Summary
Хронически приборами без анестезии плода модель овец используется для изучения развития плода человека в норме и патологии, потому что это позволяет хирургического размещение и обслуживание катетеров и электродов, отбор проб повторяющихся крови, инъекции вещества, записи биоэлектрической активности, и в естественных изображений. Опишем процедуры, необходимые для установления этой модели.
Introduction
Разнообразие моделей животных существует для изучения нормальных и скомпрометированных беременности, в том числе лабораторных грызунов, приматов и домашних жвачных. 1,2,3,4,5 Хронически приборами беременной овцы широко используется в течение 50 лет, как модель развития плода и ответов человека на патофизиологических стимулы, такие как липополисахарида (ЛПС). 6-10 Поражения следующие экспозиции LPS имитировать именно то, что видел у недоношенных новорожденных с перивентрикулярного лейкомаляции, что из-за подобной созревания профиль обоих видов. 11, 12
Другие осложнения беременности были также изучены в мельчайших подробностях, таких как открытие, что дородовой глюкокортикоиды содействия развитию легких 13-15 и понимания воздействия внутриутробной задержки роста (ЗВУР) плода на 16,17.
Широкое использование модели плода овец связано с UniqUE аменабельность не-наркозом плода овец в хирургической размещения и обслуживания катетеров и электродов, что позволяет проб повторяющиеся крови, записи биоэлектрической активности, применение электрической стимуляции и в естественных изображений мозга. 18 телеметрии тоже можно, хотя и менее часто используются но из-за более высокой сложности в настроить, а также начальной и поддерживающей стоимости. 19
Кроме того, модель плода овцы очень универсальны, как много вариаций приборов возможны в зависимости от мер, представляющих интерес. Например, можно выполнить запись нескольких дней до недель многомерных сигналов в режиме реального времени, такие как плода дыхательных движений, электрической активности головного мозга, сердечно-сосудистых реакций, ЭКГ, регионарного кровотока к ряду органов с использованием зондов потока или микросфер и т.д. Благодаря это универсальность, широкий диапазон исследований были проведены в том числе развития Кардиovascular система 20,21, гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой (HPA) оси 22, развитие мозга развитие 23 и сна государства, в частности, 24, эффекты гипоксии / асфиксия 25, терапевтической гипотермии 26, воспаление 6-11, комбинация обоих 27, глюкокортикоиды 28,29, антидепрессанты 30, бронхо-легочной дисплазии (БЛД) 31,32 плода программирование 33,34,35,36,37,38,39 или разработка новых методов мониторинга плода до и во время родов, чтобы имя, но несколько областей исследования. 40,41,42,43
Общая цель метода, изложенного, чтобы показать базовую реализацию этой разносторонней модели. Это позволяет устанавливать широкий спектр острых и хронических экспериментальных протоколов, обучающихся плода физиологии и патофизиологии на интегративной, орган, клеточном и молекулярном уровнях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Уход за животными следуют рекомендациям Канадского совета по уходу за животными и утверждения Университета Монреаля совета по уходу за животными (протокол # 10-Речь-1560). Подробная информация о материалах и методах, используемых предоставляется в таблице 1.
1. Анестезия
- Вставьте один-катетер в яремную вену.
- Седативный овца с помощью ацепромазин (Atravet 10 мг / мл) 2 мг внутривенно примерно 30 мин до индукции анестезии в целях снижения стресса, связанного с процедурой, которая, в свою очередь снижает уровень кортизола.
- Администрирование диазепам (Диазепам 5 мг / мл) 20 мг кетамина (100 Ketalar мг / мл) 4-5 мг / кг и пропофол (Пропофол 10 мг / мл) от 0,5 до 1 мг / кг внутривенно, чтобы вызвать общую анестезию.
- Вставьте обмена дыхательных путей катетер в трахею, используя ларингоскоп с лезвием типа Висконсин (Экстра-длинные 350 мм левша Blade), чтобы помочь с интубации, Слайд кремния эндотрахеальную трубку (от 9 до 12 мм Внутренний диаметр) от обмена дыхательных путей катетер и в трахею. Эта техника облегчает процесс интубации. Манжету эндотрахеальной трубки осторожно, чтобы избежать давления, вызванного изъязвление трахеи и зафиксировать трубу в голове овцы.
- Подключите эндотрахеальную трубку в дыхательные цепи наркозно-дыхательного аппарата и немедленно начать искусственную вентиляцию легких. Настройка параметров ИВЛ для поддержания P СО 2 в пределах нормы от 35 до 45 мм рт.
- Вставьте катетер в артерию (ушной 22 до 20 г; 1 в [0,9 х 25 мм] до 1,16 в [1.1 х 30 мм]) и подключиться к несоответствующим трубки для мониторинга прямой артериальное давление.
- Используйте многопараметрическое физиологическую монитор с для записи ЭКГ, прямое артериальное давление, насыщение кислородом (SPO 2), капнографический (Р ЕТ СО 2), и температура каждые 5 минут. Перевести все рНysiologic данных через последовательный кабель к центральной физиологического данных для сбора компьютера. Поддержание нормальной температуры тела с помощью циркулирующего одеяло воды.
- Администрирование сбалансированный поли-ионная решение на 10 мл / кг в первый час общей анестезии, а затем уменьшить до 5 мл / кг / ч.
- Администрирование триметоприм-сульфадоксин 5 мг / кг IV в овцы только до разреза кожи в качестве антибиотикопрофилактики.
- Используйте стандартные асептических всех хирургических манипуляций овцы и плода.
- Барьер медсестра овцы на все времена. Это включает в себя также нехирургических персонала. Это позволит свести к минимуму энзоотической потенциал для, например, Coxiella burnetii. Используйте перчатки и маски (N-95) типа на все времена.
2. Обзор хирургической процедуры
- Сделайте 20 см срединный разрез через нижнюю брюшную стенку черепа сразу к вымени через белой линии живота, чтобы минимизировать повреждение мышц.
- рetract большого сальника краниально и рога матки пальпируются вручную. Пропальпируйте каждый рог из тела матки на кончике рога заметив количество плода и их размера. Если имеется более одного плода, выбрать больший плод путем оценки ручной размер головки и ширину между орбитами.
- Держите голову выбранного плода твердо через матку частично выводили. Выполните 10 см гистеротомии на большой кривизны с Metzenbaum ножницами. Поместите сразу над головой не-латекса стерильные хирургические перчатки, заполненный стерильным физиологическим раствором, как если бы он был рукой. В качестве альтернативы, используйте смоченной 4х4 держать голову плода влажной. Безопасный матку брюшной стенки.
- Экстериоризироваться справа и слева грудной конечности и тянуть плод мягко из матки вплоть до xyphoid процесса.
- Вставьте поливинилового катетеры в правую и левую плечевую вену и артерии, используя стандартную технику урезанную. Вставьте Анофэр поливиниловый катетера в полости амниона по фиксации его 'конец грудины плода.
