulcera van de luchtpijp te vermijden en fixeren de buis om de kop van de ooi.
- Sluit de endotracheale buis naar de luchtwegen circuit van de verdoving machine en beginnen mechanische ventilatie onmiddellijk. Pas ventilator instellingen naar een P een CO 2 binnen de normale grenzen van 35 tot 45 mm Hg te handhaven.
- Plaats een katheter in de auriculaire slagader (22-20 G; 1 in [0,9 x 25 mm] om 1.16 in [1,1 x 30 mm]) en sluit aan niet-conforme slang aan directe arteriële bloeddruk te controleren.
- Gebruik maken van een multi-parameter fysiologische monitor op het elektrocardiogram, directe arteriële bloeddruk, zuurstofverzadiging (SpO 2), capnografie opnemen (P ET CO 2), en de temperatuur om de 5 min. Breng alle physiologic gegevens via een seriële kabel aan op een centrale fysiologische data-verzamelen computer. Onderhouden normale lichaamstemperatuur met behulp van een circulerende water deken.
- Dien een gebalanceerde poly-ionische oplossing bij 10 mL / kg voor de eerste uur van algemene anesthesie en vervolgens reduceren tot 5 ml / kg / h.
- Dien trimethoprim-sulfadoxine 5 mg / kg IV van het ooi vlak voor de huid snede antibiotische profylaxe.
- Gebruik standaard aseptische technieken met alle chirurgische manipulaties van de ooi en de foetus.
- Barrière verpleegkundige de ooien te allen tijde. Dit omvat ook de niet-chirurgische personeel. Hierdoor wordt de kans op enzoötische bijvoorbeeld Coxiella burnetii minimaliseren. Gebruik handschoenen en maskers (N-95 type) te allen tijde.
2. Overzicht van de chirurgische procedure
- Maak een 20 cm middellijn incisie door de onderste buikwand direct craniaal van de uier door de linea alba om buikspier schade te minimaliseren.
- Retract de grotere omentum craniaal en de baarmoeder hoorns worden handmatig gepalpeerd. Palperen elke hoorn uit het lichaam van de baarmoeder naar de punt van de hoorn opmerken het aantal foetus en hun grootte. Als er meerdere foetus, kies dan de grootste foetus door het evalueren handmatig hoofdomvang en de breedte tussen de banen.
- Houd het hoofd van de gekozen foetus stevig door de baarmoeder gedeeltelijk exteriorized. Voer een 10 cm hysterotomie op het grote kromming met Metzenbaum schaar. Leg direct via head een niet-steriele latex chirurgische handschoenen gevuld met een steriele zoutoplossing alsof het een hand. U kunt ook gebruik maken van vochtige 4x4's om de foetale hoofd vochtig te houden. Bevestig de uterus naar de buikwand.
- Exterioriseren de rechter en linker thoracale ledematen en trek de foetus voorzichtig uit de baarmoeder tot aan de xyphoid proces.
- Plaats polyvinyl katheters in de rechter en linker arm ader en slagaders met een standaard cut-down-techniek. Plaats another polyvinyl katheter in de amnionholte door fixeren zijn uiteinde aan het borstbeen van de foetus.
- Gebruik alleen steriele catheters. We raden gassterilisatie in uw standaard installatie. Hechten elke katheter naar een naald en de naald van een dubbele kraan om voor later bloedafname of druk monitoring.
- Hechten RVS elektroden op de manubrium, zwaardvormig proces en voor elk punt van de schouder naar het elektrocardiogram monitor (ECG).
- De terugkeer van de foetus in de baarmoeder. Alle katheters en elektroden verlaten via een kleine incisie in de linker flank.
- Sluit de laparotomie incisie met een drie lagen gesloten. Hecht de buikwand met een synthetisch absorbeerbaar monofilament hechtmateriaal USP 2 in een eenvoudige continue wijze. Sluit de subcutane ruimte met een synthetische absorbeerbare gevlochten hechtmateriaal USP 0 op een eenvoudige continue wijze. Gebruik chirurgisch roestvrij staal nietjes de incisie te sluiten.
- Verwijder wol scheren xyphoid het proces om de borstklier en langs de vouw van de flank aan weerszijden met een mes # 40. Reinig de ventrale abdomen vervolgens grondig met 4% chloorhexidinegluconaat en een zachte borstel voor 3 min.
- Voer een standaard steriele scrub met chloorhexidinegluconaat 4% vanaf het midden van de buik en vordert in een centrifugale mode gedurende 3 min. Pour steriele zoutoplossing op de buik om de desinfecterende zeep te verwijderen. Voor de laatste stap van de chirurgische voorbereiding voeren drie afwisselende passages van chloorhexidine gluconaat oplossing 2% isopropanol en 70%.
- Zorg ervoor dat de diepte van de anesthesie is voldoende voorafgaand aan de incisie. Maak een standaard laparotomie insnijding van de navel tot net craniaal van de uier door de linea alba om buikspier schade te minimaliseren.
- Plaats een lange spons tang in de buik langs de linker buikwand omhoogde geplande uitgangsplaats voor katheters in de paracostal regio.
- Duw de uiteinden van de tang tegen de wand tot een assistent kan lokaliseren en bevestigen juiste plaats. Open licht (1 cm) de kaken van de tang en laat de assistent maakt een 2 cm volledige dikte steek incisie.
- Exterioriseren de uiteinden van de tang door de incisie, weer openen en voorzichtig grijpen de katheters van de tang die uiteindelijk uit de buik wordt getrokken door de ventrale abdominale incisie. Van de nota, sommige groepen implanteren de katheters en exterioriseren hen. Dit heeft het nadeel dat intrasurgical foetale ECG bewaking niet mogelijk.
- Palperen de baarmoeder foetale positie en getallen bepalen. Bepaal de grootste foetus met behulp van de inter-auditieve afstand. Incise de baarmoederwand op het grote kromming in het dorsale gedeelte van de kop, het vermijden van de zaadlobben.
- Plaats een stompe canule via de placenta membranen om een uur te verkrijgenniotic vloeistofmonster vrij van bloeding. Incise de placentale membranen met een schaar.
- Exterioriseren de craniale helft van de foetus via deze incisie. Plaats een steriele niet-latex chirurgische handschoen gevuld met steriele zoutoplossing bij 37 ° C via foetus head om normothermia handhaven.