- Используйте только стерильные катетеры. Мы рекомендуем газа стерилизации в Вашем объекте. Прикрепите каждый катетер для иглы и иглы с двойным краном, чтобы позволить для отбора проб крови позднее или контроля давления.
- Шовный электроды из нержавеющей стали с головкой, мечевидного отростка и к каждой точке плеча мониторинга электрокардиограммы (ЭКГ).
- Вернуться плод в матке. Все катетеры и электроды выход через небольшой разрез колотой в левый бок.
- Закройте лапаротомии разрез с помощью замыкание трехслойной. Шовный брюшной стенки с синтетическим рассасывающиеся мононити шов USP 2 в простой непрерывном режиме. Закрыть подкожного пространства с синтетическим рассасывающиеся плетеные нити USP 0 в простом непрерывном режиме. Используйте хирургические скобы из нержавеющей стали, чтобы закрыть разрез кожи.
- Удалить шерсть после бритья xyphoid процесс в молочной железе и вдоль складки фланга на каждой стороне лопастной # 40. Чистый вентральной живот затем тщательно с 4% глюконата хлоргексидина и мягкой щеткой в течение 3 минут.
- Выполните стандартную стерильную скраб с хлоргексидинглюконат 4%, начиная от центра живота и прогрессирует в центробежной моды в течение 3 мин. Налейте стерильного физиологического раствора на животе, чтобы удалить дезинфицирующее мыло. Для конечной стадии хирургического подготовки, выполняют три альтернативных проходы глюконата хлоргексидина раствор 2% и изопропиловый спирт 70%.
- Убедитесь, что глубина анестезии достаточна до разреза. Сделайте стандартный лапаротомии разрез от пупка до всего краниально к вымени через белой линии живота, чтобы минимизировать повреждение мышц.
- Вставьте длинные губки щипцов в животе вдоль левой стены до брюшнойк плановой выездной площадки для катетеров в paracostal регионе.
- Нажимайте кончики пинцета к стене, пока помощник может найти его и подтвердить соответствующий сайт. Откройте слегка (1 см) челюсти щипцами и пусть помощник сделать 2 см толщины полный ножевое разрез.
- Экстериоризироваться кончики пинцета через разрез, откройте снова, и мягко схватить катетеры с пинцетом, что, наконец, вытащил из живота через разрез брюшной стенки брюшной. Следует отметить, что некоторые группы имплантировать катетеры, а затем экстериоризоваться их. Это имеет тот недостаток, что интраоперационной мониторинг плода ЭКГ не возможно.
- Пропальпируйте матку, чтобы определить положение плода и цифры. Определить наибольшее плод с помощью между слуховой расстояние. Надрезать стенки матки на большой кривизны за спины головы, избегая семядоли.
- Вставьте тупым концом канюли через плацентарный мембран для получения утраБесплатный образец от кровотечения niotic жидкости. Надрезать плацентарной мембраны с помощью ножниц.
- Экстериоризироваться черепной половину плода через этот разрез. Поместите стерильную, не латекса хирургические перчатки, заполненный стерильным физиологическим раствором при 37 ° С в течение плода головы, чтобы помочь сохранить нормотермию.
- Во время удаления плода верхней части тела из матки, имеют провести заместитель вверх Бэбкок, чтобы предотвратить потерю амниотической жидкости. Тогда, вновь используя Бэбкок щипцов, зажим фетальные мембраны и стенки матки к коже, чтобы предотвратить загрязнение брюшной с амниотической жидкости.
- Защиту только те части тела плода, которые должны быть приборами и держать остальных частей внутри матки или покрыта влажным и теплым (37 ° С) стерильные ткани, соответственно.
- Исчезновение оба грудных конечностей, чтобы облегчить воздействие на плечевой артерии и вены на двусторонней основе. Надрезать вдоль медиальной как предплечья и уходаполностью рассекать по плечевой артерии и вены.
- Вставка поливиниловые катетеры в правую и левую плечевого артерии и левой плечевой вены с использованием стандартной методики усеченную.
- Освободите судно будет катетер из соседних тканей более 1 см. Лигировать дистальной части судна с оплеткой Синтетический рассасывающийся USP 2-0 шва. Preplace лигатуры на проксимальных аспект судна, но держать его развязать.
- Использование Castroviejo ножницы, разрезать поперек судна примерно 30% его диаметра. Остановить поток крови частично, потянув проксимального шва. Вставка катетера в проксимальном направлении.
- Вставьте поливинилового катетера до 8 см проксимально или до сопротивления срабатывания и слегка потяните. Временно обеспечить проксимальную сторону катетера с помощью сосудистого зажима. Поместите другой шов вокруг обоих проксимальных и дистальных аспекте катетера. Помощник постоянно жерехirating и промывки катетера, чтобы обеспечить проходимость катетера.
- Закройте кожу плода, используя USP 2-0 плетеный синтетический рассасывающийся шовный материал, с непрерывным рисунком шва.
- Освободите судно будет катетер из соседних тканей более 1 см. Лигировать дистальной части судна с оплеткой Синтетический рассасывающийся USP 2-0 шва. Preplace лигатуры на проксимальных аспект судна, но держать его развязать.
- Для правой и левой плечо, рукоятки и xyphoid процесса, фиксировать изолированный электрод из нержавеющей стали для облегчения мониторинга плода ЭКГ.
- Шовный амниотической давление и отбора проб катетер к грудине. Это катетер Фенестрированные на ее конечности.
- Закрепите все катетеры на спинке плода с использованием USP 2-0 плетеный синтетический рассасывающийся шовный материал.
- Перед заменой плода обратно в матку, администрирование 30 мкг кленбутерол IV медленно в течение 15 мин, чтобы избежать гипотензии и обеспечить матки релаксации.
- Шовный фетальные мембраны, используя USP 4-0 плетеный синтетический рассасывающийся шовный материал с непрерывным рисунком. Включение только один катетер или электрод одновременно в КлосаЮр, чтобы обеспечить плотное закрытие с. Используйте двойной слой картины Кушинга, уважая принципы Halsted, чтобы закрыть мышечный слой матки с использованием USP 0 плетеный синтетический рассасывающийся шовный материал. Тщательно Бери хирургические узлы.
- Использование кошелек-строку шва образец, обеспечить все катетеры и ЭКГ кабели, поскольку они выходят левую paracostal разрез.
- Использование леска синтетического материала рассасывающийся шовный USP 2 обеспечить белой линии с непрерывным рисунком. Закрыть подкожные ткани, используя USP 2-0 плетеные синтетических рассасывающийся шовный материал с непрерывным рисунком. Закрепите слой кожи с хирургического скоб.
- Администрирование 250 мг ампициллина внутривенно и снова с помощью амниотической катетер в амниотической полости. Заменить утраченные околоплодных вод с теплой физиологического раствора.
- Поместите все экстериоризированного катетеров и электродов ЭКГ в место мешок для поддержания стерильности. Поставьте Stockinette вокруг туловища овцы, чтобы обеспечить все катетеры апD электроды к телу овцы.
- Стоп общий наркоз, и экстубации овца раз гортани рефлексы вернулись к нормальной жизни.
- Вернуть ягненка в метаболическую клетку, как только она стабильна после общей анестезии. Овца будет находиться в метаболическую клетку в течение всего срока эксперимента. Овца должна быть в состоянии стоять, лежать и есть вволю, а мониторинг не-наркозом плод без седативного мать.
- Для следующих трех дней, администрирование антибиотики профилактически с овцы (триметоприм сульфадоксина 5 мг / кг) и плода (250 мг ампициллина внутривенно из и снова через амниотической катетера).
- Оценка метаболического статуса и овцы, и плод при использовании крови Анализаторы газов.
- Промойте все катетеры с минимальным объемом возможного гепаринизированным физиологического раствора. Внимание - не превышать суточную дозу гепарина и жидкостей допустимой для плода. Можно жидкости перегрузки плода. Флеш один раз медленнодень ~ 5 мл NaCl в строке после антибиотикопрофилактики.
- Во время операции, возможно записать матери и плода ЭКГ и ЧСС, а также материнской артериальное давление и давление в дыхательных путях (Paw) непрерывно (рисунок 1). Используйте Life окне монитора, чтобы приобрести все данные, за исключением материнской ЭКГ. Поток этих данных в аналого-цифрового преобразователя вместе с плода и матери ЭКГ сигналов; пройти матери и плода ЭКГ сначала в 1901 предварительного усилителя. Запись и отображение всех данных в программном обеспечении производителя.
- Возьмите 1 мл артериальной образец одновременно с овцы и плода для анализа газов артериальной крови, лактата, глюкозы и избыток оснований определение (в плазме) на начало плода хирургии (сразу после установки первого артериальный катетер) и после закрытия матку ,
- Во время послеоперационного восстановления, взять образец крови плода 3 мл для измерения IL-6 и ФНО- InflammAtory профили. Центрифуга плазма при 4 ° С (4 мин, 4000 мкг), декантируют и хранить плазму при -80 ° С для последующего тестирования ELISA.
Примечание: В целях сообщенных репрезентативные результаты, через шесть дней после операции животных умерщвляли с помощью внутривенной инъекции 20 мл пентобарбитала натрия. Роста плода оценивали тела, мозга, печени и материнской весов. Продолжительность экспериментального периода, очевидно, варьируют в зависимости от выбранного дизайна для конкретного вопроса исследования и может достигать ~ 6 недель.
- Определение концентрации цитокинов (IL-6, TNF-a) в плазме с использованием сэндвич баранины конкретных ELISA. Предварительное покрытие мышиное анти-овцы моноклональные антитела (захват антитела IL-6) или мышиное анти-бычий моноклональное антитело (ФНО-α) в концентрации 4 мкг / мл на ELISA пластины при 4 ° С для O / N, после 3 раза промыть промывочным буфером (0,05% Твин 20 в PBS, PBST).
- Блок пластин в течение 1 ч с 1% BSA в PBST. Вымойте тарелки с буфером для промывки 3 раза.
- Используйте рекомбинантных белков овец (ИЛ-6, ФНО-альфа) в качестве стандарта ELISA, подготовить серийные разведения в диапазоне от стандартных 1 из 2000 нг / мл до стандартного 7 из 31,25 пг / мл.
- Нагрузка 50 мкл серийных разбавленных белковых стандартов и образцов на лунку и инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре, мыть планшетов 3 раза. Выполнить все стандарты и образцы в двух экземплярах.
- Применение 50 мкл кроличьего анти-овец поликлональных антител (антитела обнаружения IL-6) или кролика против коровьей поликлональные антитела (ФНО-) в разведении 1: 250 в лунки и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Вымойте тарелки с буфером для промывки 5 раз.
- Добавьте 50 мкл козьих антител против кроличьего IgG с пероксидазой хрена, конъюгированной-(разбавление 1: 5000) в течение 30 мин.
- Инкубируют 50 мкл ТМВ раствора субстрата на лунку.
- Остановка реакции развития окраски в нужное время с 25 мкл 2 N серной кислоты.
- Читайте плАтеш на ридере ELISA при 450 нм, с коррекцией длины волны 570 нм.
Примечание: В наших тестах, чувствительность IL-6 ELISA составляла 16 пг / мл, чувствительность ФНО- ELISA 13,9 пг / мл, соответственно. Для всех анализов, внутрирегиональные анализа и между анализами коэффициенты дисперсии было <5% и <10%, соответственно.
Примечание: Точные статистические методы будут зависеть от исследования вопроса. Здесь мы приводим методы, используемые для проверки каких-либо существенных различий в газах крови, представленных в таблице 2.
- Проверьте нормальное распределение данных, используя тест Колмогорова-Смирнова с последующим параметрических или непараметрических тестов с регулировкой для множественных сравнений, в соответствующих случаях.
- Использование К-означает кластерного анализа для выявления плодов в когорте, которые были спонтанно гипоксическая и определить соответствующие рО 2 и О 2 значения СБ (рассмотреть PO 2 <20 мм рт или О 2 ТВ <55%, как фетал гипоксия). 44-48
- Используйте статистического программного обеспечения, таких как SPSS для анализа.
- Представление данных в виде средних ± SD со статистическими различиями при р <0,05 считается значительным.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
38 беременных временем от овец, были оборудованы в 128 ± 2 дней беременности (DGA, ~ 0,88 беременности, срок 145 DGA) с артериальной, венозной и амниотической катетеров и ЭКГ (ЭКГ) электродов с стерильных условиях общей анестезии (как овцы и плода ). В случае двойной беременности чем больше плода была выбрана на основе пальпации и оценки межвременное диаметр; В качестве альтернативы, плод, чтобы быть инструментальной может быть выбраны случайным образом, чтобы избежать возможной уклон или обоих плодов могут быть приборами. Общая продолжительность процедуры была 124 ± 27 мин. Часть фетального верхней части тела, чтобы быть инструментальной оставалась вне матки для 92 ± 19 мин. Большинство овец инструментальных были F2 животных. Их плотина (F1 пограничной Лестер * Романов) и отец был баран-Гемпшир; они пересекли следующим образом: Хэмпшир (50%) - Border Leicester (25%) - Романов (25%) = HABLRV.
Представитель матери и плода физиологическаяхарактеристики во время операции и аппаратуры показано на рисунке 1, и были в пределах физиологической нормы для гестационного возраста плода и материнского поведения во время анестезии.