- Tijdens het verwijderen van de foetale bovenlichaam van de uterus, de assistent houd de Babcock tot het verlies van vruchtwater voorkomen. Vervolgens opnieuw met Babcock tang, klem de foetale membranen en baarmoederwand de huid abdominale verontreiniging met vruchtwater voorkomen.
- Bloot alleen de delen van de foetale lichaam die moeten worden geïnstrumenteerd en houden de overige delen in de baarmoeder of onder vochtige en warme (37 ° C) steriele doeken, respectievelijk.
- Ontvoeren zowel thoracale ledematen blootstelling aan de slagader en ader bilateraal vergemakkelijken. Incise langs de mediale aspect van zowel antebrachium en zorgvolledig ontleden rond de slagader en ader.
- Plaats polyvinyl katheters in de linker en rechter brachialis slagaders en de linker arm ader met een standaard cut-down-techniek.
- Bevrijd het vaartuig kan worden gecatheteriseerd van aangrenzend weefsel meer dan 1 cm. Afbinden het distale gedeelte van het schip met een gevlochten synthetische absorbeerbare USP 2-0 hechtdraad. Preplace een ligatuur aan het proximale aspect van het schip, maar houd het ongebonden.
- Met behulp van Castroviejo schaar, knip het schip dwars op ongeveer 30% van de diameter. Stop de bloedstroom gedeeltelijk door aan de proximale hechtdraad. Een katheter in een proximale richting.
- Steek de polyvinyl katheter tot 8 cm proximaal of totdat weerstand wordt gedetecteerd en trek iets terug. Tijdelijk veilig de proximale aspect van de katheter met behulp van een vasculaire klem. Plaats een hechting rond zowel de proximale en distale aspect van de katheter. Een assistent is continu aspirating en doorspoelen van de katheter doorgankelijkheid van de catheter te verzekeren.
- Sluit de foetale huid met behulp van een USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtdraad, met een doorlopende hechting patroon.
- Bevrijd het vaartuig kan worden gecatheteriseerd van aangrenzend weefsel meer dan 1 cm. Afbinden het distale gedeelte van het schip met een gevlochten synthetische absorbeerbare USP 2-0 hechtdraad. Preplace een ligatuur aan het proximale aspect van het schip, maar houd het ongebonden.
- Aan de rechter en linker schouder, manubrium en xyphoid proces, fixeren een geïsoleerde roestvrij staal elektrode naar de monitoring van het foetale ECG te vergemakkelijken.
- Hecht de amniotische druk en bemonstering katheter het borstbeen. Deze katheter wordt gefenestreerd aan zijn uiteinde.
- Beveilig alle katheters op het dorsale gedeelte van de foetus met behulp van een USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal.
- Voor de vervanging van de foetus in de baarmoeder weer toedienen clenbuterol 30 ug IV langzaam 15 min hypotensie vermijden en uterus verschaffen.
- Hechten de foetale membranen met behulp van USP 4-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal met een doorlopend patroon. Nemen slechts een katheter of elektrode op een moment in de closure om een strakke sluiting te garanderen. Gebruik een dubbele laag Cushing patroon respect Halsted principes om de baarmoeder spierlaag te sluiten met behulp van een USP 0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal. Begraaf de chirurgische knopen zorgvuldig.
- Met behulp van een portemonnee-string hechtdraad patroon, zet alle katheters en ECG-kabels als ze links paracostal incisie te verlaten.
- Met behulp van een USP 2 monofilament synthetische absorbeerbare hechtmateriaal zet de linea alba met een doorlopend patroon. Sluit de onderhuidse weefsels met behulp van USP 2-0 gevlochten synthetische absorbeerbare hechtmateriaal met een doorlopend patroon. Zet de huidlaag met chirurgische nietjes.
- Dien 250 mg ampicilline intraveneus en weer via de katheter in het vruchtwater amnionholte. Vervang verloren vruchtwater met warme zoutoplossing.
- Plaats alle exteriorized katheters en ECG-elektroden in een plaats zak om de steriliteit te behouden. Plaats een stockinette rond de romp van de ooi aan alle katheters een veiligd elektroden op het lichaam van de ooi.
- Stoppen met algemene anesthesie, en extuberen de ooi ooit laryngeale reflexen zijn teruggekeerd naar normaal.
- Breng de ooi een metabole kooi zodra ze stabiel is volgende algemene anesthesie. De ooi wordt de metabole kooi gedurende de duur van het experiment bevinden. De ooi moet in staat zijn om op te staan, liggen en eten ad libitum, terwijl het toezicht op de niet-verdoofde foetus zonder sederende de moeder.
- Voor de volgende drie dagen toedienen antibiotica profylactisch de ooi (trimethoprim sulfadoxine 5 mg / kg) en foetus (250 mg ampicilline intraveneus en weer via de amniotische catheter).
- Evalueer de metabole status van zowel de ooi en de foetus met behulp van bloed gas analyse.
- Spoel alle katheters met minimaal volume van gehepariniseerde zoutoplossing mogelijk. Voorzichtig - niet de dagelijkse dosis heparine en vloeistoffen mag de foetus overschrijden. Het is mogelijk om overvulling van de foetus. Flush langzaam een keereen dag ~ 5 ml NaCl per lijn na antibiotische profylaxe.
- Tijdens de operatie, eventueel registreren de maternale en foetale ECG en hartslag en maternale arteriële bloeddruk en luchtwegdruk (Paw) continu (figuur 1). Gebruik de Life Window Monitor om alle moeders data te verwerven, behalve ECG. Feed dit gegevens in analoog-digitaal omzetter met foetale en maternale ECG-signalen; passeren maternale en foetale ECG eerst in 1901 voorversterker. Opnemen en weergeven van alle gegevens in de software van de fabrikant.
- Neem een 1 mL arterieel monster tegelijk uit het ooi en foetus voor arteriële bloedgasanalyse, lactaat, glucose en base-overmaat bepaling (in plasma) aan het begin van de foetale chirurgie (direct na het inbrengen van de eerste arteriële katheter) en na het sluiten van de uterus .