Материнские веса в среднем 75 ± 11 кг и 21 из 38 проведенных близнецов (т.е. в размере 1,6 ± 0,5). Во время аутопсии (134 ± 3 DGA), среди инструментальных плодов одноэлементных весил 4090 ± 800 г, а вес близнецов была ниже по крайней 3300 ± 740 г (р = 0,003). Вес uninstrumented близнецов на 3300 ± 670 г был похож на массу инструментальных близнецов (р = 0,78). 18 из инструментальных плодов были женщины и 20 мужчины.
Динамика плода газов артериальной крови, глюкозы и кислотно-основного состояния во время операции и послеоперационной реабилитации, приведены в таблице 1. Мы наблюдали постепенное восстановление статуса плода кислотно-основного и умеренное ухудшение оксигенации с небольшим изменением в гlucose и электролитов из послеоперационных дней с 1 по 3. Примечательно, на послеоперационный день 3, 42% плодов были найдены, чтобы быть спонтанно гипоксическая с артериальной рО 2 11 мм рт.ст. из и O 2 сб 28%. Плода СП, нормоксических кластера 2 с центром в 22 мм рт.ст. и О 2 ТВ на 56%. Две плодов не были более чем гипоксическая одноплодной плодов (р = 0,26).
Плода артериального ИЛ-6 ИФА оказана значения ниже порога чувствительности 16 пг / мл в течение послеоперационного периода восстановления. Аналогично, уровни TNF-α и оставалась неизменной, и на очень низком уровне 29 пг / мл ~ 30% животных также показаны значения ниже порога чувствительности 13,9 пг / мл в течение всего послеоперационного периода восстановления.
Рисунок 1. интраоперационной матери и плода мониторинг. ФХР плода сердечного ритма яп ударов в минуту (BPM); fECG плода электрокардиограммы (V); PAW, материнская положительного давления в дыхательных (мм рт.ст.); МАВР, материнская артериальное давление (мм рт.ст.); МГР, уровень материнской сердца (BPM); mECG, материнская ЭКГ (V). Ось Х шкала времени в формате чч: мм:. Сс Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Спонтанная гипоксия плода и массы тела. Нет взаимосвязь между массой тела плода и артериальной PO 2 в день после операции 3 был обнаружен (Спирмена R = 0,326, р = 0,161). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры ,
| Источник света АПФ | Шотт-Fostec | ||
| Анатомические ножницы | Изобразительное Инструменты Наука | 14060 - 11 | |
| Угловые рассечения ножницы | Изобразительное Инструменты Наука | 15006 - 09 | |
| Скальпель ручка | Изобразительное Инструменты Наука | 10003 - 12 | Альтернативный инструмент для препарирования |
| Изогнутые лезвия скальпеля # 12 | Изобразительное Инструменты Наука | 10012 - 00 | Альтернативный инструмент для препарирования |
| Ножницы кости | Изобразительное Инструменты Наука | 16044 - 10 | |
| S & T шовные щипцы связывая | Изобразительное Инструменты Наука | 00272 - 13 | |
| Дюмон щипцы SS - наклонены | Изобразительное Инструменты Наука | 11203 - 25 | |
| Плетеный шелковый шов 6-0 размер | Teleflex медицинский | 07 -30 - 10 | |
| Медицинская лента | transpore | 3M | |
| Кетамина гидрохлорида 100 мг / мл | Hospira | НДЦ 0409 - 2051 - 05 | Окончательный ли 80 мг / кг |
| Tranqui Вед впрыска (ксилазин 100 мг / мл) | Vecdo | НДЦ 50989 - 234 - 11 | Окончательный ли это 10 мг / кг |
| Реактивная оранжевый 14 | Сигма - Олдрич | R - 8254 | |
| Звонки Компоненты решения | Раствор уравновешивали газовой 95% O2 и 5% CO2, конечная рН 7,4 | ||
| Хлористый натрий | Сигма - Олдрич | S7653 | Конечная концентрация: 118 мМ |
| Хлорид калия | Fisher Scientific | P217 - 3 | Конечная концентрация: 4,7 мМ |
| Кальций хлористый гihydrate | Fisher Scientific | C79 - 500 | Конечная концентрация: 2,5 мМ |
| Фосфат калия одноосновной | Fisher Scientific | Р -285 | Конечная концентрация: 1,2 мМ |
| Сульфат магния | JT Baker | Ян-00 | Конечная концентрация: 0,57 мМ |
| 4- (2-гидроксиэтил) пиперазин-1-этансульфоновая кислота (HEPES) | Fisher Scientific | ВР 310 - 500 | Конечная концентрация: 5,95 г / л |
| Глюкоза | Сигма - Олдрич | G8270 | Конечная концентрация: 5,5 мМ |
| LifeWindow | Digicare биомедицинских технологий | ||
| CED усилитель биопотенциалов и АЦП единиц | Кембридж конструирования электронных ограниченной, Раздел 4, Научный парк, Милтон-роуд, Кембридж CB4 0FE Англия. | <TD> Bioamp: 1902; АЦП: micro1401; Сбор данных программное обеспечение: Спайк 2, V7.13 ||
| Neurolog аналоговый усилитель биопотенциалов сигнал | Digitimer ООО 37 Hydeway Welwyn Garden City Хартфордшир, AL7 3BE, Англия | NL108A | |
| ABL800Flex | Радиометр Канада; 200 Абердин доктор, Лондон, N5V 4n2 | ||
| Эппендорф 5804R | Эппендорф Канада; 2 810 Argentia Road, # 2 Миссиссага, Онтарио, l5n 8L2 | ||
| Стрелка яремной катетеризации Набор | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Дорога, Чтение, Пенсильвания 19605 США | ||
| Atravet | 10 мг / мл | ||
| Диазепам | 5 мг / мл | ||
| Кетамин | Ketalar | <TD> 100 мг / мл | |
| Пропофол | 10 мг / мл | ||
| SurgiVeT | Эндотрахеальные труб; Смиты Медицинская АСД, Inc. Сент-Пол, Миннесота 55112, США | ||
| Кук дыхательных Обмен катетер с RAPI-FIT адаптеры | Кук Critical Care 750, Блумингтон В 47402-0489 США | ||
| Dispomed Вентилятор | Dispomed ООО, 745-Назер-Лорен, Joliette, Квебек J6E 0L6 | ||
| BD-W Insyte | Becton Dickinson, Инфузионная терапия Systems, Inc, 9450 S State St, Sandy Юта 84070 США | 22 до 20 г; 1 в [0,9 х 25 мм] до 1,16 в [1.1 х 30 мм] | |
| Эдвардс Lifesciences Ссылка: PX272 Контроль давления комплект с TruWave Одноразовая давления | |||
| LifeWindow LW6000 | Digicare БИОМedical Технология 107 Торговля Road, Бойнтон-Бич, Флорида 33426-9365 США | ||
| Гаймар | |||
| Бэбкок | |||
| Поливиниловые катетеры | ТСМ (Научно-Товары Inc.) | 2 метров | |
| 2-0 Викрил | |||
| Castroviejo ножницы | |||
| электрокардиограммы (ЭКГ) | LifYY, Metrofunk Кабель-Союз, Берлин, Германия | четыре медные электроды в одной оболочке, более 2 метров | |
| 2-О Викрил | |||
| 3-0 Викрил | |||
| ПДС II USP | |||
| Триметоприм сульфадоксин | |||
| Ампициллин | |||
| Запорный кран | Аргон Медицина, Кот 041220001A | Двухместный 4-ходовой кран с наружной Луер замок | |
| Иглы | Tyco Healthcare 8881202389 | Monoject алюминия хаб тупые иглы, 22Gx, 0.7mmx 38,1 мм: для плода артериальных и венозных катетеров | |
| Иглы | Tyco Healthcare 8881202322 | Monoject алюминия хаб тупые иглы, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: для амниотической катетеров |
Таблица 1. Удельный Реагенты / Оборудование.
Пожалуйста, нажмите онповторно, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Таблица 2. Полный обзор плода в крови газов, электролитов метаболитов и во время операции и послеоперационного восстановления. Фетальный артериальной крови, рН, PCO 2 (мм рт.ст.), рО 2 (мм рт.ст.), насыщение кислородом (О 2 ТВ%), глюкоза (мг / дл), лактат (ммоль / л) и избыток оснований (ммоль / л) в различные моменты времени периодов приборов и восстановления: Пуск фетальной хирургии сразу же после установки первого плода артериальный катетер (матки открыта), конец фетальной хирургии (в матке закрытый), послеоперационные дни с 1 по 3. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Анестезии и хирургических процедур представлены, которые необходимы для создания животной модели для изучения плода физиологии и патофизиологии: хронически инструментальной без наркозом плода овец.
Следует подчеркнуть, четыре критические шаги в протоколе. Во-первых, прохождение катетеров и электродов по материнской фланг: важно, что это делается сразу, чтобы избежать каких-либо повреждений внутренних органов органов. Во-вторых, обеспечение гистеротомия операционной сайт до экстериоризации плод: это очень важно, чтобы предотвратить или свести к минимуму потери амниотической жидкости и последующего наложения швов амниотической мембраны до закрытия матки. В-третьих, артериальная катетеризация: фетальные овец артерии около 1-2 мм в диаметре и, следовательно, не трудно катетер для опытного хирурга; команда из двух хирургов выполняет лучший и самый быстрый в этой задаче, которая помогает сэкономить время, чтобы свести к минимуму общую длину процедуры. В-четвертых, осторожны сектором и организация всех катетеров и электродов в амниотической полости до возвращения плода в амнион и закрытие матки: это помогает, чтобы избежать случайного вытягивания катетера или разрыва из электродов ЭКГ из-за матери и плода движений после операции.
Вместо представленной здесь подхода к катетеризации плечевого сосуды, сонную артерию или бедренных сосудов также может быть использован. Выбор зависит от общего подхода к измерительной что, в свою очередь будет зависеть от дизайна исследования. Мы рекомендуем, чтобы минимизировать время плод проводит вне матки и свести к минимуму степень, до которой плод должен оставаться вне матки, чтобы быть инструментальной. Эти соображения привели к выбору сосудов инструментальных в представленном «минимального подхода". Мы рекомендуем catheterizing артерии с обеих сторон, чтобы обеспечить внутриартериального мониторирования артериального давления и отбора проб крови с артериальной без взаимной интерференции всей тон экспериментировать. Дополнительным преимуществом является надежное резервирование этот подход представляет: в случае, если один делает артерии заблокированы в течение экспериментального периода, отбор проб и контроль давления возможны от того же судна с недостатком прерывая наблюдения, когда забор крови делается.
Существуют три ограничения, которые исключают более широкого адаптацию этой модели на животных. Эти ограничения могут быть рассмотрены некоторые изменения, предложенные ниже. Во-первых, это требование для уровня биобезопасности 2 стойлами в некоторых юрисдикциях. Это связано с риском для Coxiella burnetii инфекции от беременной овцы в людях с ослабленной иммунной системой. 49,50 Вакцинация доступна для животных и людей, подвергшихся уменьшить этот риск 51,52 и ПЦР тесты можно сделать, чтобы убедиться, что нет положительные животные доставляются в научно-исследовательский центр с фермы. Решение может быть объединить вакцинации животных с несколькими тест ПЦРс на ферме от вагинальных мазков, выполненных до разведения начать, до родов, а затем с амниотической жидкости во время операции. При таких мерах предосторожности, в некоторых странах применение овец в исследовании не ограничено, как и в других. Во-вторых, стоимость животного в нижнем диапазоне четырехзначный, сопоставимы с некоторыми мышиными штаммов нокаутом. Имея это в виду, однако, информация усиления от каждого плода овец эксперимента сравнивает только приматов, как она относится к большой объем данных, которые могут быть собраны, вопросы, которые могут быть заданы и потенциал перевод к человека из-за в сроках развития органов у овец. В-третьих, существует проблема разведения и доступности животных в течение определенного времени только в этом году. Даже с гормональной терапии, результаты воспроизводства овец, таких как частота наступления беременности и жизнеспособности ягнят (плодов) являются удовлетворительными лишь несколько месяцев около природных сезонов размножения. 53 Следовательно, эксперименталь планирование требует тщательного планирования с годами раскол в осенний и весенний сезоны. Решение может быть создание сентября-ноября на-и Ан апреля по июнь экспериментальные "овец сезонов. Этот вопрос также является добродетелью, так как он позволяет время, чтобы проанализировать множество данных, собранных в ходе каждого экспериментального сезона.
Существует ряд факторов, способствующих значение по отношению к существующим методам. Данные морфометрических, сердечно-сосудистые и газа в крови, представленные были в пределах вида на 54,55 и напоминают человека видов 56, основным преимуществом этой модели на животных. Одним из исключений является более высокая скорость многоплодной беременности по сравнению с человеческим двойникования. 57 Это, однако, также достоинством модели, как изучение последствий двойникования на развитие плода, является важным биомедицинских задачу. 55,58,59 Очень низкие уровни сообщению -operative воспаление как измеряется IL-6 и TNF-alpha ИФАв сочетании с восстановлением кислотно-основного состояния показывают, что плода хирургические приборы хорошо переносится, и послеоперационный период восстановления 72 ч является достаточным для обеспечения стабильной базовой состояние плода овец до начала эксперимента. Высокий процент спонтанного умеренной хронической гипоксии в ближайшее плода овец оказывает им интересную модель для изучения хронических эффектов человеческого дородовой гипоксии и воспаления на плода и перинатального развития, такие, как например, ЗВУР, и перинатальных оскорбления, таких как воспаление и острой асфиксии. 60,61,62 несколько моделей ЗВУР овец используются, опираясь на некоторые спонтанного гипоксии, некоторые вызывающие его плацентарной эмболизации, например. 16,63-66 С другой стороны, тяжелой гипоксии до начала эксперимента могут также критерием исключения в тех случаях, когда, например, сердечно-сосудистые или центральной нервной системы, которые будут изучены, так как здесь ответы хронически гипоксии плодавновь, как известно, отличаются от тех, кто нормоксических. 60 Другим важным применением является изучение влияния пренатального материнской стресса на плода и постнатального развития. 5,67 Наконец, как можно видеть в многочисленных публикациях, приведенных с этой моделью, плода приборы могут быть в широком диапазоне гестационном возрасте где-то от 70 до ~ 135 DGA соответствующее середине беременности - краткосрочных исследований развития плода. С наступающей гестационного возраста, приборы когда-либо увеличения сложности возможны, но соображения длительности хирургического необходимости приборов для взвешивания с необходимостью получения ряд многомерных записей из того же плода.