- Tijdens postoperatief herstel, raadpleeg 3 mL foetaal bloedmonster aan de IL-6 en TNF-α Inflamm metenAtory profielen. Centrifugeer het plasma bij 4 ° C (4 min, 4000 x g), decanteren en bewaar het plasma bij -80 ° C voor daaropvolgende ELISA testen.
Opmerking: Ten behoeve van de gerapporteerde representatieve resultaten, zes dagen na de operatie werden de dieren opgeofferd via intraveneuze injectie van 20 ml natriumpentobarbital. Foetale groei werd beoordeeld door het lichaam, hersenen, lever en maternale gewicht. De duur van de experimentele periode zal uiteraard variëren afhankelijk van de gekozen voor de specifieke vraagstelling ontwerp en kan oplopen tot ~ 6 weken.
- Bepaal concentraties cytokine (IL-6, TNF-α) in plasma onder toepassing van een schaap-specifieke sandwich ELISA. Pre-coat muis-anti-schaap monoklonale antilichamen (invangantilichaam IL-6) of muizen anti-runder monoclonaal antilichaam (TNF-α) in een concentratie 4 pg / ml op ELISA-plaat bij 4 ° C O / N na 3 keer wassen met wasbuffer (0,05% Tween 20 in PBS, PBST).
- Blokkeer de platen gedurende 1 uur met 1% BSA in PBST. Was de platen met wasbuffer 3 keer.
- Gebruik schapen recombinante eiwitten (IL-6, TNF-α) ELISA standaard stelt een seriële verdunningen variëren van standaard 1 van 2000 ng / ml standaard 7 van 31,25 pg / ml.
- Belasting 50 pl seriële verdunde standaarden eiwitten en samples per putje en incubeer gedurende 2 uur bij KT, was de platen 3 keer. Lopen alle normen en monsters in tweevoud.
- Breng 50 gl van konijnen anti-schaap polyklonale antilichamen (detectieantilichaam IL-6) of konijn anti-runder polyklonaal antilichaam (TNF-α) bij een verdunning van 1: 250 in putjes en incubeer gedurende 30 min bij kamertemperatuur. Was de platen met wasbuffer 5 keer.
- Voeg 50 ul van de geit anti-konijn IgG-HRP geconjugeerd (verdunning 1: 5000) gedurende 30 min.
- Incubeer bij 50 pl TMB-substraatoplossing per putje.
- Stop kleurontwikkeling reactie bij gewenste tijdstip met 25 pl 2 N zwavelzuur.
- Lees de plAtes op ELISA-plaat lezer bij 450 nm, met een 570 nm golflengte correctie.
Noot: In onze testen van de gevoeligheid van IL-6 ELISA was 16 pg / ml, de gevoeligheid van TNF-a ELISA was 13,9 pg / ml, respectievelijk. Voor alle assays, de intra-assay en inter-assay-coëfficiënten van variatie was <5% en <10%, respectievelijk.
Opmerking: De exacte technieken zullen afhangen van de vraagstelling. Hier rapporteren we de gebruikte testen significante verschillen in de bloedgassen in tabel 2 methoden.
- Test normale gegevens verspreiden via Kolmogorov-Smirnov-test, gevolgd door parametrische of niet-parametrische testen met correctie voor meerdere vergelijkingen, naargelang het geval.
- Met K-means cluster analyse om de foetussen in het cohort die spontaan hypoxische waren de respectieve pO 2 en O 2 za waarden te identificeren en te bepalen (denk pO 2 <20 mmHg of O 2 Sat <55% als fetal hypoxie). 44-48
- Gebruik statistische software zoals SPSS voor de analyses.
- Heden data als gemiddelde ± SD statistische verschillen bij p <0,05 als significant.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
38 zwangere-time gedateerde ooien werden geïnstrumenteerd bij 128 ± 2 dagen van de dracht (dGA, ~ 0,88 zwangerschap, term 145 dGA) met arteriële, veneuze en vruchtwater katheters en het elektrocardiogram (ECG) elektroden met steriele techniek onder algemene verdoving (zowel ooi en foetus ). In geval van een tweelingzwangerschap is de grotere foetus gekozen op basis van palpatie en het schatten van de intertemporele diameter; alternatief kan de foetus worden geïnstrumenteerd willekeurig gekozen om mogelijke vertekening te voorkomen of beide foetussen worden geïnstrumenteerd. De totale duur van de procedure was 124 ± 27 min. Het gedeelte van de foetale bovenlichaam worden geïnstrumenteerd bleef buiten de baarmoeder voor 92 ± 19 min. De meeste ooien geïnstrumenteerde waren F2 dieren. Hun dam was F1 (Border Leicester * Romanov) en de vader was een Hampshire ram; - Border Leicester (25%) - Romanov (25%) = HABLRV Hampshire (50%): zij waren als volgt gekruist.
Representatieve maternale en foetale fysiologischekenmerken tijdens de operatie en instrumentatie zijn getoond in figuur 1 en zijn binnen de fysiologische norm voor de zwangerschapsduur van de foetus en moederlijk gedrag tijdens anesthesie.
Moederlijke gewichten gemiddeld 75 ± 11 kg en 21 van de 38 uitgevoerde tweelingen (dat wil zeggen, met een snelheid van 1,6 ± 0,5). Op het moment van de lijkschouwing (134 ± 3 dGA), onder de geïnstrumenteerde foetussen eenlingen woog 4090 ± 800 g terwijl het gewicht van een tweeling 'was lager in 3300 ± 740 g (p = 0,003). Het gewicht van uninstrumented tweelingen op 3300 ± 670 g was gelijk aan het gewicht van de geïnstrumenteerde tweelingen (p = 0,78). 18 van de geïnstrumenteerde foetussen waren vrouwen en 20 mannen waren.
De dynamiek van foetale arteriële bloedgassen, glucose en zuur-base-status gedurende de operatie en postoperatief herstel worden in Tabel 1 We observeerden een geleidelijk herstel van foetale zuur-base status en een aanzienlijke slijtage van zuurstof met weinig verandering in gGlucose en elektrolyten uit post-operatieve dagen 1 tot 3. Met name op postoperatieve dag 3, 42% van de foetussen bleken spontaan hypoxie met arteriële pO 2 11 mmHg en O 2 za van 28%. De normoxische cluster foetale pO 2 werd gecentreerd op 22 mmHg en O 2 za 56%. Tweeling foetussen waren niet meer hypoxie dan singleton foetussen (p = 0,26).