Ряд многообещающих будущих применений методике, представленной происходит от постоянно растущего числа овец конкретных молекулярной биологии реагентов и недавно овец секвенирования генома. Эти недавние события дальнейшее развитие этого Animaл модель весьма перспективным и мощным подход к пониманию здорового и патологического развития плода человека на различных масштабах организации, из (РПИ) генома в интегративной физиологии. 68 69-74
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ACE Light source | Schott-Fostec | A20500 | |
| Dissecting scissors | Fine Science Tools | 14060 - 11 | |
| Angled dissecting scissors | Fine Science Tools | 15006 - 09 | |
| Scalpel handle | Fine Science Tools | 10003 - 12 | alternating dissecting tool |
| Curved scalpel blades #12 | Fine Science Tools | 10012 - 00 | alternating dissecting tool |
| Bone scissors | Fine Science Tools | 16044 - 10 | |
| S & T suture tying forceps | Fine Science Tools | 00272 - 13 | |
| Dumont SS forceps - angled | Fine Science Tools | 11203 - 25 | |
| Braided silk suture size 6-0 | Teleflex Medical | 07 - 30 - 10 | |
| Medical Tape | transpore | 3M | |
| Ketamine hydrochloride 100 mg/ml | Hospira | NDC 0409 - 2051 - 05 | Final Does is 80 mg/kg |
| Tranqui Ved Injection (xylazine 100 mg/ml) | Vecdo | NDC 50989 - 234 - 11 | Final Does is 10 mg/kg |
| Reactive orange 14 | Sigma - Aldrich | R - 8254 | |
| Ringers Solution Components | Solution is gas equilibrated with 95% O2 and 5% Co2, final pH 7.4 | ||
| Sodium chloride | Sigma - Aldrich | S7653 | Final Concentration: 118 mM |
| Potassium chloride | Fisher Scientific | P217 - 3 | Final Concentration: 4.7 mM |
| Calcium chloride dihydrate | Fisher Scientific | C79 - 500 | Final Concentration: 2.5 mM |
| Potassium phosphate monobasic | Fisher Scientific | P -285 | Final Concentration: 1.2 mM |
| Magnesium sulfate | J.T. Baker | Jan-00 | Final Concentration: 0.57 mM |
| 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid (HEPES) | Fisher Scientific | BP 310 - 500 | Final Concentration: 5.95 g/L |
| Glucose | Sigma - Aldrich | G8270 | Final Concentration: 5.5 mM |
| LifeWindow | Digicare Biomedical Technology | ||
| CED bioamplifier and ADC units | Cambridge Electronic Design Limited, Unit 4, Science Park, Milton Road, Cambridge CB4 0FE ENGLAND. |
Bioamp: 1902; ADC: micro1401; Data acquisition software: Spike 2, V7.13 | |
| Neurolog analog signal bioamplifier | Digitimer Ltd 37 Hydeway Welwyn Garden City Hertfordshire, AL7 3BE, England |
NL108A | |
| ABL800Flex | Radiometer Canada; 200 Aberdeen Dr, London, ON N5V 4N2 | ||
| Eppendorf 5804R | Eppendorf Canada; 2810 Argentia Road, #2 Mississauga, Ontario, L5N 8L2 |
||
| Arrow Jugular Catheterization Set | Arrow International, Inc., 2400 Bernville Road, Reading, PA 19605 USA | ||
| Atravet | 10 mg/ml | ||
| Diazepam | 5 mg/ml | ||
| Ketamine | Ketalar | 100 mg/ml | |
| Propofol | 10 mg/ml | ||
| SurgiVeT | Endotracheal Tubes; Smiths Medical ASD, Inc. St. Paul, MN 55112, USA | ||
| Cook Airway Exchange Catheter with RAPI-FIT Adapters | Cook Critical Care 750, Bloomington IN 47402-0489 USA | ||
| Dispomed Ventilator | Dispomed Ltd., 745 Nazaire-Laurin, Joliette, Quebec J6E 0L6 | ||
| BD Insyte-W | Becton Dickinson, Infusion Therapy Systems Inc., 9450 S State St, Sandy Utah 84070 USA | 22 to 20 G; 1 in [0.9 x 25 mm] to 1.16 in [1.1 x 30 mm] | |
| Edwards Lifesciences Ref: PX272 Pressure monitoring kit with TruWave Disposable Pressure | |||
| LifeWindow LW6000 | Digicare Biomedical Technology 107 Commerce Road, Boynton Beach, FL 33426-9365 USA | ||
| Gaymar | |||
| Babcock | |||
| Polyvinyl catheters | SCI (Scientific Commodities Inc.) | 2 meters | |
| 2-0 Vicryl | |||
| Castroviejo scissors | |||
| electrocardiogram (ECG) | LIFYY, Metrofunk Kabel-Union, Berlin, Germany | four copper electrodes in single sheath, 2 meters | |
| 2-O Vicryl | |||
| 3-0 Vicryl | |||
| PDS II USP | |||
| Trimethoprim sulfadoxine | |||
| Ampicillin | |||
| Stopcock | Argon Medical, Cat 041220001A | Double 4-way Stopcock with male luer lock | |
| Needles | Tyco Healthcare 8881202389 | Monoject aluminum hub blunt needles, 22Gx, 0.7mmx 38.1mm: for fetal arterial and venous catheters | |
| Needles | Tyco Healthcare 8881202322 | Monoject aluminum hub blunt needles, 16Gx, 1.6mmx38.1mm: for amniotic catheters |
References
- Barry, J. S., Anthony, R. V. The pregnant sheep as a model for human pregnancy. Theriogenology. 69, 55-67 (2008).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
- Rees, S., Inder, T. Fetal and neonatal origins of altered brain development. Early Hum Dev. 81, 753-761 (2005).
- Rees, S., Harding, R., Walker, D. The biological basis of injury and neuroprotection in the fetal and neonatal brain. Int J Dev Neurosci. 29, 551-563 (2011).