Foetale arteriële IL-6 ELISA weergegeven waarden onder de drempel van 16 pg / ml gedurende de postoperatieve herstelperiode. Ook de TNF-α bleven ongewijzigd en zeer laag 29 pg / ml met ~ 30% van de dieren ook met waarden beneden de drempel van 13,9 pg / ml gedurende de postoperatieve herstelperiode.
Figuur 1. Intrasurgical moeder en foetale bewaking. FHR, foetale hartslag in beats per minuut (bpm); fECG, foetaal elektrocardiogram (V); PAW, moeder positive airway pressure (mmHg); MABP, maternale arteriële bloeddruk (mmHg); MHR, maternale hartslag (bpm); mECG, maternale ECG (V). De X-as is de tijdschaal in de hh: mm. Ss Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2. Spontane foetale hypoxie en het lichaamsgewicht. Geen relatie tussen foetaal lichaamsgewicht en arteriële pO 2 bij post-operatieve dag 3 werd gedetecteerd (Spearman R = 0,326, p = 0,161). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken .
| ACE Lichtbron | Schott-Fostec | ||
| Ontleden schaar | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Schuine ontleden schaar | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Scalpel handvat | Fine Science Tools | 10003-12 | alternatieve ontleden hulpmiddel |
| Gebogen scalpelmesjes # 12 | Fine Science Tools | 10012-00 | alternatieve ontleden hulpmiddel |
| Bot schaar | Fine Science Tools | 16044-10 | |
| S & T hechtdraad koppelverkoop tang | Fine Science Tools | 00272-13 | |
| Dumont SS tang - hoek | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| Gevlochten zijden hechtdraad grootte 6-0 | Teleflex Medical | 07 -30-10 | |
| Medische Tape | Transpore | 3M | |
| Ketamine hydrochloride 100 mg / ml | Hospira | NDC 0409 - 2051 - 05 | Final Does is 80 mg / kg |
| Tranqui Ved Injectie (xylazine 100 mg / ml) | Vecdo | NDC 50989 - 234 - 11 | Final Does is 10 mg / kg |
| Reactieve oranje 14 | Sigma - Aldrich | R - 8254 | |
| Ringers Solution Components | Oplossing wordt gas in evenwicht gebracht met 95% O2 en 5% CO2, uiteindelijke pH 7,4 | ||
| Sodium chloride | Sigma - Aldrich | S7653 | Eindconcentratie: 118 mM |
| Kaliumchloride | Fisher Scientific | P217 - 3 | Eindconcentratie 4,7 mM |
| Calciumchloride dihydrate | Fisher Scientific | C79 - 500 | Eindconcentratie 2,5 mM |
| Kalium monobasisch | Fisher Scientific | P -285 | Eindconcentratie 1,2 mM |
| Magnesiumsulfaat | JT Baker | Jan-00 | Eindconcentratie: 0,57 mM |
| 4- (2-hydroxyethyl) piperazine-1-ethaansulfonzuur (HEPES) | Fisher Scientific | BP 310 - 500 | Eindconcentratie: 5,95 g / l |
| Glucose | Sigma - Aldrich | G8270 | Eindconcentratie 5,5 mM |
| LifeWindow | DigiCare Biomedische Technologie | ||
| CED bioamplifier en ADC-eenheden | Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE ENGELAND. | <td> Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisitie software: Spike 2, V7.13 ||
| Neurolog analoog signaal bioamplifier | Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, Engeland | NL108A | |
| ABL800Flex | Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, Londen, ON N5V 4N2 | ||
| Eppendorf 5804R | Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, # 2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2 | ||
| Arrow Jugular Catheterisatie Set | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA | ||
| Atravet | 10 mg / ml | ||
| Diazepam | 5 mg / ml | ||
| Ketamine | Ketalar | <td> 100 mg / ml | |
| Propofol | 10 mg / ml | ||
| SurgiVeT | Endotracheale Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA | ||
| Cook Airway Exchange Catheter met RAPI-FIT Adapters | Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA | ||
| Dispomed Ventilator | Dispomed Ltd, 745 Nazaire-Laurin, Joliette Quebec J6E 0L6 | ||
| BD Insyte-W | Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84.070 USA | 22-20 G; 1 in [0,9 x 25 mm] om 1.16 in [1,1 x 30 mm] | |
| Edwards Lifesciences Ref: PX272 Drukbewaking kit met TruWave Wegwerp Pressure | |||
| LifeWindow LW6000 | DigiCare Biomedisch Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA | ||
| Gaymar | |||
| Babcock | |||
| Polyvinyl catheters | SCI (Scientific Commodities Inc.) | 2 meter | |
| 2-0 Vicryl | |||
| Castroviejo schaar | |||
| elektrocardiogram (ECG) | LIFYY, Metrofunk Kabel-Unie, Berlijn, Duitsland | vier koperen elektroden in enkele schede, 2 meter | |
| 2-O Vicryl | |||
| 3-0 Vicryl | |||
| PDS II USP | |||
| Trimethoprim sulfadoxine | |||
| Ampicilline | |||
| Afsluitkraan | Argon Medical, Cat 041220001A | Dubbele 4-weg kraan met mannelijke luer lock | |
| Naalden | Tyco Healthcare 8881202389 | Monoject aluminium hub botte naalden, 22Gx, 0.7mmx 38,1 mm: voor foetale arteriële en veneuze katheters | |
| Naalden | Tyco Healthcare 8881202322 | Monoject aluminium hub botte naalden, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: voor amniotic catheters |
Tabel 1. specifieke reagentia / Equipment.
Klik hijopnieuw voor een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Tabel 2. Totaal overzicht foetaal bloedgassen, metabolieten en elektrolyten tijdens chirurgie en postoperatief herstel. Foetale arteriële pH, pCO 2 (mmHg), pO 2 (mmHg), zuurstofverzadiging (O 2 Za%), glucose (mg / dl), lactaat (mmol / L) en de basis overtollig (mmol / L) op verschillende tijdstippen van de instrumentatie en herstel periodes: start foetale chirurgie onmiddellijk na het installeren van de eerste foetale arteriële katheter (baarmoeder geopend), eind foetale chirurgie's (uterus gesloten), postoperatieve dagen 1 tot en met 3. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De anesthetische en chirurgische procedures worden die nodig zijn voor het opzetten van een diermodel voor de studie foetale fysiologie en pathofysiologie: chronisch geïnstrumenteerd niet-verdoofde foetaal schapen.
Vier kritische stappen in het protocol moet worden benadrukt. Ten eerste, langs de catheters en elektroden door het moederlijke flank: het is belangrijk dat dit tegelijkertijd gebeurt aan een inwendig orgaan letsel te voorkomen. Ten tweede, het veiligstellen van de uterotomy operationele plaats voorafgaand aan exteriorizing de foetus: dit is van cruciaal belang om te voorkomen of het verlies van vruchtwater en de daaropvolgende hechten van de amnionmembraan voorafgaand aan de sluiting van de baarmoeder te minimaliseren. Ten derde arterieel katheteriseren: foetaal schapen slagaders ongeveer 1-2 mm in diameter en dus niet moeilijk te katheteriseren van een ervaren chirurg; een team van twee chirurgen presteert het beste en snelste in deze taak die helpt besparen tijd om de totale lengte van de procedure te minimaliseren. Ten vierde, zorgvuldige secijdens en organisatie van alle katheters en elektroden in de amnionholte voorafgaand aan de terugkeer van de foetus in de amnion en sluiten van de baarmoeder: dit helpt om te voorkomen dat per ongeluk het trekken van de katheters of scheuren van de ECG-elektroden te wijten aan de moeder of foetale bewegingen na de operatie.
In plaats van de hier gepresenteerde benadering brachialis schepen, katheteriseren carotis of femorale vaten kunnen worden toegepast. De keuze hangt af van de algemene benadering instrumentatie die op hun beurt worden bepaald door de onderzoeksopzet. We raden de tijd doorbrengt de foetus buiten de baarmoeder minimaliseren en de mate waarin de foetus moet buiten de baarmoeder nog worden geïnstrumenteerd minimaliseren. Deze overwegingen leidden tot de keuze van de vaten geïnstrumenteerde in de gepresenteerde "minimal benadering". We raden catheterizing slagaderen aan beide zijden mogelijk te maken voor intra-arteriële bloeddruk controle en arteriële bloedafname zonder wederzijdse interferentie gedurende thij experimenteren. Een bijkomend voordeel is de fail-safe redundantie deze aanpak introduceert: in het geval een slagader heeft geblokkeerd tijdens de experimentele periode, bemonstering en druk monitoring mogelijk vanaf hetzelfde vat met het nadeel van het onderbreken van de bewaking bij bloedafname wordt gedaan.
Er zijn drie beperkingen, die een bredere aanpassing van dit diermodel uitsluiten. Deze beperkingen kunnen worden aangepakt door enkele wijzigingen hieronder voorgesteld. Ten eerste is de vereiste bioveiligheidsniveau 2 opsluitingen in sommige jurisdicties. Dit is vanwege het risico van Coxiella burnetii infectie van zwangere schapen bij mensen met een verzwakt immuunsysteem. 49,50 Vaccinatie is beschikbaar voor de dieren en mensen blootgesteld dit risico 51,52 en PCR tests kunnen worden gedaan om geen daling positieve dieren worden geleverd aan het onderzoek faciliteit van de boerderij. Een oplossing kan zijn voor vaccinatie van dieren combineren met meerdere PCR-tests op het bedrijf van de vaginale uitstrijkjes voorafgaand aan kweek beginnen vóór aflevering en vervolgens opnieuw van het vruchtwater tijdens de operatie. Deze voorzorgen in sommige jurisdicties het gebruik van schapen in onderzoek niet beperkt als in andere. Ten tweede, de kosten per dier in de onderste vier-cijferige range, vergelijkbaar met wat muizen knockout stammen. Daartoe maar de informatiewinst uit elke foetale schapen experiment vergelijkt uitsluitend aan niet-humane primaten als het gaat om de grote hoeveelheid gegevens die kan worden verzameld, de vragen die worden gesteld en de mogelijkheden van vertaling naar het menselijke wijten de timing van de ontwikkeling van organen bij schapen. Ten derde is er de kwestie van voortplanting en beschikbaarheid dieren gedurende bepaalde tijden in het jaar alleen. Zelfs met een hormonale behandeling, resultaten van schapen voortplanting, zoals zwangerschap en de vitaliteit van de lammeren (foetussen) bevredigend zijn maar een paar maanden rond natuurlijke broedseizoen. 53 Vandaar experimental plannen vereist een zorgvuldige planning van de jaren gesplitst in een herfst en de lente seizoenen. Een oplossing kan zijn om september tot november en een april tot juni experimentele schapen seizoenen stellen. Dit probleem is ook een deugd, aangezien hierdoor de tijd om de vele gegevens tijdens elke experimentele seizoen verzameld analyseren.
Er is een aantal factoren die bijdragen aan de betekenis met betrekking tot bestaande werkwijzen. De morfometrische, cardiovasculaire en bloedgas gegevens die waren binnen het bereik van de soort 54,55 en lijken op die van menselijke species 56, een groot voordeel van dit diermodel. Een uitzondering is het hogere tarief van meervoudige zwangerschappen in vergelijking met humane twinning. 57 Dit is echter ook een deugd van het model, het bestuderen van de effecten van twinning op de foetale ontwikkeling is een belangrijke biomedische taak. 55,58,59 Zeer lage niveaus van de post -operative ontsteking zoals gemeten door IL-6 en TNF-α ELISAin combinatie met het herstel van het zuur-base-status aan te geven dat de foetus chirurgisch instrumentarium goed wordt verdragen en de postoperatieve herstelperiode van 72 uur is voldoende om een stabiele basislijn conditie van de foetale schapen zorgen voor de aanvang van een experiment. Hoog percentage spontane gematigde chronische hypoxia op korte termijn van foetaal schapen maakt ze interessant Modelmatige chronische effecten van menselijke prenatale hypoxie en inflammatie op foetale en perinatale ontwikkeling, zoals bijvoorbeeld IUGR en perinatale beledigingen, zoals ontsteking en acute asfyxie. 60,61,62 Verschillende IUGR schapen modellen gebruikt, wat een beroep op spontane hypoxia, wat induceren door placenta embolisatie, bijv. 16,63-66 Anderzijds, ernstige hypoxie voor aanvang van een experiment kan ook een uitsluiting criterium in gevallen waarin bijvoorbeeld hart- of centrale zenuwstelsel moeten worden bestudeerd zijn, zoals hier de reacties van chronisch hypoxische foetussen eenre bekende verschillen van degenen die normoxische. 60 Een andere belangrijke toepassing is het bestuderen van prenatale maternale schokbelasting op de foetale en postnatale ontwikkeling. 5,67 slotte, zoals blijkt uit de talloze geciteerde publicaties met dit model, de foetale instrumentatie kan worden verricht in een breed scala van zwangerschapsduur leeftijden overal van ~ 70-135 dGA overeenkomt met het midden van de zwangerschap - korte termijn studies van de ontwikkeling van de foetus. Met de voortschrijdende zwangerschapsduur, instrumentatie steeds complexer zijn mogelijk, maar overwegingen van de duur van chirurgische instrumenten moeten worden afgewogen tegen de noodzaak om een aantal multivariate opnames bij dezelfde foetus.