- Moisiadis, V. G., Matthews, S. G. Glucocorticoids and fetal programming part 1: Outcomes. Nat rev Endocrinol. 10, 391-402 (2014).
- Wang, X., Rousset, C. I., Hagberg, H., Mallard, C. Lipopolysaccharide-induced inflammation and perinatal brain injury. Semin Fetal Neonatal Med. 11, 343-353 (2006).
- Gotsch, F., et al. The fetal inflammatory response syndrome. Clin Exp Obstet Gynecol. 50, 652-683 (2007).
- Svedin, P., Kjellmer, I., Welin, A. K., Blad, S., Mallard, C. Maturational effects of lipopolysaccharide on white-matter injury in fetal sheep. J child neurol. 20, 960-964 (2005).
- Nitsos, I., et al. Chronic exposure to intra-amniotic lipopolysaccharide affects the ovine fetal brain. J Soc Gynecol Investig. 13, 239-247 (2006).
- Yan, E., Castillo-Melendez, M., Nicholls, T., Hirst, J., Walker, D. Cerebrovascular responses in the fetal sheep brain to low-dose endotoxin. Pedia res. 55, 855-863 (2004).
- Dean, J. M., et al. Delayed cortical impairment following lipopolysaccharide exposure in preterm fetal sheep. Ann Neurol. 70, 846-856 (2011).
- Dobbing, J., Sands, J.
- Liggins, G. C. Premature parturition after infusion of corticotrophin or cortisol into foetal lambs. J Endocrinol. 42, 323-329 (1968).
- Liggins, G. C. Premature delivery of foetal lambs infused with glucocorticoids. J Endocrinol. 45, 515-523 (1969).
- Liggins, G. C., Fairclough, R. J., Grieves, S. A., Kendall, J. Z., Knox, B. S. The mechanism of initiation of parturition in the ewe. Recent Prog Horm Res. 29, 111-159 (1973).
- Morrison, J. L. Sheep models of intrauterine growth restriction: fetal adaptations and consequences. Clin Exp Pharmacol Physiol. 35, 730-743 (2008).
- Robinson, J. S., Hart, I. C., Kingston, E. J., Jones, C. T., Thorburn, G. D. Studies on the growth of the fetal sheep. The effects of reduction of placental size on hormone concentration in fetal plasma. J Dev Physiol. 2, 239-248 (1980).
- Carmel, E., et al. Fetal brain MRI - experiences in the ovine model of cerebral inflammatory response. Repro sci. 19 (3), 347A-348A (2012).
- Samson, N., Dumont, S., Specq, M. L., Praud, J. P. Radio telemetry devices to monitor breathing in non-sedated animals. Respir Physiol Neurobiol. 179, 111-118 (2011).
- Thakor, A. S., Giussani, D. A. Effects of acute acidemia on the fetal cardiovascular defense to acute hypoxemia. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, R90-R99 (2009).
- Green, L. R., Kawagoe, Y., Homan, J., White, S. E., Richardson, B. S. Adaptation of cardiovascular responses to repetitive umbilical cord occlusion in the late gestation ovine fetus. J Physiol. 535, 879-888 (2001).
- Unno, N., et al. Changes in adrenocorticotropin and cortisol responsiveness after repeated partial umbilical cord occlusions in the late gestation ovine fetus. Endocrinology. 138, 259-263 (1997).
- Muller, T., et al. Developmental changes in cerebral autoregulatory capacity in the fetal sheep parietal cortex. J Physiol. 539, 957-967 (2002).
- Keen, A. E., Frasch, M. G., Sheehan, M. A., Matushewski, B., Richardson, B. S. Maturational changes and effects of chronic hypoxemia on electrocortical activity in the ovine fetus. Brain Res. 1402, 38-45 (2011).
- Ross, M. G., et al. Correlation of arterial fetal base deficit and lactate changes with severity of variable heart rate decelerations in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 208, e281-e286 (2013).
- Gunn, A. J., Gunn, T. R., de Haan, H. H., Williams, C. E., Gluckman, P. D. Dramatic neuronal rescue with prolonged selective head cooling after ischemia in fetal lambs. J Clin Invest. 99, 248-256 (1997).
- Xu, A., Piorkowska, K., Matushewski, B., Hammond, R., Richardson, B. S. Adaptive Brain Shut-Down Counteracts Neuroinflammation in the Near-Term Ovine Fetus. 60th Meeting of the Society for Gynecologic Investigation, 20 (3), Reproductive Sci. 222A (2013).
- Derks, J. B., et al. A comparative study of cardiovascular, endocrine and behavioural effects of betamethasone and dexamethasone administration to fetal sheep. J Physiol Lond. 499, 217-226 (1997).
- Lohle, M., et al. Betamethasone effects on fetal sheep cerebral blood flow are not dependent on maturation of cerebrovascular system and pituitary-adrenal axis. J Physiol. 564, 575-588 (2005).
- Morrison, J. L., et al. Maternal fluoxetine infusion does not alter fetal endocrine and biophysical circadian rhythms in pregnant sheep. J Soc Gynecol Investig. 12, 356-364 (2005).
- Allison, B. J., et al. Ventilation of the very immature lung in utero induces injury and BPD-like changes in lung structure in fetal sheep. Pediatr Res. 64, 387-392 (2008).
- Rozance, P. J., et al. Intrauterine growth restriction decreases pulmonary alveolar and vessel growth and causes pulmonary artery endothelial cell dysfunction in vitro in fetal sheep. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301, L860-L871 (2011).
- Fowden, A. L., Giussani, D. A., Forhead, A. J. Endocrine and metabolic programming during intrauterine development. Early hum dev. 81, 723-734 (2005).
- Nathanielsz, P. W., Hanson, M. A. The fetal dilemma: spare the brain and spoil the liver. J Physiol. 548, 333 (2003).
- Manikkam, M., et al. Fetal programming: prenatal testosterone excess leads to fetal growth retardation and postnatal catch-up growth in sheep. Endocrinology. 145, 790-798 (2004).
- Savabieasfahani, M., et al. Fetal programming: testosterone exposure of the female sheep during midgestation disrupts the dynamics of its adult gonadotropin secretion during the periovulatory period. Biol Reprod. 72, 221-229 (2005).
- Bergen, N. H., et al. Fetal programming alters reactive oxygen species production in sheep cardiac mitochondria. Clin Sci (Lond). 116, 659-668 (2009).
- Cox, L. A., et al. A genome resource to address mechanisms of developmental programming: determination of the fetal sheep heart transcriptome. J Physiol. 590, 2873-2884 (2012).
- Mahoney, M. M., Padmanabhan, V. Developmental programming: impact of fetal exposure to endocrine-disrupting chemicals on gonadotropin-releasing hormone and estrogen receptor mRNA in sheep hypothalamus. Toxicol Appl Pharmacol. 247, 98-104 (2010).