Een aantal veelbelovende toekomstige toepassingen van de gepresenteerde techniek is afgeleid van het steeds groeiende aantal schapen-specifieke moleculaire biologie reagentia en recente schapen genoom. Deze recente ontwikkelingen zijn verder bevorderd dit ANIMAl model naar een veelbelovend en krachtige aanpak van het begrip van gezonde en pathologische menselijke foetale ontwikkeling op verschillende schalen van organisatie, van (epi) genoom integratieve fysiologie zijn. 68 69-74
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ACE Light source | Schott-Fostec | A20500 | |
| Dissecting scissors | Fine Science Tools | 14060 - 11 | |
| Angled dissecting scissors | Fine Science Tools | 15006 - 09 | |
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003 - 12 | alternating dissecting tool |
| Curved scalpel blades #12 | Fine Science Tools | 10012 - 00 | alternating dissecting tool |
| Bone scissors | Fine Science Tools | 16044 - 10 | |
| S & T suture tying forceps | Fine Science Tools | 00272 - 13 | |
| Dumont SS forceps - angled | Fine Science Tools | 11203 - 25 | |
| Braided silk suture size 6-0 | Teleflex Medical | 07 - 30 - 10 | |
| Medical Tape | transpore | 3M | |
| Ketamine hydrochloride 100 mg/ml | Hospira | NDC 0409 - 2051 - 05 | Final Does is 80 mg/kg |
| Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml) | Vecdo | NDC 50989 - 234 - 11 | Final Does is 10 mg/kg |
| Reactive orange 14 | Sigma - Aldrich | R - 8254 | |
| Ringers Solution Components | Solution is gas equilibrated with 95% O2 and 5% Co2, final pH 7.4 | ||
| Sodium chloride | Sigma - Aldrich | S7653 | Final Concentration: 118 mM |
| Potassium chloride | Fisher Scientific | P217 - 3 | Final Concentration: 4.7 mM |
| Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientific | C79 - 500 | Final Concentration: 2.5 mM |
| Potassium phosphate monobasic | Fisher Scientific | P -285 | Final Concentration: 1.2 mM |
| Magnesium sulfate | J.T. Baker | Jan-00 | Final Concentration: 0.57 mM |
| 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES) | Fisher Scientific | BP 310 - 500 | Final Concentration: 5.95 g/L |
| Glucose | Sigma - Aldrich | G8270 | Final Concentration: 5.5 mM |
| LifeWindow | Digicare Biomedical Technology | ||
| CED bioamplifier and ADC units | Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE ENGLAND. |
Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13 | |
| Neurolog analog signal bioamplifier | Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, England |
NL108A | |
| ABL800Flex | Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2 | ||
| Eppendorf 5804R | Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2 |
||
| Arrow Jugular Catheterization Set | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA | ||
| Atravet | 10 mg/ml | ||
| Diazepam | 5 mg/ml | ||
| Ketamine | Ketalar | 100 mg/ml | |
| Propofol | 10 mg/ml | ||
| SurgiVeT | Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA | ||
| Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters | Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA | ||
| Dispomed Ventilator | Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6 | ||
| BD Insyte-W | Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA | 22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] to 1.16 in [1.1 x 30 mm] | |
| Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure | |||
| LifeWindow LW6000 | Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA | ||
| Gaymar | |||
| Babcock | |||
| Polyvinyl catheters | SCI (Scientific Commodities Inc.) | 2 meters | |
| 2-0 Vicryl | |||
| Castroviejo scissors | |||
| electrocardiogram (ECG) | LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany | four copper electrodes in single sheath, 2 meters | |
| 2-O Vicryl | |||
| 3-0 Vicryl | |||
| PDS II USP | |||
| Trimethoprim sulfadoxine | |||
| Ampicillin | |||
| Stopcock | Argon Medical, Cat 041220001A | Double 4-way Stopcock with male luer lock | |
| Needles | Tyco Healthcare 8881202389 | Monoject aluminum hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: for fetal arterial and venous catheters | |
| Needles | Tyco Healthcare 8881202322 | Monoject aluminum hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: for amniotic catheters |
References
- Barry, J. S., Anthony, R. V. The pregnant sheep as a model for human pregnancy. Theriogenology. 69, 55-67 (2008).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
- Rees, S., Inder, T. Fetal and neonatal origins of altered brain development. Early Hum Dev. 81, 753-761 (2005).
- Rees, S., Harding, R., Walker, D. The biological basis of injury and neuroprotection in the fetal and neonatal brain. Int J Dev Neurosci. 29, 551-563 (2011).
- Moisiadis, V. G., Matthews, S. G. Glucocorticoids and fetal programming part 1: Outcomes. Nat rev Endocrinol. 10, 391-402 (2014).
- Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin Fetal Neonatal Med. 11, 343-353 (2006).
- Gotsch, F., et al. The fetal inflammatory response syndrome. Clin Exp Obstet Gynecol. 50, 652-683 (2007).
- Svedin, P., Kjellmer, I., Welin, A. K., Blad, S., Mallard, C. Maturational effects of lipopolysaccharide on white-matter injury in fetal sheep. J child neurol. 20, 960-964 (2005).
- Nitsos, I., et al. Chronic exposure to intra-amniotic lipopolysaccharide affects the ovine fetal brain. J Soc Gynecol Investig. 13, 239-247 (2006).
- Yan, E., Castillo-Melendez, M., Nicholls, T., Hirst, J., Walker, D. Cerebrovascular responses in the fetal sheep brain to low-dose endotoxin. Pedia res. 55, 855-863 (2004).
- Dean, J. M., et al. Delayed cortical impairment following lipopolysaccharide exposure in preterm fetal sheep. Ann Neurol. 70, 846-856 (2011).
- Dobbing, J., Sands, J.
- Liggins, G. C. Premature parturition after infusion of corticotrophin or cortisol into foetal lambs. J Endocrinol. 42, 323-329 (1968).
- Liggins, G. C. Premature delivery of foetal lambs infused with glucocorticoids. J Endocrinol. 45, 515-523 (1969).
- Liggins, G. C., Fairclough, R. J., Grieves, S. A., Kendall, J. Z., Knox, B. S. The mechanism of initiation of parturition in the ewe. Recent Prog Horm Res. 29, 111-159 (1973).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
- Robinson, J. S., Hart, I. C., Kingston, E. J., Jones, C. T., Thorburn, G. D. Studies on the growth of the fetal sheep. The effects of reduction of placental size on hormone concentration in fetal plasma. J Dev Physiol. 2, 239-248 (1980).
- Carmel, E., et al. Fetal brain MRI - experiences in the ovine model of cerebral inflammatory response. Repro sci. 19 (3), 347A-348A (2012).
- Samson, N., Dumont, S., Specq, M. L., Praud, J. P. Radio telemetry devices to monitor breathing in non-sedated animals. Respir Physiol Neurobiol. 179, 111-118 (2011).
- Thakor, A. S., Giussani, D. A. Effects of acute acidemia on the fetal cardiovascular defense to acute hypoxemia. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, R90-R99 (2009).
- Green, L. R., Kawagoe, Y., Homan, J., White, S. E., Richardson, B. S. Adaptation of cardiovascular responses to repetitive umbilical cord occlusion in the late gestation ovine fetus. J Physiol. 535, 879-888 (2001).
- Unno, N., et al. Changes in adrenocorticotropin and cortisol responsiveness after repeated partial umbilical cord occlusions in the late gestation ovine fetus. Endocrinology. 138, 259-263 (1997).
- Muller, T., et al. Developmental changes in cerebral autoregulatory capacity in the fetal sheep parietal cortex. J Physiol. 539, 957-967 (2002).
- Keen, A. E., Frasch, M. G., Sheehan, M. A., Matushewski, B., Richardson, B. S. Maturational changes and effects of chronic hypoxemia on electrocortical activity in the ovine fetus. Brain Res. 1402, 38-45 (2011).
- Ross, M. G., et al. Correlation of arterial fetal base deficit and lactate changes with severity of variable heart rate decelerations in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 208, e281-e286 (2013).
- Gunn, A. J., Gunn, T. R., de Haan, H. H., Williams, C. E., Gluckman, P. D. Dramatic neuronal rescue with prolonged selective head cooling after ischemia in fetal lambs. J Clin Invest. 99, 248-256 (1997).
- Xu, A., Piorkowska, K., Matushewski, B., Hammond, R., Richardson, B. S. Adaptive Brain Shut-Down Counteracts Neuroinflammation in the Near-Term Ovine Fetus. 60th Meeting of the Society for Gynecologic Investigation, 20 (3), Reproductive Sci. 222A (2013).
- Derks, J. B., et al. A comparative study of cardiovascular, endocrine and behavioural effects of betamethasone and dexamethasone administration to fetal sheep. J Physiol Lond. 499, 217-226 (1997).
- Lohle, M., et al. Betamethasone effects on fetal sheep cerebral blood flow are not dependent on maturation of cerebrovascular system and pituitary-adrenal axis. J Physiol. 564, 575-588 (2005).
- Morrison, J. L., et al. Maternal fluoxetine infusion does not alter fetal endocrine and biophysical circadian rhythms in pregnant sheep. J Soc Gynecol Investig. 12, 356-364 (2005).
- Allison, B. J., et al. Ventilation of the very immature lung in utero induces injury and BPD-like changes in lung structure in fetal sheep. Pediatr Res. 64, 387-392 (2008).
- Rozance, P. J., et al. Intrauterine growth restriction decreases pulmonary alveolar and vessel growth and causes pulmonary artery endothelial cell dysfunction in vitro in fetal sheep. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301, L860-L871 (2011).
- Fowden, A. L., Giussani, D. A., Forhead, A. J. Endocrine and metabolic programming during intrauterine development. Early hum dev. 81, 723-734 (2005).
- Nathanielsz, P. W., Hanson, M. A. The fetal dilemma: spare the brain and spoil the liver. J Physiol. 548, 333 (2003).
- Manikkam, M., et al. Fetal programming: prenatal testosterone excess leads to fetal growth retardation and postnatal catch-up growth in sheep. Endocrinology. 145, 790-798 (2004).
- Savabieasfahani, M., et al. Fetal programming: testosterone exposure of the female sheep during midgestation disrupts the dynamics of its adult gonadotropin secretion during the periovulatory period. Biol Reprod. 72, 221-229 (2005).
- Bergen, N. H., et al. Fetal programming alters reactive oxygen species production in sheep cardiac mitochondria. Clin Sci (Lond). 116, 659-668 (2009).
- Cox, L. A., et al. A genome resource to address mechanisms of developmental programming: determination of the fetal sheep heart transcriptome. J Physiol. 590, 2873-2884 (2012).
- Mahoney, M. M., Padmanabhan, V. Developmental programming: impact of fetal exposure to endocrine-disrupting chemicals on gonadotropin-releasing hormone and estrogen receptor mRNA in sheep hypothalamus. Toxicol Appl Pharmacol. 247, 98-104 (2010).
- Blad, S., Welin, A. K., Kjellmer, I., Rosen, K. G., Mallard, C. ECG and Heart Rate Variability Changes in Preterm and Near-Term Fetal Lamb Following LPS Exposure. Reprod Sci. 15, 572-583 (2008).
- Frasch, M. G., et al. Heart rate variability analysis allows early asphyxia detection in ovine fetus. Reprod Sci. 16, 509-517 (2009).