- Blad, S., Welin, A. K., Kjellmer, I., Rosen, K. G., Mallard, C. ECG and Heart Rate Variability Changes in Preterm and Near-Term Fetal Lamb Following LPS Exposure. Reprod Sci. 15, 572-583 (2008).
- Frasch, M. G., et al. Heart rate variability analysis allows early asphyxia detection in ovine fetus. Reprod Sci. 16, 509-517 (2009).
- Frasch, M. G., Keen, A. E., Gagnon, R., Ross, M. G., Richardson, B. S. Monitoring fetal electrocortical activity during labour for predicting worsening acidemia: a prospective study in the ovine fetus near term. PLoS One. 6, e22100 (2011).
- Durosier, L. D., et al. Sampling rate of heart rate variability impacts the ability to detect acidemia in ovine fetuses near-term. Front pedia. 2, 38 (2014).
- Danielson, L., McMillen, I. C., Dyer, J. L., Morrison, J. L. Restriction of placental growth results in greater hypotensive response to alpha-adrenergic blockade in fetal sheep during late gestation. J Physiol. 563, 611-620 (2005).
- Edwards, L. J., Simonetta, G., Owens, J. A., Robinson, J. S., McMillen, I. C. Restriction of placental and fetal growth in sheep alters fetal blood pressure responses to angiotensin II and captopril. J Physiol. 515 (Pt 3), 897-904 (1999).
- Xu, A., et al. Adaptive brain shut-down counteracts neuroinflammation in the near-term ovine fetus. Front neurol. 5, 110 (2014).
- Xu, A., et al. The Ovine Fetal and Placental Inflammatory Response to Umbilical Cord Occlusions With Worsening Acidosis. Reprod Sci. 22 (11), (2015).
- Wang, X., Durosier, L. D., Ross, M. G., Richardson, B. S., Frasch, M. G. Online detection of fetal acidemia during labour by testing synchronization of EEG and heart rate: a prospective study in fetal sheep. PLoS One. 9, e108119 (2014).
- Reid, A., Malone, J. Q fever in Ireland A seroprevalence study of exposure to Coxiella burnettii among Department of Agriculture workers. Occ med. 54, 544-547 (2004).
- Roest, H. I., Bossers, A., van Zijderveld, F. G., Rebel, J. M. Clinical microbiology of Coxiella burnetii and relevant aspects for the diagnosis and control of the zoonotic disease Q fever. Vet quart. 33, 148-160 (2013).
- Neill, T. J., Sargeant, J. M., Poljak, Z. The effectiveness of Coxiella burnetii vaccines in occupationally exposed populations: a systematic review and meta-analysis. Zoonoses and public health. 61, 81-96 (2014).
- Roest, H. I., Bossers, A., Rebel, J. M. Q fever diagnosis and control in domestic ruminants. Dev biol. 135, 183-189 (2013).
- Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physilo. 579, 893-907 (2007).
- Rurak, D., Bessette, N. W. Changes in fetal lamb arterial blood gas and acid-base status with advancing gestation. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R908-R916 (2013).
- Frasch, M. G., et al. Fetal body weight and the development of the control of the cardiovascular system in fetal sheep. J physiol. 579, 893-907 (2007).
- Frasch, M. G., et al. Measures of acidosis with repetitive umbilical cord occlusions leading to fetal asphyxia in the near-term ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 200, 200.e1-207.e1 (2009).
- The ESHRE Capri Workshop Group.
- Frasch, M. G. Re The perinatal development of arterial pressure in sheep: effects of low birth weight due to twinning. Reproductive sciences (Thousand Oaks, Calif.). 15, 863-865 (2008).
- Hancock, S. N., Oliver, M. H., McLean, C., Jaquiery, A. L., Bloomfield, F. H. Size at birth and adult fat mass in twin sheep are determined in early gestation. J Physiol. 590, 1273-1285 (2012).
- Wassink, G., Bennet, L., Davidson, J. O., Westgate, J. A., Gunn, A. J. Pre-existing hypoxia is associated with greater EEG suppression and early onset of evolving seizure activity during brief repeated asphyxia in near-term fetal sheep. PLoS One. 8, e73895 (2013).
- Mathai, S., et al. Acute on chronic exposure to endotoxin in preterm fetal sheep. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 304, R189-R197 (2013).
- Heuij, L. G., et al. Synergistic white matter protection with acute-on-chronic endotoxin and subsequent asphyxia in preterm fetal sheep. J neuroinflam. 11, 89 (2014).
- Gagnon, R., Challis, J., Johnston, L., Fraher, L. Fetal endocrine responses to chronic placental embolization in the late-gestation ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 170, 929-938 (1994).
- Miller, S. L., Supramaniam, V. G., Jenkin, G., Walker, D. W., Wallace, E. M. Cardiovascular responses to maternal betamethasone administration in the intrauterine growth-restricted ovine fetus. Am J Obstet Gynecol. 201, 613.e1-613.e8 (2009).
- Regnault, T. R., et al. The relationship between transplacental O2 diffusion and placental expression of PlGF, VEGF and their receptors in a placental insufficiency model of fetal growth restriction. J Physiol. 550, 641-656 (2003).
- Wallace, J. M., Aitken, R. P., Cheyne, M. A. Nutrient partitioning and fetal growth in rapidly growing adolescent ewes. J reprod and fertil. 107, 183-190 (1996).
- Rakers, F., et al. Effects of early- and late-gestational maternal stress and synthetic glucocorticoid on development of the fetal hypothalamus-pituitary-adrenal axis in sheep. Stress. 16, 122-129 (2013).
- Jiang, Y., et al. The sheep genome illuminates biology of the rumen and lipid metabolism. Science. 344, 1168-1173 (2014).
- Begum, G., et al. Epigenetic changes in fetal hypothalamic energy regulating pathways are associated with maternal undernutrition and twinning. FASEB J. 26, 1694-1703 (2012).
- Byrne, K., et al. Genomic architecture of histone 3 lysine 27 trimethylation during late ovine skeletal muscle development. Anim Genet. 45, 427-438 (2014).
- Lie, S., et al. Impact of embryo number and maternal undernutrition around the time of conception on insulin signaling and gluconeogenic factors and microRNAs in the liver of fetal sheep. Am J physiol Endocrinol. 306, E1013-E1024 (2014).
- Nicholas, L. M., et al. Differential effects of maternal obesity and weight loss in the periconceptional period on the epigenetic regulation of hepatic insulin-signaling pathways in the offspring. FASEB J. 27, 3786-3796 (2013).
- Wang, K. C., et al. Low birth weight activates the renin-angiotensin system, but limits cardiac angiogenesis in early postnatal life. Physiol rep. 3, (2015).
- Zhang, S., et al. Periconceptional undernutrition in normal and overweight ewes leads to increased adrenal growth and epigenetic changes in adrenal IGF2/H19 gene in offspring. FASEB J. 24, 2772-2782 (2010).