- Frasch, M. G., Keen, A. E., Gagnon, R., Ross, M. G., Richardson, B. S. Monitoring fetal electrocortical activity during labour for predicting worsening acidemia: a prospective study in the ovine fetus near term. PLoS One. 6, e22100 (2011).
- Durosier, L. D., et al. Sampling rate of heart rate variability impacts the ability to detect acidemia in ovine fetuses near-term. Front pedia. 2, 38 (2014).
- Danielson, L., McMillen, I. C., Dyer, J. L., Morrison, J. L. Restriction of placental growth results in greater hypotensive response to alpha-adrenergic blockade in fetal sheep during late gestation. J Physiol. 563, 611-620 (2005).
- Edwards, L. J., Simonetta, G., Owens, J. A., Robinson, J. S., McMillen, I. C. Restriction of placental and fetal growth in sheep alters fetal blood pressure responses to angiotensin II and captopril. J Physiol. 515 (Pt 3), 897-904 (1999).
- Xu, A., et al. Adaptive brain shut-down counteracts neuroinflammation in the near-term ovine fetus. Front neurol. 5, 110 (2014).
- Xu, A., et al. The Ovine Fetal and Placental Inflammatory Response to Umbilical Cord Occlusions With Worsening Acidosis. Reprod Sci. 22 (11), (2015).
- Wang, X., Durosier, L. D., Ross, M. G., Richardson, B. S., Frasch, M. G. Online detection of fetal acidemia during labour by testing synchronization of EEG and heart rate: a prospective study in fetal sheep. PLoS One. 9, e108119 (2014).
- Reid, A., Malone, J. Q fever in Ireland A seroprevalence study of exposure to Coxiella burnettii among Department of Agriculture workers. Occ med. 54, 544-547 (2004).
- Roest, H. I., Bossers, A., van Zijderveld, F. G., Rebel, J. M. Clinical microbiology of Coxiella burnetii and relevant aspects for the diagnosis and control of the zoonotic disease Q fever. Vet quart. 33, 148-160 (2013).
- Neill, T. J., Sargeant, J. M., Poljak, Z. The effectiveness of Coxiella burnetii vaccines in occupationally exposed populations: a systematic review and meta-analysis. Zoonoses and public health. 61, 81-96 (2014).
- Roest, H. I., Bossers, A., Rebel, J. M. Q fever diagnosis and control in domestic ruminants. Dev biol. 135, 183-189 (2013).
- Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physilo. 579, 893-907 (2007).
- Rurak, D., Bessette, N. W. Changes in fetal lamb arterial blood gas and acid-base status with advancing gestation. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R908-R916 (2013).
- Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physiol. 579, 893-907 (2007).
- Frasch, M. G., et al. Measures of acidosis with repetitive umbilical cord occlusions leading to fetal asphyxia in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 200, 200.e1-207.e1 (2009).
- The ESHRE Capri Workshop Group.
- Frasch, M. G. Re The perinatal development of arterial pressure in sheep: effects of low birth weight due to twinning. Reproductive sciences (Thousand Oaks, Calif.). 15, 863-865 (2008).
- Hancock, S. N., Oliver, M. H., McLean, C., Jaquiery, A. L., Bloomfield, F. H. Size at birth and adult fat mass in twin sheep are determined in early gestation. J Physiol. 590, 1273-1285 (2012).
- Wassink, G., Bennet, L., Davidson, J. O., Westgate, J. A., Gunn, A. J. Pre-existing hypoxia is associated with greater EEG suppression and early onset of evolving seizure activity during brief repeated asphyxia in near-term fetal sheep. PLoS One. 8, e73895 (2013).
- Mathai, S., et al. Acute on chronic exposure to endotoxin in preterm fetal sheep. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R189-R197 (2013).
- Heuij, L. G., et al. Synergistic white matter protection with acute-on-chronic endotoxin and subsequent asphyxia in preterm fetal sheep. J neuroinflam. 11, 89 (2014).
- Gagnon, R., Challis, J., Johnston, L., Fraher, L. Fetal endocrine responses to chronic placental embolization in the late-gestation ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 170, 929-938 (1994).
- Miller, S. L., Supramaniam, V. G., Jenkin, G., Walker, D. W., Wallace, E. M. Cardiovascular responses to maternal betamethasone administration in the intrauterine growth-restricted ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 201, 613.e1-613.e8 (2009).
- Regnault, T. R., et al. The relationship between transplacental O2 diffusion and placental expression of PlGF, VEGF and their receptors in a placental insufficiency model of fetal growth restriction. J Physiol. 550, 641-656 (2003).
- Wallace, J. M., Aitken, R. P., Cheyne, M. A. Nutrient partitioning and fetal growth in rapidly growing adolescent ewes. J reprod and fertil. 107, 183-190 (1996).
- Rakers, F., et al. Effects of early- and late-gestational maternal stress and synthetic glucocorticoid on development of the fetal hypothalamus-pituitary-adrenal axis in sheep. Stress. 16, 122-129 (2013).
- Jiang, Y., et al. The sheep genome illuminates biology of the rumen and lipid metabolism. Science. 344, 1168-1173 (2014).
- Begum, G., et al. Epigenetic changes in fetal hypothalamic energy regulating pathways are associated with maternal undernutrition and twinning. FASEB J. 26, 1694-1703 (2012).
- Byrne, K., et al. Genomic architecture of histone 3 lysine 27 trimethylation during late ovine skeletal muscle development. Anim Genet. 45, 427-438 (2014).
- Lie, S., et al. Impact of embryo number and maternal undernutrition around the time of conception on insulin signaling and gluconeogenic factors and microRNAs in the liver of fetal sheep. Am J physiol Endocrinol. 306, E1013-E1024 (2014).
- Nicholas, L. M., et al. Differential effects of maternal obesity and weight loss in the periconceptional period on the epigenetic regulation of hepatic insulin-signaling pathways in the offspring. FASEB J. 27, 3786-3796 (2013).
- Wang, K. C., et al. Low birth weight activates the renin-angiotensin system, but limits cardiac angiogenesis in early postnatal life. Physiol rep. 3, (2015).
- Zhang, S., et al. Periconceptional undernutrition in normal and overweight ewes leads to increased adrenal growth and epigenetic changes in adrenal IGF2/H19 gene in offspring. FASEB J. 24, 2772-2782 (2010).
